1、1中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容年版微生物內容 增修訂概況及執行中的問題增修訂概況及執行中的問題 天津市藥品檢驗所天津市藥品檢驗所 抗生素室抗生素室 曹曉云曹曉云 21101 1101 無菌檢查法無菌檢查法1105 1105 非無菌產品微生物限度檢查非無菌產品微生物限度檢查法：微生物計數法法：微生物計數法1106 1106 非無菌非無菌產品微生物限度限度檢查法：控制產品微生物限度限度檢查法：控制菌檢查法菌檢查法1107 1107 非無菌產品微生物限度標準非無菌產品微生物限度標準1121 1121 抑菌效力檢查法抑菌效力檢查法 （用于指導生產企業在研發制劑中抑菌劑濃度的確定）（用

2、于指導生產企業在研發制劑中抑菌劑濃度的確定）1421 1421 滅菌法滅菌法20152015年版微生物相關內容收載情年版微生物相關內容收載情況況1 1、6 6個通則個通則2 2、制劑通則中、制劑通則中9201 藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則9202 非無菌藥品微生物限度檢查指導原則非無菌藥品微生物限度檢查指導原則9203 藥品微生物實驗室質量管理指導原則藥品微生物實驗室質量管理指導原則9204 微生物鑒定指導原則微生物鑒定指導原則（新增）（新增）9205 藥品潔凈實驗室藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則微生物監測和控制指導原則（新增）（新增）9206

3、無菌檢查用隔離系統驗證指導原則無菌檢查用隔離系統驗證指導原則（新增）（新增）3、6個指導原則個指導原則制劑通則中各制劑項下制劑通則中各制劑項下【無菌無菌】、【微生物限度微生物限度】及抑菌劑效力檢查及抑菌劑效力檢查 4 4、品種正文、品種正文（原料、輔料、制劑）（原料、輔料、制劑）品種正文中的品種正文中的【無菌無菌】或或【微生物限度微生物限度】（檢查方法和限度，或指向通則）（檢查方法和限度，或指向通則）5 5、制藥用水、制藥用水滅菌注射用水滅菌注射用水 【無菌無菌】 注射用水、純化水注射用水、純化水 【微生物限度微生物限度】 6 6、藥包材、藥包材【無菌無菌】或或【微生物限度微生物限度】3p中國

4、藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況p20152015年版無菌檢查法執行中的問題年版無菌檢查法執行中的問題p20152015年版微生物限度執行中的問題年版微生物限度執行中的問題p相關通則主要內容相關通則主要內容p制藥用水、藥包材微生物檢測制藥用水、藥包材微生物檢測內容內容41101 1101 無菌檢查法無菌檢查法( (修訂修訂) )1105 1105 非無菌產品微生物限度檢查法：微生物計數法（修訂）非無菌產品微生物限度檢查法：微生物計數法（修訂）1106 1106 非無菌產品微生物限度限度檢查法：控制菌檢查法（修訂）非無菌產品微生物限度限度檢查法：控制菌

5、檢查法（修訂）1107 1107 非無菌產品微生物限度標準（修訂）非無菌產品微生物限度標準（修訂）1121 1121 抑菌效力檢查法（修訂）抑菌效力檢查法（修訂）1421 1421 滅菌法滅菌法( (未修訂未修訂) )9201 9201 藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則（未修訂）（未修訂）9202 9202 非無菌藥品微生物限度檢查指導原則（修訂）非無菌藥品微生物限度檢查指導原則（修訂）9203 9203 藥品微生物實驗室質量管理指導原則（修訂）藥品微生物實驗室質量管理指導原則（修訂）9204 9204 微生物鑒定指導原則微生物鑒定指導原則（新增）（新增）9

6、205 9205 藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則（新增）（新增）9206 9206 無菌檢查用隔離系統驗證指導原則無菌檢查用隔離系統驗證指導原則（新增）（新增）中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況5中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況一、整合20102010年版一、二、三部合一年版一、二、三部合一1101 1101 無菌檢查法無菌檢查法1105 1105 非無菌產品微生物限度檢查非無菌產品微生物限度檢查法：微生物計數法法：微生物計數法1106 1106 非無菌非

7、無菌產品微生物限度限度檢查法：控制產品微生物限度限度檢查法：控制菌檢查法菌檢查法1107 1107 非無菌產品微生物限度標準非無菌產品微生物限度標準1421 1421 滅菌法滅菌法20102010年版一、二部合一年版一、二部合一9201 9201 藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則9202 9202 非無菌藥品微生物限度檢查指導原則非無菌藥品微生物限度檢查指導原則9203 9203 藥品微生物實驗室質量管理指導原則藥品微生物實驗室質量管理指導原則6中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況二、檢驗方法與國際接軌，涵蓋標準和

