1、離心機的原理和運用離心機的原理和運用 n實驗目的：了解離心機的原理和運用方法實驗目的：了解離心機的原理和運用方法n實驗原理：借助離心機旋轉所產生的離心實驗原理：借助離心機旋轉所產生的離心力，使不同大小和不同密度的物質分別力，使不同大小和不同密度的物質分別n用途：細胞的搜集、細胞碎片和沉淀的分用途：細胞的搜集、細胞碎片和沉淀的分別等常用離心分別別等常用離心分別n超速離心技術已成為分別、純化、鑒別和超速離心技術已成為分別、純化、鑒別和各種生物大分子的重要手段之一各種生物大分子的重要手段之一 一一 離心機的種類與用途離心機的種類與用途n速度：速度：n常速低速常速低速 30000r/min n轉子：轉

2、子：n固定角轉子固定角轉子Eixed-Angle-Rotorn主要用于分別沉降速度有明顯差別的顆粒樣主要用于分別沉降速度有明顯差別的顆粒樣品品n甩平轉子甩平轉子Siwing-Bucket-Rotorn主要用于樣品作密度梯度離心主要用于樣品作密度梯度離心 常速離心機常速離心機n1 常速離心機常速離心機n8000r/min, R.C.F1*104gn用途：分別細胞、細胞碎片、培育基殘用途：分別細胞、細胞碎片、培育基殘渣及粗結晶等較大顆粒渣及粗結晶等較大顆粒高速離心機高速離心機n2高速離心機高速離心機n1*104g2.5*104 r/min ，R.C.F 1*104g105gn用途：分別各種沉淀物、

3、細胞碎片及較用途：分別各種沉淀物、細胞碎片及較大的細胞器等大的細胞器等n高速冷凍離心機高速冷凍離心機超速離心機超速離心機n2.5*104g8*104 r/min ，R.C.F 5*105g或更或更高高n構造：離心管帽、冷凍安裝和溫控系統、真構造：離心管帽、冷凍安裝和溫控系統、真空系統、平安維護系統、制動系統、指示儀空系統、平安維護系統、制動系統、指示儀表等。表等。n按用途分：按用途分：n制備用超速離心機：分別純化生物大分子、制備用超速離心機：分別純化生物大分子、細胞器和病毒等細胞器和病毒等n分析用超速離心機：測定樣品純度根據紫分析用超速離心機：測定樣品純度根據紫外吸收率或折光率等判別、沉降系數

4、、相外吸收率或折光率等判別、沉降系數、相對分子量對分子量n沉降系數沉降系數S：單位離心力作用下粒子的：單位離心力作用下粒子的沉降速度，以沉降速度，以Svedberg表示，簡稱表示，簡稱S。1S=1*10-13sn沉降系數S與分子量M有對應關系，測出離心機轉速、離心時間和粒子挪動間隔，可求出S，再得到M二二 離心方法的選擇離心方法的選擇n對于常速和高速離心機，由于所分別的對于常速和高速離心機，由于所分別的顆粒大小和密度相差較大，只需選擇好顆粒大小和密度相差較大，只需選擇好離心速度和時間，就能到達分別效果。離心速度和時間，就能到達分別效果。n超速離心的離心方法：差速離心、密度超速離心的離心方法：差

5、速離心、密度梯度離心和等密度梯度離心梯度離心和等密度梯度離心 n1 差速離心差速離心n采用不同的離心速度和離心時間，使沉采用不同的離心速度和離心時間，使沉降速度不同的顆粒分批分別的方法。主降速度不同的顆粒分批分別的方法。主要用于分別大小和密度差別較大的顆粒。要用于分別大小和密度差別較大的顆粒。2 密度梯度離心密度梯度離心n樣品在密度梯度介質中進展離心，使沉樣品在密度梯度介質中進展離心，使沉降系數比較接近的物質得以分別的一種降系數比較接近的物質得以分別的一種區帶分別方法。區帶分別方法。n密度梯度系統：梯度介質有足夠大的溶密度梯度系統：梯度介質有足夠大的溶解度，不與分別組分反響，不會引起分解度，不

6、與分別組分反響，不會引起分別組分的凝集、變性或失活。別組分的凝集、變性或失活。n常用介質：蔗糖、甘油等。常用介質：蔗糖、甘油等。n樣品鋪在密度梯度溶液外表，離心后構樣品鋪在密度梯度溶液外表，離心后構成假設干條界面清楚的不延續區帶。成假設干條界面清楚的不延續區帶。3 等密度離心等密度離心n當欲分別的不同顆粒的密度范圍在離心當欲分別的不同顆粒的密度范圍在離心介質的密度梯度范圍內時，不同浮力密介質的密度梯度范圍內時，不同浮力密度的物質顆粒在離心力作用下不斷挪動度的物質顆粒在離心力作用下不斷挪動到與各自浮力密度相等的位置等密度到與各自浮力密度相等的位置等密度點，構成區帶。點，構成區帶。n等密度離心常用的介質：銫鹽，如等密度離心常用的介質：銫鹽，如CsCl，Cs2SO4，CsBr三三 離心條件確實定離心條件確實定n離心力轉速離心力轉速n離心時間離心時間n溫度溫度npHpH值值 n真空真空思索題思索題n1 名詞解釋名詞解釋n 離心分別離心分別 相對離心力相對離心力 沉降系數沉降系數n2 按離心機轉速分，離心機有哪些種類？按離心機轉速分，離心機有哪些種類？