1、第二節動物細胞工程動物細胞工程常用的技術手段有：動物細胞培養、動物細胞核移植、動物細胞融合、制備單克隆抗體等。其中,動物細胞培養技術是其他技術的基礎。一、動物細胞培養：1、概念：動物細胞培養就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后放在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和繁殖。2、動物細胞培養的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織剪碎t用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理，使其分散成單個細胞t制成細胞懸液t轉入培養瓶中進行原代培養t貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理分散成單個細胞繼續傳代培養。3、細胞懸液中的細胞貼附在瓶壁生長的現象，稱為細胞貼壁。當貼壁細胞分裂

2、生長到相互接觸時，細胞會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。4、目前用于保存的細胞通常是用傳代培養到10代以內的細胞,因為此時的細胞能保持正常的二倍體核型。在傳代培養到10-50代時，細胞代謝緩慢，多數細胞會死亡。若50代后仍有細胞能存活，則這部分細胞一定發生了遺傳物質的改變（即：突變），獲得了不死性，朝著等同于癌細胞的方向發展。5、動物細胞培養的條件： 無菌、無毒的環境：如何做到無菌？第一，培養液和培養用具應進行無菌處理；第二，通常還要在培養液中添加一定量的抗生素。如何做到無毒？應定期更換培養液，防止代謝產物積累對細胞自身造成危害。 營養:合成培養基成分中有：葡萄糖、氨基酸、促生長因子

3、、無機鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。 溫度和PH適宜溫度：哺乳動物一般與體溫相近;pH:7.27.4。 氣體環境：95%空氣+5%COQ是細胞代謝所必需的,CQ的主要作用是維持培養液的pH。6、動物細胞培養技術的應用：制備生物制品、檢測有毒物質、培養基因工程的受體細胞、培養醫學研究的各種細胞。二、動物細胞核移植：1. 動物細胞核移植的概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其形成重組細胞并最終發育為個體。用核移植技術得到的動物稱為克隆動物（屬于無性繁殖）。2. 選用去核卵（母）細胞的原因：卵（母）細胞比較大，容易操作：細胞質多，營養豐富3. 種類

4、：哺乳動物核移植可以分為4. 體細胞核移植的大致過程是：（右圖）1王面綿羊胚胎細胞核移植（比較容易）和體細胞核移植（比較難）。5. 體細胞核移植技術的應用: 加速家畜遺傳改良進程，促進良畜群繁育； 保護瀕危物種，增大存活數量； 轉基因克隆動物可作為乳腺生物反應器生產醫用蛋白； 轉基因克隆動物作為異種移植的供體； 核移植的胚胎干細胞經誘導分化用于組織器官的移植等。6. 體細胞核移植技術存在的問題：成功率低、克隆動物存在著健康問題、表現出遺傳和生理缺陷等。三、動物細胞融合：動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較:比較項目融合的原理誘導融合的方法意義應用植物體細胞雜交細胞膜的流動性物理法：離心、電刺激、

5、振動化學法：聚乙二醇克服了遠緣雜交的不親和性培育雜種植株動物細胞融合細胞膜的流動性物理法：離心、電刺激、振動化學法：聚乙二醇，生物法：滅活的病毒克服了遠緣雜交的不親和性制備單克隆抗體四、制備單克隆抗體:1. 抗體：一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體產量低、純度低、特異性差。特異性差。2.單克隆抗體的制備過程:(1)雜交瘤細胞的特點：既能大量繁殖，又能產生專一性的抗體。抗原注入小鼠體內分離已免疫的B淋巴細胞:骨髓瘤細胞(2)融合后的細胞有幾種類型?3.單克隆抗體的優點：3種。細胞融合選出雜交瘤細胞特異性強，靈敏度高，并能大量制備4.單克隆抗體的作用：克隆化培養與抗體陽性檢測

6、作為診斷試劑：作為診斷試劑：選出符合要求的雜交瘤細胞用于治療疾病和運載藥物用于治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，可制成“生物導彈”，即：單克隆抗體與抗癌藥物的結合體。注入小鼠體內培養從腹水提取培養基體外培養從培養液提取鞏固練習1、如圖是動物細胞培養的基本過程示意圖。請根據圖回答:鞏固練習1、如圖是動物細胞培養的基本過程示意圖。請根據圖回答:單克隆抗體(1) 容器B中用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，是為了。(2) 培養首先在C瓶中進行，這時的細胞培養稱為，懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為。細胞進行有絲分裂，數量不斷增多，當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象

7、稱為細胞的。為了把C瓶中的細胞分瓶，要用處理，目的是使細胞從瓶壁上脫離下來，然后配成，再分裝。(3) 分裝后，在D瓶中培養叫做。一般來說，細胞在傳至代左右時，增殖會逐漸緩慢，以至于完全停止，這時部分細胞的細胞核型可能會發生變化。少部分細胞會克服細胞壽命的自然極限，獲得不死性，朝著等同于的方向發展。目前使用的或冷凍保存的正常細胞通常為代以內，以保持。(4) 細胞培養需滿足的條件有。其中添加抗生素是為了，CO2的主要作用是維持培養液的。(5) 動物細胞培養技術有很多用途。許多生物制品如可借助動物細胞培養大規模生產，培養的動物細胞還可用于檢測。it倩福細I魁細胞2、為某同學根據雜交瘤技術的方法設計的