8、方法的整體變化 無菌檢查法無菌檢查法 非無菌產品微生物限度檢查非無菌產品微生物限度檢查法：微生物計數法法：微生物計數法 非無菌非無菌產品微生物限度限度檢查法：控制產品微生物限度限度檢查法：控制菌檢查法菌檢查法 非無菌產品微生物限度標準非無菌產品微生物限度標準 抑菌效力檢查法（抑菌效力檢查法（20102010版為指導原則）版為指導原則） 藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則 藥品微生物實驗室質量管理指導原則藥品微生物實驗室質量管理指導原則20102010年版微生物限度年版微生物限度7中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況三

9、、新理念1、微生物限度的檢查結果為不符合規定時，不得復試。2、加強檢驗過程控制，增訂相關指導原則p微生物鑒定指導原則（新增）p藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則（新增）p無菌檢查用隔離系統驗證指導原則（新增）8p中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況p20152015年版無菌檢查法執行中的問題年版無菌檢查法執行中的問題p20152015年版微生物限度執行中的問題年版微生物限度執行中的問題p相關通則主要內容相關通則主要內容p制藥用水、藥包材微生物檢測制藥用水、藥包材微生物檢測內容內容920152015年版無菌檢查法執行中的問題年版無菌檢查法執行中的問

10、題1、試驗環境要求、試驗環境要求 20102010年版年版20152015年版年版無菌檢查應在無菌檢查應在環境潔凈度環境潔凈度1000010000級下的局級下的局部潔凈度部潔凈度100100級級的單向流空氣區域內或的單向流空氣區域內或隔隔離系統離系統中進行，其全過程應嚴格遵守無菌中進行，其全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品微生物的檢出。不得影響供試品微生物的檢出。無菌檢查應在無菌條件下進無菌檢查應在無菌條件下進行，試驗環境必須達到行，試驗環境必須達到無菌無菌檢查的要求檢查的要求，檢驗全過程應，檢驗全過程應嚴格遵守無菌操作。

11、嚴格遵守無菌操作。10 無菌檢查無菌檢查的試驗環境要求的試驗環境要求？ 通則通則9203 9203 藥品微生物實驗室質量管理指導原則藥品微生物實驗室質量管理指導原則 “環境環境” 1 1、實驗室的布局與運行、實驗室的布局與運行 微生物實驗的各項工作應在專屬的區域進行，以降低交叉污染、微生物實驗的各項工作應在專屬的區域進行，以降低交叉污染、假陽性結果和假陰性結果出現的風險。假陽性結果和假陰性結果出現的風險。無菌檢查應在無菌檢查應在B B級背景下的級背景下的A A級單向流潔凈區域或級單向流潔凈區域或隔離系統隔離系統中進行。中進行。 20102010年版年版 20152015年版年版 萬級下的局部百

12、級（萬級下的局部百級（A+CA+C） A+A+B B或隔離器（建議或隔離器（建議D D級）級） 1、試驗環境要求、試驗環境要求20152015年版無菌檢查法執行中的問題年版無菌檢查法執行中的問題11p單向流空氣區域、工作臺面及環境應單向流空氣區域、工作臺面及環境應定期定期按醫藥工業潔凈室按醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現行（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現行國家標準國家標準進行潔凈度確認。進行潔凈度確認。p隔離系統應隔離系統應定期定期按相關的要求進行驗證，其內部環境的潔凈度按相關的要求進行驗證，其內部環境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。須符合無菌檢查的要求。p

13、日常日常檢驗還需對實驗環境進行監控。檢驗還需對實驗環境進行監控。通則通則9205 藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則通則通則9206 無菌檢查用隔離系統驗證指導原則無菌檢查用隔離系統驗證指導原則1 1、試驗環境監控、試驗環境監控122、無菌檢查法首選薄膜過濾法、無菌檢查法首選薄膜過濾法 包括薄膜過濾法和直接接種法。包括薄膜過濾法和直接接種法。 只要供試品性質允許，應采用只要供試品性質允許，應采用薄膜過濾法。薄膜過濾法。 一般應采用封閉式薄膜過濾器。一般應采用封閉式薄膜過濾器。3、進行產品的無菌檢查時，應進行培養基適用性檢查和方、進行產品的無菌檢查時，應

14、進行培養基適用性檢查和方法適用性試驗。法適用性試驗。4、檢驗數量和檢驗量、檢驗數量和檢驗量 采用薄膜過濾法時，只要供試品性質允許，應將所有容采用薄膜過濾法時，只要供試品性質允許，應將所有容器內容物過濾。器內容物過濾。 20152015年版無菌檢查法執行中的問題年版無菌檢查法執行中的問題134、檢驗數量和檢驗量、檢驗數量和檢驗量 檢驗數量檢驗數量 檢驗量檢驗量 指一次試驗所用供試品最小包指一次試驗所用供試品最小包裝裝容器的數量容器的數量。除另有規定外，。除另有規定外，出廠產品按出廠產品按表表1 1規定；上市產規定；上市產品監督檢驗按品監督檢驗按表表2 2規定。表規定。表1 1、表表2 2中最少檢

