1、(八 細菌鑒定中常用的生理生化反應(實驗9¾目的要求學習并掌握細菌分類鑒定中常用的生理生化反應。¾實驗原理同種的細菌具有相同或相近的表型特征(形態、生理特征、代謝產物等細菌的代謝與呼吸,主要取決于酶的催化作用,各種細菌具有不同的酶系統。不同的細菌分解大分子碳水化合物、蛋白質和脂肪的能力不同,所能發酵的類型和終產物也不一樣。細菌代謝類型的多樣性,具體表現在生化反應多樣性,因此在細菌分類鑒定中,常利用其生理生化反應作為重要依據。糖發酵試驗9在腸道細菌的鑒定上尤為重要9細菌可發酵的基質糖(葡萄糖、蔗糖、乳糖醇(甘露醇糖苷(甘油9發酵后產生的有機酸乳酸、醋酸、丙酸等9發酵后產生的氣

2、體甲烷、氫、二氧化碳等1. 葡萄糖發酵試驗2. 乳糖發酵試驗指示劑:溴甲酚紫(變色范圍pH5.2-6.8,pH<5.2黃色,pH>6.8紫色安裝倒立的杜氏小管(內充滿液體pH<5.2, 溶液由清亮紫色變為渾濁黃色乳酸、醋酸、丙酸葡萄糖/乳糖甲烷、氫、二氧化碳杜氏小管內有氣泡,產氣漂浮細菌在糖代謝過程中,分解葡萄糖,所產生的丙酮酸,可被進一步代謝。細菌體內丙酮酸代謝途徑的不同,可通過V.P. 和M.R. 這一對實驗進行鑒別。丙酮酸再被分解為甲酸、乙酸、乳酸等。酸的產生可加入指示劑甲基紅(變色范圍pH4.2-6.3,pH<4.2紅色,pH>6.3黃色顯示。培養液由原來

3、的黃色變為紅色。5. H2S產生試驗判斷細菌是否能分解培養基中的含硫氨基酸。6. 吲哚產生試驗判斷細菌是否(含色氨酸酶能利用色氨酸。實驗材料1. 大腸桿菌(Escherichia coli2. 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis3. 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus 4. 普通變形桿菌(Proteus vulgaris實驗方法與步驟(一液體培養基的制備與滅菌1糖發酵液體培養基:葡萄糖/乳糖 1.0 g蛋白胨 1.0 gNaCl0.5 gH2O 100 mL調pH 7.4,然后加1.6 % 溴甲酚紫乙醇溶液調至溶液呈淺紫色;裝倒立的杜氏小管(裝時不能有氣泡

4、2葡萄糖蛋白胨培養基:葡萄糖0.5 g蛋白胨0.5 gK2HPO40.5 gH2O100 mL pH 自然,溶液呈黃色0.05MPa壓力(108.8,滅菌20 min產H2S試驗用培養基3產硫化氫實驗液體培養基牛肉膏0.5 g蛋白胨 1.0 gNaCl0.5 g胱氨酸0.01 g(用0.1M HCl配制1%胱氨酸母液1 mL H2O 100 mLpH 7.40.05MPa壓力(108.8,滅菌30 min吲哚產生試驗用培養基4胰蛋白胨水培養基:胰蛋白胨 1.0 g(含有豐富的色氨酸,價格貴H2O100 mLpH 7.2-7.40.05MPa壓力(108.8,滅菌30 min(三反應結果鑒定9葡萄糖/乳糖發酵試驗,H2S產生試驗:直接觀察。9VP試驗:去塞,加40%KOH 15滴,振蕩,再加等量-奈酚,振蕩,37振蕩培養30min,觀察。9MR試驗:加甲基紅試劑2-3滴,觀察。9吲哚試驗:加1ml乙醚(作用是萃取出吲哚。振蕩,靜止片刻使分層,沿管壁慢慢加入吲哚試劑10滴,觀察。教學內容1. 葡萄糖發酵2. 乳糖發酵5. H2