8、生產破傷風桿菌抗體的實驗方案，據圖回答相關問題。熨惴鋼胞(1) 該方案能達到預期效果嗎？，原因是抗怵抗怵(2) 圖中為過程，常用作為誘導劑，該細胞繼承了，因此不僅能分泌，還有的本領。(3) 破傷風桿菌的抗體最終可以從和中提取。(4) 該方案的目的是。3、1975年科學家首次利用B淋巴細胞雜交瘤技術制備出單克隆抗體。請根據圖回答問題：(1) 病原體注入小鼠體內后，要經過細胞處理后形成抗原一MHG復合體，才能被免疫細胞識別。(2) 制備單克隆抗體所用的B淋巴細胞一般從脾中采集，然后以作誘導劑,使B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合。通過篩選和克隆培養，獲得的雜交瘤細胞具有的特點是：(3) 單克隆抗體的特點是

9、4、現代生物技術制備H7N9病毒單克隆抗體的流程，請回答問題。4、現代生物技術制備H7N9病毒單克隆抗體的流程，請回答問題。如9病臥A®卅AHTN9it/S4閔一城原蛋白小乩卷體加絶城原蛋白小乩卷體加絶輸fel!-*體外焰基血克勝杭體(1) 過程表示，過程用到的工具酶是。構建基因表達載體時，目的基因的首端必須含有，它的作用是尾端必須有,標記基因的作用，過程常用的方法是，目的基因能否在受體細胞中穩定遺傳的關鍵是。(3)從分子水平上鑒定目的基因是否轉錄可采用技術，檢測目的基因是否翻譯成蛋白質采用的方法若要預防H7N9禽流感，可用圖中的作為疫苗。5、人類在預防與診療傳染性疾病過程中，經常使

10、用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原。疫苗生產和抗體制備的流程如下圖：(1)過程代表的是，過程構建A基因重組載體時，啟動子和終止子是重新構建的，其應該能被受體細胞的所識別，以便于其轉錄。(2) 在將X進行擴大培養之前，至少需要經過兩次篩選，方法分別是用和(3) 以實驗操作過程中用到的技術有(至少寫三個)。(4) 在給小鼠皮下注射A蛋白時，要重復注射幾次的目的是。(5) 對健康人進行該傳染病免疫預防時，可選用圖中基因工程生產的來制備疫苗。)(6) 對該傳染病疑似患者確診時，可以從疑似患者體內分離出病毒與已知病毒進行核酸序列比較，或用圖中的與分離出的病毒

11、進行特異性檢測。BtA蛋白的單克隆抗障皮下注射6、下面兩幅圖分別是單克隆抗體制備過程和克隆羊培育過程示意圖，請據圖回答下列問題:I圖甲圖乙圖甲和圖乙所示的過程中，都必須用到的動物細胞工程技術手段是(2)圖甲中過程常在誘導下完成，過程與體外培養相比，其優點是(3) 單克隆抗體能定向攻擊癌細胞，主要是利用其。(4) 若不考慮環境因素影響，克隆羊的性狀全部像白面綿羊嗎？。原因是。(5) 圖乙過程的技術具有多種用途，但是不能()A.有選擇地繁殖某一性別的家畜B.繁殖家畜中的優良個體C用于保存物種D改變動物的核基因在目前現有技術條件下，還不能將從動物體內分離出來的成熟的體細胞直接培養成一個新個你認為原因

12、最可能是體，而是必須將體細胞的細胞核移植到去核的卵細胞中才能發育成新個體,()A.卵細胞大，便于操作BC.卵細胞細胞質可使體細胞核全能性得到表達7、右圖是制備分泌抗X抗體的過程，據圖回答：(1)給小鼠注射抗原的目的是。(2)在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，是因為它們融合后的雜交瘤細胞具有和的特性。(3)由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了和的動物細胞工程技術手段。(4)在動物細胞融合過程中，需要將所選取的組織細胞離散開，以利于細胞融合，可用處理離體組織細胞使之分散開。(5)圖中有兩次篩選過程，其中步驟的目的是篩選出，步驟的目的是篩選出,而要獲得此種細胞需要進行哪兩項操

13、作？()A.卵細胞大，便于操作BC.卵細胞細胞質可使體細胞核全能性得到表達7、右圖是制備分泌抗X抗體的過程，據圖回答：(1)給小鼠注射抗原的目的是。(2)在單克隆抗體制備過程中之所以選用B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，是因為它們融合后的雜交瘤細胞具有和的特性。(3)由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運用了和的動物細胞工程技術手段。(4)在動物細胞融合過程中，需要將所選取的組織細胞離散開，以利于細胞融合，可用處理離體組織細胞使之分散開。(5)圖中有兩次篩選過程，其中步驟的目的是篩選出，步驟的目的是篩選出,而要獲得此種細胞需要進行哪兩項操作？.卵細胞含有的營養物質多D重組細胞才具有全能性帶有抗X抗體的鈿胞淋巴綢胞培養條件(在正常培養基中無限増殖TR能存活幾天在選擇培養基中死亡)