15、驗數量不包括陽中最少檢驗數量不包括陽性對照試驗的供試品用量。性對照試驗的供試品用量。 供試品每個最小包裝接種至每份培養基的最小量（供試品每個最小包裝接種至每份培養基的最小量（g g或或mlml）。除另有規定外，供試品檢驗量按表）。除另有規定外，供試品檢驗量按表3 3規定。若每規定。若每支（瓶）供試品的支（瓶）供試品的裝量裝量按規定按規定足夠接種兩種培養基，足夠接種兩種培養基，則則應分別接種硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培應分別接種硫乙醇酸鹽流體培養基和胰酪大豆胨液體培養基。采用養基。采用薄膜過濾法薄膜過濾法時，只要供試品特性允許，應將時，只要供試品特性允許，應將所有容器內的所有容器內的全

16、部內容物過濾全部內容物過濾。144、檢驗數量和檢驗量、檢驗數量和檢驗量 （表（表1-11-1）154、檢驗數量和檢驗量、檢驗數量和檢驗量 （表（表1-21-2）165、保留生物制品無菌檢查的特點、保留生物制品無菌檢查的特點 除陰性對照外除陰性對照外藥品藥品生物制品生物制品樣品檢測樣品檢測1 130303535硫乙硫乙 硫乙硫乙 2 220202525/ /硫乙硫乙 3 320202525TSBTSBTSBTSB陽性對照陽性對照4 430303535硫乙硫乙 硫乙硫乙 176、培養基體系的修訂、培養基體系的修訂7、風險評估和偏差調查的要求、風險評估和偏差調查的要求8、無菌檢查結果一次檢出為準，不

17、得復試。、無菌檢查結果一次檢出為準，不得復試。 僅在充分證明試驗結果無效后方可重新試驗。僅在充分證明試驗結果無效后方可重新試驗。 18 供試品的檢查供試品的檢查培養基適用性檢查培養基適用性檢查 試驗菌液制備試驗菌液制備方法適用性試驗方法適用性試驗 19p中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況p20152015年版無菌檢查法執行中的問題年版無菌檢查法執行中的問題p20152015年版微生物限度執行中的問題年版微生物限度執行中的問題p相關通則主要內容相關通則主要內容p制藥用水、藥包材微生物檢測制藥用水、藥包材微生物檢測內容內容20通則通則1105-非無菌產

18、品微生物限度檢查：微生物計數法非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法1 1、微生物計數培養基與定義的修訂微生物計數培養基與定義的修訂20102010年版年版20152015年版年版細菌數：細菌數：- -生長在營養瓊脂培養基上生長在營養瓊脂培養基上的菌落的菌落需氧菌總數：需氧菌總數：- -生長在胰酪大豆胨瓊脂培養基（生長在胰酪大豆胨瓊脂培養基（TSATSA）上的所有菌落（細）上的所有菌落（細菌、霉菌和酵母菌菌落數）菌、霉菌和酵母菌菌落數）霉菌和酵母菌數：霉菌和酵母菌數：- -生長在玫瑰紅鈉瓊脂培養生長在玫瑰紅鈉瓊脂培養基上的菌落基上的菌落霉菌酵母菌總數：霉菌酵母菌總數：- -生長在沙氏葡萄糖瓊脂

19、培養基上的所有菌落（包括細菌菌生長在沙氏葡萄糖瓊脂培養基上的所有菌落（包括細菌菌落）。落）。若因沙氏葡萄糖瓊脂培養基上生長的細菌使霉菌和若因沙氏葡萄糖瓊脂培養基上生長的細菌使霉菌和酵母菌的計數結果不符合微生物限度要求，可使用含抗生酵母菌的計數結果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養基或其他選擇性培養基（如玫瑰素的沙氏葡萄糖瓊脂培養基或其他選擇性培養基（如玫瑰紅鈉瓊脂培養基進行測定）紅鈉瓊脂培養基進行測定） 。20152015年版微生物限度執行中的問題年版微生物限度執行中的問題21 2 2、試驗環境、試驗環境 20102010年版藥典：年版藥典： 環境潔凈度環境潔凈度萬級萬級

20、下的局部潔凈度下的局部潔凈度百級百級單向流空氣區域內進行。單向流空氣區域內進行。 20152015年版藥典：年版藥典： 微生物計數微生物計數試驗環境應符合微生物限度檢查的要求。試驗環境應符合微生物限度檢查的要求。 222 2、試驗環境、試驗環境微生物限度檢查微生物限度檢查的試驗環境要求的試驗環境要求？ 通則通則9203 9203 藥品微生物實驗室質量管理指導原則藥品微生物實驗室質量管理指導原則 “環境環境” 1 1、實驗室的布局與運行、實驗室的布局與運行 微生物限度檢查應在不低于微生物限度檢查應在不低于D D級背景下的級背景下的B B級單向流空氣區域級單向流空氣區域內進行。內進行。 20102

