1、歐洲葡萄的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究                                 作者：李占軍 布仁 張金花 薛培鳳【摘要】  目的建立歐洲葡萄中齊墩果酸的薄層色譜鑒別方法和含量測定方法。并測定不同產(chǎn)地的歐洲葡萄中齊墩果酸的含量。方法采用薄層色譜法（TLC）鑒別，

2、并采用高效液相色譜（HPLC）法測定其含量。結(jié)果測得歐洲葡萄中齊墩果酸含量為0.36%以上,平均回收率為98.33% ,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.59%。結(jié)論該方法操作簡便,結(jié)論可靠,可用于歐洲葡萄的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】  歐洲葡萄 齊墩果酸 薄層色譜 高效液相色譜Abstract：ObjectiveTo establish a TLC method for identification and an HPLC method for content determination of oleanolic acid from Vitis vinifera L.MethodsTLC was

3、 used to identify and HPLC was employed to determine the content. ResultsContent of oleanolic acid in Vitis vinifera L. was above 0.36%, the average recovery was 98.33% with RSD 1.59% (n=5). ConclusionThe method is simple, convenient and accurate and can be used for the quality control of Vitis vini

4、fera L.Key words：Vitis vinifera L；   Oleanolic acid；   TLC；  HPLC“歐洲葡萄”名稱源于其植物名，蒙藥名“烏珠木”1，為歐洲葡萄Vitis vinifera L.的干燥果實。歐洲葡萄以蒙藥“貢布如木”載于認(rèn)藥白晶鑒，無誤蒙藥鑒稱其“莖長，狀如鐵線蓮，纏繞，葉圓且大，花紅色很小，故難碰見，果實紅紫色，果皮極薄，每串果實近百粒大小如黃豆，黃色，無核者為佳”。中華本草·蒙藥卷以“葡萄干”（蒙藥名“烏珠木”）收載本品1。內(nèi)蒙古植物藥志內(nèi)蒙古植物志亦收載本品23。據(jù)中華本草·

5、;蒙藥卷記載，本品可清肺熱，止咳平喘，滋補(bǔ)強(qiáng)身。主治肺熱咳嗽，痰盛氣喘，肺水腫，疹熱，濕熱煩渴1。歐洲葡萄廣泛運用于蒙醫(yī)臨床和生產(chǎn)，但目前對歐洲葡萄尚無完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。    歐洲葡萄果實中含有葡萄糖、果糖，少量蔗糖、木糖，酒石酸、草酸、枸櫞酸、蘋果酸，各種花色素的單葡萄糖苷和雙葡萄糖苷，亦含蛋白質(zhì)、鈣、磷、鐵、錳、胡蘿卜素、硫胺素、核黃色、尼克酸、維生素C。葡萄皮中含矢車菊素、芍藥花素、飛燕草素。種子含脂肪油。又含焦性兒茶酚、沒食子兒茶酚、沒食子兒茶精、沒石子酸鹽等。尚含亮氨酸、酪氨酸。另含矢車菊酚低聚物1。此外，含白藜蘆醇、齊墩果酸、原花青素4。齊墩果酸做為歐

6、洲葡萄中的生物活性成分之一，其含量高低與歐洲葡萄的功效具有直接的關(guān)系，故以齊墩果酸為對照品，分別建立歐洲葡萄的薄層色譜鑒別方法和高效液相含量測定方法。1  器材1.1  儀器大連依利特公司提供依利特高效液相色譜儀（P230高壓恒流泵，UV230+紫外-可見檢測器，EC2000色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)）；北京慧易德公司提供kromasil色譜（kromasil100-5C-18, 5 m, 250 mm×4.6 mm）；1.2  試劑試藥齊墩果酸對照品購自藥品生物制品檢定所（批號110709-200304）;流動相所用甲醇為Fisher公司提供的色譜純試劑;水為市

7、售娃哈哈純凈水;硅膠G（青島海洋化工公司）；其他試劑試藥均為分析純。1.3   歐洲葡萄藥材于20060810分別采摘于呼和浩特土左旗和托克托縣，部分采購于呼市天力藥材公司，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)教研室龐究生教授鑒定，均為蒙醫(yī)習(xí)用歐洲葡萄正品。2  方法和結(jié)果2.1  薄層色譜鑒別取本品粉末約1 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，加甲醇10 ml,密塞，靜置30 min，超聲提取15 min，濾過，用20 ml甲醇分次洗滌容器和殘渣，水浴揮干溶劑，殘渣用3 ml甲醇溶解，搖勻，作為供試品溶液。另取齊墩果酸對照品適量，加醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對

8、照品溶液。吸取上述供試品溶液、對照品溶液各510 l，分別點于同一0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液制成的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷丙酮醋酸乙酯(521)為展開劑，預(yù)飽和30 min，展開，取出，晾干，置日光或紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色斑點。見圖1。1         2.2  含量測定精密稱取28.0 mg齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品，置10 ml容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。分別精密吸取上述儲備液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml

9、置10 ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，制成不同濃度的對照品溶液。稱取干燥的歐洲葡萄粉末約1 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，加甲醇10 ml,密塞，靜置30 min，超聲提取15 min，濾過，用20 ml甲醇分次洗滌容器和殘渣，水浴揮干溶劑，用甲醇轉(zhuǎn)溶于10 ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密量取上述對照品溶液各20 l進(jìn)樣,以色譜峰面積(Y)對濃度(X)進(jìn)行回歸，齊墩果酸的線性回歸方程為Y =2 465.6X +51.159, r =0.999 7，線性范圍為0.1400.700 mg/ml。取同一份本品供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，20 l/次，測得齊墩果酸峰面積RSD為0.34%

10、 ，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。取同一批歐洲葡萄藥材5份，按供試品溶液方法制備，分別進(jìn)樣20 l，測定齊墩果酸的含量RSD為1.73% ，表明該方法的重復(fù)性較好。取同一供試品5份，分別加入齊墩果酸對照品，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣20 l，得回收率分別為98.33% ，RSD1.59%。結(jié)果見表1。表1  加樣回收率測定結(jié)果（略）3   討論3.1  流動相pH值選擇本實驗考察了不同濃度的冰醋酸和磷酸，最終確定以甲醇-水-磷酸（9460.1）的峰形最好，且無干擾峰。3.2  方法學(xué)考察本實驗考察了不同種類和不同濃度的溶媒，不同溶媒量，不同的提取時間；對超聲提取與加熱回流兩種方法也作了比較。最后確定以10 ml甲醇為溶媒，靜置30 min后超聲15 min提取效率最高。齊墩果酸是中蒙藥中一種重要的藥效成分。 歐洲葡萄為常用蒙藥之一，以齊墩果酸為對照品的薄層色譜法的建立，為歐洲葡萄的定性鑒別提供了一種快速有效的方法。采用HPLC法測定歐洲葡萄中齊墩果酸的含量，方法穩(wěn)定、快速、重現(xiàn)性好、雜質(zhì)干擾小，適合歐洲葡萄中齊墩果酸的含量測定，可作為歐洲葡萄的一種質(zhì)量控制手段。【】  1國家中醫(yī)藥管理局，中華本草編委會.中華本草