21、010年版年版 20152015年版年版萬級下的局部百級（萬級下的局部百級（A+CA+C） D D級背景下的級背景下的B B級級( (B+DB+D） 232 2、試驗環境、試驗環境 單向流空氣區域、工作臺面及環境應定期進行監測。單向流空氣區域、工作臺面及環境應定期進行監測。 新增新增 通則通則9205-9205- 藥品潔凈實驗室微生物監測和控制藥品潔凈實驗室微生物監測和控制指導原則指導原則24 3 3、培養基及檢驗方法適用性試驗、培養基及檢驗方法適用性試驗 培養基和供試品檢測所選方法的適用性須經確認。培養基和供試品檢測所選方法的適用性須經確認。 方法適用性試驗（方法驗證）方法適用性試驗（方法驗

22、證） 試驗組菌落數與菌液對照組菌落數的比值應在試驗組菌落數與菌液對照組菌落數的比值應在0.50.52 2范圍內。范圍內。 加菌步驟提前，加菌量為供試品體積的加菌步驟提前，加菌量為供試品體積的1%1%，難度更大。，難度更大。 4 4、陰性對照、陰性對照 如果陰性對照有菌生長，應進行偏差調查。如果陰性對照有菌生長，應進行偏差調查。 255 5、菌種和菌液的制備、菌種和菌液的制備菌株菌株中國藥典中國藥典 協調案協調案枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilisBacillus subtilisCMCC(B)63CMCC(B)63 501501ATCC6633ATCC6633金黃色葡萄

23、球菌金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureusStaphylococcus aureusCMCC(B)26CMCC(B)26 003003ATCC6538ATCC6538銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosaCMCC(B)10CMCC(B)10 104104ATCC9027ATCC9027白色念珠菌白色念珠菌Candida albicansCandida albicansCMCC(F)98CMCC(F)98 001001ATCC10231ATCC10231黑曲霉黑曲霉 Aspergillus niger A

24、spergillus nigerCMCC(F)98CMCC(F)98 003003ATCC16404ATCC16404265 5、菌種和菌液的制備、菌種和菌液的制備 原則：原則： 中國藥典中國藥典20152015年版通則年版通則9203-9203-藥品微生物實驗室質量管理指導原則藥品微生物實驗室質量管理指導原則 菌種菌種 “藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內或國外菌種保藏機構的藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內或國外菌種保藏機構的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業派生標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的可以溯源的商業派生菌株菌株” 。標準菌株的商業衍

25、生物僅可用作工作菌株。標準菌株的商業衍生物僅可用作工作菌株。276 6、培養條件、培養條件20102010版版20152015版版細菌細菌30303535培養培養3 3天天霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌232328 28 培養培養5 5天天 ，必要時可適當延長必要時可適當延長7 7天天 。除另有規定外，除另有規定外，需氧菌總數需氧菌總數 30303535，培養培養3 35 5天天；霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌總數總數20202525培養培養，5 5天天7 7天。天。28 各品種項下要求執行的微生物限度各品種項下要求執行的微生物限度標準解釋標準解釋如下：如下： 10 101 1cfucfu： 可接受的最大

26、限度為可接受的最大限度為2020； 10 102 2cfucfu： 可接受的最大限度為可接受的最大限度為200200； 10 103 3cfucfu： 允許的最大限度為允許的最大限度為 2000 2000：依此類推。：依此類推。7 7、結果判斷、結果判斷29 關于限度標準的表述方式關于限度標準的表述方式 微生物限度標準以微生物限度標準以1010的指數形式表示：的指數形式表示： 10 101 1cfucfu： 可接受的最大限度為可接受的最大限度為2020； 10 102 2cfucfu： 可接受的最大限度為可接受的最大限度為200200； 10 103 3cfucfu： 允許的最大限度為允許的最

27、大限度為 20002000：依此類推。：依此類推。 問題問題 3 310104 4cfu cfu 可接受的最大限度為可接受的最大限度為 標準表述為數字的，按數字執行，如，純化水。標準表述為數字的，按數字執行，如，純化水。 取本品不少于取本品不少于1 ml1 ml，經薄膜過濾法處理，采用，經薄膜過濾法處理，采用 R2AR2A瓊瓊脂培養基，脂培養基，30303535培養不少于培養不少于5 5天，依法檢查（通則天，依法檢查（通則11051105），）， 1 ml1 ml供試品中需氧菌總數不得過供試品中需氧菌總數不得過100 cfu100 cfu。 30 限度標準與檢驗結果的書寫限度標準與檢驗結果的書

28、寫 限度標準限度標準 檢驗結果檢驗結果1010的的n n次冪可接受的最大菌數為次冪可接受的最大菌數為2 2倍倍 按科學計數法按科學計數法 6.96.910102 2cfucfu具體數字表示即為具體數字表示即為具體數字具體數字 690690cfu兩種表示方式兩種表示方式 兩種表示方式相等兩種表示方式相等例，內控標準例，內控標準1000cfu/g1000cfu/g 書寫方式書寫方式5 510102 700cfu/g 700cfu/g 合格？合格？ 10001000318 8、不得復試，無相關內容、不得復試，無相關內容32通則通則1106-1106-非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法非無菌產品微

29、生物限度檢查：控制菌檢查法 1 1、培養基變化培養基變化 在增菌過程，使用無選擇性增菌培養基培養。疑似菌增加，工作在增菌過程，使用無選擇性增菌培養基培養。疑似菌增加，工作量加大。量加大。 2 2、結果判斷方式變化結果判斷方式變化 在各控制菌項下：改為在各控制菌項下：改為“較少的生化實驗較少的生化實驗”，以及，以及“應進一步進行應進一步進行適宜的鑒定試驗適宜的鑒定試驗” 。 較大變動較大變動 3 3、以、以“耐膽鹽革蘭陰性菌耐膽鹽革蘭陰性菌” ，取代，取代“大腸菌群大腸菌群”。20152015年版微生物限度執行中的問題年版微生物限度執行中的問題33通則通則1107-1107-非無菌藥品微生物標準

30、非無菌藥品微生物標準1 1、需氧菌總數限度放寬，部分霉菌和酵母菌限度提高、需氧菌總數限度放寬，部分霉菌和酵母菌限度提高20152015年版微生物限度執行中的問題年版微生物限度執行中的問題34非無菌不含藥材原粉的中藥制劑微生物限度標準非無菌不含藥材原粉的中藥制劑微生物限度標準非無菌化學藥品及生物制品微生物限度標準非無菌化學藥品及生物制品微生物限度標準( (表表1) 1)制劑類型制劑類型需氧菌需氧菌霉菌、酵母菌霉菌、酵母菌控制菌控制菌口服給藥固口服給藥固/ /液體液體10103 310102 210102 210101 1不得檢出大腸埃希菌；不得檢出大腸埃希菌；含臟器提取物的制劑還不得檢出含臟器提

31、取物的制劑還不得檢出沙門菌沙門菌口腔黏膜口腔黏膜/ /齒齦齒齦/ /鼻用鼻用10102 210101 1不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌胞菌耳用耳用/ /皮膚皮膚10102 210101 1不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌呼吸道吸入呼吸道吸入10102 210101 1不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、不得檢出大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、銅綠假單胞菌、耐膽鹽革蘭氏陰性菌耐膽鹽革蘭氏陰性菌陰道陰道/ /尿道尿道10102 210101 1不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念

32、不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、珠菌、梭菌（中藥制劑）梭菌（中藥制劑）直腸給藥固直腸給藥固/ /液體液體10103 310102 210102 210102 2不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌其他局部給藥其他局部給藥10102 210102 2不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌不得檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌局部用藥局部用藥注注 化學藥品制劑和生物制品制劑若含有未經化學藥品制劑和生物制品制劑若含有未經提取提取的動植物來源的成分及礦物質還不得檢查的動植物來源的成分及礦物質還不得檢查沙門菌沙門菌。35非無菌含藥材原粉的中藥制劑微生物限

33、度標準（表非無菌含藥材原粉的中藥制劑微生物限度標準（表2 2）制劑類型制劑類型需氧菌需氧菌霉菌、酵母菌霉菌、酵母菌控制菌控制菌固體口服給藥固體口服給藥- -含含豆豉神曲等發酵原粉豆豉神曲等發酵原粉- -不含不含豆豉神曲等發酵原粉豆豉神曲等發酵原粉10105 510104 4（丸劑（丸劑3 310104 4）5 510102 210102 2大腸埃希菌，大腸埃希菌，沙門菌沙門菌，耐膽鹽的陰性菌應小于耐膽鹽的陰性菌應小于10102 2個個液體口服給藥液體口服給藥- -含含豆豉神曲等發酵原粉豆豉神曲等發酵原粉- -不含不含豆豉神曲等發酵原粉豆豉神曲等發酵原粉10103 35 510102 21010

34、2 210102 2大腸埃希菌，大腸埃希菌，沙門菌沙門菌，耐膽鹽的陰性菌應小于耐膽鹽的陰性菌應小于10101 1個個固體局部給藥固體局部給藥- -表皮或黏膜表皮或黏膜完整完整- -表皮或黏膜表皮或黏膜不完整不完整10104 410103 310102 210102 2金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌，陰道陰道& &尿道給藥制劑不得檢出白色念珠尿道給藥制劑不得檢出白色念珠菌、梭菌。菌、梭菌。液體局部給藥液體局部給藥- -表皮或黏膜表皮或黏膜完整完整- -表皮或黏膜表皮或黏膜不完整不完整10102 2 10102 2金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞

35、菌，陰道陰道& &尿道給藥制劑不得檢出白色念珠尿道給藥制劑不得檢出白色念珠菌、梭菌。菌、梭菌。National Institute of Food and Drug ControlHttp:/36不得檢出沙門菌：不得檢出沙門菌：口服制劑口服制劑含臟器提取物含臟器提取物含有未經提取的動物、植物及礦物質來源的成分含有未經提取的動物、植物及礦物質來源的成分含生粉的中藥制劑含生粉的中藥制劑耐膽鹽革蘭陰性菌：耐膽鹽革蘭陰性菌：口服制劑口服制劑表表1 1：呼吸道吸入給藥制劑：呼吸道吸入給藥制劑 不得檢出（定性）不得檢出（定性） 表表2 2：固體制劑固體制劑 10102 2cfu/g cfu/g （定量）（

36、定量） 液體制劑液體制劑 10101 1cfu/g cfu/g （定量）（定量） 37指數形式表示指數形式表示 標準放寬標準放寬固體：不易繁殖，標準最低。固體：不易繁殖，標準最低。局部：粘膜系統或易感部位局部：粘膜系統或易感部位特殊用藥途徑特殊用藥途徑 較高（較高（霉酵提高霉酵提高）液體：易繁殖，標準較高（液體：易繁殖，標準較高（霉酵提高霉酵提高）38非無菌產品微生物限度標準 原輔料、飲片-限度.doc中藥飲片：中藥研粉口服用貴細飲片、直接口服及泡服飲片39p中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況p20152015年版無菌檢查法執行中的問題年版無菌檢查

37、法執行中的問題p20152015年版微生物限度執行中的問題年版微生物限度執行中的問題p相關通則主要內容相關通則主要內容p制藥用水、藥包材微生物檢測制藥用水、藥包材微生物檢測內容內容40相關通則主要內容相關通則主要內容-通則通則11211121抑菌效力檢查法抑菌效力檢查法1、將原指導原則，修訂為檢查法。對抑菌劑的選擇和抑菌效力的監控更加重視。2、用于指導生產企業在研發階段制劑中抑菌劑濃度的確定。3、分三類，每類分A和B標準。 注射劑、眼用制劑、用于子宮和乳腺的制劑。 耳用制劑、鼻用制劑、皮膚給藥制劑、吸入制劑。 口服制劑、口腔黏膜制劑、直腸給藥制劑。41相關通則主要內容相關通則主要內容-通則通則

38、92029202非無菌藥品微生物限度檢查指導原則非無菌藥品微生物限度檢查指導原則1、控制菌檢查法沒有規定進一步確證疑似致病菌的方法。 若供試品檢出疑似致病菌，確證方法應選擇已被認可的菌種鑒定方法，如，細菌鑒定一般依據伯杰氏系統細菌學手冊。2、用于手術、燒傷及嚴重創傷的局部給藥制劑應符合無菌檢查法要求。對創傷程度難以判斷的如沒證據證明藥品不存在安全性風險那么該藥品應符合無菌檢查要求。3、在制定原輔料微生物限度標準時，應根據原輔料的微生物污染特性、用途、相應制劑的生產工藝及特性等因素，還需控制具有潛在危害的致病菌。42相關通則主要內容相關通則主要內容-通則通則92039203藥品微生物實驗室質量管

39、理指導原則藥品微生物實驗室質量管理指導原則用于指導藥品微生物檢驗實驗室的質量控制。1.名稱“藥品微生物實驗室規范指導原則”修訂為“藥品微生物實驗室質量管理指導原則”43相關通則主要內容相關通則主要內容-通則通則92039203藥品微生物實驗室質量管理指導原則藥品微生物實驗室質量管理指導原則2. 2. 整體框架整體框架修訂前：人員、培養基、菌種、實驗室的布局和運行、設備、文件、實修訂前：人員、培養基、菌種、實驗室的布局和運行、設備、文件、實驗記錄、結果的判斷驗記錄、結果的判斷修訂后：人員、培養基、修訂后：人員、培養基、試劑試劑、菌種、菌種、環境環境、設備、設備、樣品樣品、檢驗方法、檢驗方法、污染

40、廢棄物處理、檢測結果質量保證和檢測過程質量控制污染廢棄物處理、檢測結果質量保證和檢測過程質量控制、實驗記錄、實驗記錄、結果的判斷和結果的判斷和檢測報告檢測報告、文件。、文件。44相關通則主要內容相關通則主要內容-通則通則92049204微生物鑒定指導原則微生物鑒定指導原則 為非無菌產品微生物限度檢查中控制菌的鑒定，以及藥為非無菌產品微生物限度檢查中控制菌的鑒定，以及藥物原料、輔料、制藥用水、生產環境、中間體和終產品中物原料、輔料、制藥用水、生產環境、中間體和終產品中檢出微生物的鑒定提供指導。檢出微生物的鑒定提供指導。 1 1、微生物的鑒定結果以、微生物的鑒定結果以伯杰氏系統細菌學手冊伯杰氏系統

41、細菌學手冊第二第二版版( (BergeyBergeys Manual of Systematic Bacteriologys Manual of Systematic BacteriologySecond Edition)Second Edition)為準。為準。 2 2、鑒定程序：分離純化、初篩試驗、表型鑒定、基因型、鑒定程序：分離純化、初篩試驗、表型鑒定、基因型鑒定。鑒定。 3 3、溯源分析、溯源分析45相關通則主要內容相關通則主要內容-通則通則92059205藥品潔凈室微生物監測和控制指導原則藥品潔凈室微生物監測和控制指導原則 用于指導藥品微生物檢驗用潔凈室等受控環境微生物污用于指導藥品

42、微生物檢驗用潔凈室等受控環境微生物污染情況的監測和控制。染情況的監測和控制。 1 1、人員要求、人員要求 2 2、初次使用的潔凈實驗室參數確認、初次使用的潔凈實驗室參數確認 3 3、監測、監測: :微生物檢測方法、監測頻次及監測項目、監測標微生物檢測方法、監測頻次及監測項目、監測標準、警戒限和糾偏限、數據分析及偏差處理、微生物鑒定準、警戒限和糾偏限、數據分析及偏差處理、微生物鑒定 4 4、微生物控制、微生物控制46相關通則主要內容相關通則主要內容-通則通則92069206無菌檢查用隔離系統驗證指導原則無菌檢查用隔離系統驗證指導原則 是為藥典要求無菌的藥品、生物制品、原料、輔料、及是為藥典要求無

43、菌的藥品、生物制品、原料、輔料、及其他品種無菌檢查用隔離系統的驗證提供指導。其他品種無菌檢查用隔離系統的驗證提供指導。 無菌隔離系統從根本上避免了操作人員與實驗用物品的無菌隔離系統從根本上避免了操作人員與實驗用物品的直接接觸。直接接觸。 1 1、隔離器的結構、隔離器的結構 2 2、隔離器的安裝位置的選擇、隔離器的安裝位置的選擇 3 3、隔離系統驗證、隔離系統驗證 4 4、隔離器的應用、隔離器的應用47p中國藥典中國藥典20152015年版微生物內容增修訂概況年版微生物內容增修訂概況p20152015年版無菌檢查法執行中的問題年版無菌檢查法執行中的問題p20152015年版微生物限度執行中的問題

44、年版微生物限度執行中的問題p相關通則主要內容相關通則主要內容p制藥用水、藥包材微生物檢測制藥用水、藥包材微生物檢測內容內容 制藥用水制藥用水是藥品生產中用量最大、使用最廣的一種輔料，貫穿于生是藥品生產中用量最大、使用最廣的一種輔料，貫穿于生產的全過程。藥典所收載的制藥用水，根據因其使用的范圍不同而分產的全過程。藥典所收載的制藥用水，根據因其使用的范圍不同而分為飲用水、純化水、注射用水及滅菌注射用水。為飲用水、純化水、注射用水及滅菌注射用水。 制藥用水的原水通常為飲用水。制藥用水的原水通常為飲用水。 制藥用水微生物檢驗方法的制藥用水微生物檢驗方法的修訂修訂主要涉及主要涉及純化水純化水及及注射用水

45、注射用水。 制藥用水微生物檢驗方法與標準制藥用水微生物檢驗方法與標準 1 1、美國藥典和歐洲藥典方法情況、美國藥典和歐洲藥典方法情況 美國藥典通則美國藥典通則12311231制藥用水中，彈性標準，推薦方法給出的是高制藥用水中，彈性標準，推薦方法給出的是高營養類型的培養基營養類型的培養基TSATSA。 歐洲藥典明確規定的是歐洲藥典明確規定的是R2AR2A培養基。培養基。 2 2、制藥用水微生物檢驗方法課題研究結果、制藥用水微生物檢驗方法課題研究結果課題研究框架課題研究框架 課題組通過對課題組通過對1313家家制藥企業的純化水系統共計制藥企業的純化水系統共計90 90 個水樣，采用不同個水樣，采用

46、不同的的培養基體系培養基體系、培養條件培養條件以及以及檢測方法檢測方法進行實驗研究，共取得了進行實驗研究，共取得了5 5000000多個實驗數據。多個實驗數據。1313家制藥企業涵蓋了國內制藥企業、中外合資家制藥企業涵蓋了國內制藥企業、中外合資制藥企業、外資制藥企業以及醫院制劑室，且地域分布適宜，具有較制藥企業、外資制藥企業以及醫院制劑室，且地域分布適宜，具有較好的代表性。好的代表性。 課題研究重點考察內容課題研究重點考察內容 （培養體系、方法、國產進口不同廠家培養基）（培養體系、方法、國產進口不同廠家培養基） 1 1）培養體系的三要素）培養體系的三要素 培養基培養基 3 3種種 TSA R2

47、A TSA R2A 營養瓊脂營養瓊脂 培養溫度培養溫度 2 2個個 202025 3025 303535 培養時間培養時間 4 4個個 48h 72h 96h 120h 48h 72h 96h 120h 課題試驗結果課題試驗結果 考察培養體系的三要素的結果：考察培養體系的三要素的結果： 從統計結果來看，從統計結果來看，3 3要素中對計數結果起主導作用的是要素中對計數結果起主導作用的是培培養時間養時間，無論哪種培養基、培養溫度，只要延長培養時間，無論哪種培養基、培養溫度，只要延長培養時間，都能使計數結果數值增大，但相同培養時間，不同培養要素都能使計數結果數值增大，但相同培養時間，不同培養要素（培

48、養基種類和培養溫度）的兩兩組合對實驗結果仍有影響。（培養基種類和培養溫度）的兩兩組合對實驗結果仍有影響。將將134134組有效數據進行統計，結果表明，組有效數據進行統計，結果表明，R2AR2A，30303535，120hr120hr表觀累加計數結果數值最高表觀累加計數結果數值最高。 20 20組有效數據采用組有效數據采用ExcelExcel作配對作配對t t檢驗（顯著性水平為檢驗（顯著性水平為0.050.05），統計），統計結果表明，結果表明，2 2種檢測方法的計數結果均種檢測方法的計數結果均無顯著性差異無顯著性差異（P P0.050.05）。）。 平皿法和薄膜過濾法結果無顯著差異（高污染水平

49、）平皿法相具有平皿法和薄膜過濾法結果無顯著差異（高污染水平）平皿法相具有費用低、檢測方法簡便的優勢薄膜過濾法相比平皿法的優勢在于檢測費用低、檢測方法簡便的優勢薄膜過濾法相比平皿法的優勢在于檢測更大的樣本量，以保證所得到的數據更具有統計學意義。更大的樣本量，以保證所得到的數據更具有統計學意義。平皿法平皿法薄膜過濾法薄膜過濾法R2AR2A，30303535，120hr120hrR2AR2A，30303535，120hr120hrTSATSA，30303535，72hr72hrTSATSA，30303535，72hr72hr2 2）考察不同的檢測方法計數結果差異）考察不同的檢測方法計數結果差異 水系

50、統微生物監測的目的，是要持續提供足夠的有關水系統微生物監測的目的，是要持續提供足夠的有關制藥用水中微生物監控的數據，來制訂微生物污染的警戒制藥用水中微生物監控的數據，來制訂微生物污染的警戒限和行動限水平，并用于趨勢分析，使得水系統的微生物限和行動限水平，并用于趨勢分析，使得水系統的微生物數量可以控制在一定的水平。因此，認為在低污染水平的數量可以控制在一定的水平。因此，認為在低污染水平的水系統則更適合選擇樣本量大的水系統則更適合選擇樣本量大的薄膜過濾法薄膜過濾法，持續跟蹤水，持續跟蹤水系統的微生物狀態。系統的微生物狀態。新修訂方法及在執行過程中可能遇到的問題新修訂方法及在執行過程中可能遇到的問題

51、 純化水純化水質量標準的修訂質量標準的修訂 修訂前修訂前 修訂后修訂后取本品，采用薄膜過濾法處理取本品，采用薄膜過濾法處理后，依法檢查（附錄后，依法檢查（附錄 J J），細），細菌、霉菌和酵母菌總數每菌、霉菌和酵母菌總數每1ml1ml不不得過得過100 100 個。個。取本品不少于取本品不少于1 ml1 ml，經薄膜過濾法，經薄膜過濾法處理，采用處理，采用 R2AR2A瓊脂培養基，瓊脂培養基，30-30-3535培養培養不少于不少于5 5天天，依法檢查，依法檢查（通則（通則11051105），）， 1 ml1 ml供試品中需氧供試品中需氧菌總數不得過菌總數不得過100 cfu100 cfu。新修訂方法及在執行過程中可能遇到的問題新修訂方法及在執行過程中可能遇到的問題 純化水質量標準的修訂純化水質量標準的修訂 R2A R2A瓊脂培養基適用性試驗瓊脂培養基適用性試驗 照非無菌產品微生物限度檢查：微生物計照非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數（通則數（通則11051105）中）中“計數培養基適用性檢查計數培養基適用性檢查”的胰酪大豆胨瓊脂培養基的適的胰酪大豆胨瓊脂培養基的適用性檢查方法進行，試驗菌株為用性檢查