1、Westernblot一抗和二抗的選擇抗體分類：根據(jù)重鏈恒定區(qū)的血清學(xué)類型，可將抗體分為IgM，IgG，IgA，IgD，IgE五類，它們的重鏈分別為mu,gamma,alpha,delta,epsilon鏈。在上述每一類別中，按重鏈構(gòu)造上的變異又可分為幾個(gè)亞類，例如人的IgG可分為IgG1，IgG2，IgG3，IgG4四個(gè)亞類。輕鏈分為兩種類型，kappa鏈和lambda鏈，但每種抗體中只存在一種類型的輕鏈。二抗：二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以應(yīng)用廣泛，如westernblot（通過(guò)與特異性抗體

2、結(jié)合來(lái)鑒定蛋白質(zhì)），ELISA（以耦聯(lián)有酶的抗體或抗原為標(biāo)記來(lái)檢測(cè)特異性的蛋白質(zhì)，尤其是相應(yīng)的抗原或抗體），免疫組織化學(xué)（檢測(cè)組織中的特異性抗原），免疫細(xì)胞化學(xué)（通過(guò)免疫學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞的抗原組成），流式細(xì)胞術(shù)（通過(guò)檢測(cè)激光所激發(fā)熒光來(lái)鑒定分離不同類型的細(xì)胞）及免疫沉淀（通過(guò)抗原與抗體的特異性結(jié)合作用來(lái)分離相應(yīng)抗原）。二抗針對(duì)某一特定物種（如小鼠）的所有抗體均具有特異性，因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用；此外，一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子，從而使信號(hào)大大增強(qiáng)，提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。二，如何選擇二抗根據(jù)一抗種屬及類型選擇合適的二抗廣義上是指專門和進(jìn)行特異性反

3、應(yīng)和結(jié)合的抗體，在免疫學(xué)反應(yīng)中，經(jīng)常需要針對(duì)試驗(yàn)選擇不同的二抗，*捷能為您的科研工作提供最適合和最全面的二抗產(chǎn)品。檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時(shí)在后繼試驗(yàn)中也會(huì)有不同的檢測(cè)方案，因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測(cè)方案的要求，一般來(lái)說(shuō)，選擇合適的二抗需要從下面幾個(gè)方面考慮：【一抗的種屬來(lái)源】二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體，則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。*捷能為您提供最全的抗不

4、同種屬的原裝進(jìn)口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、綿羊、人、豚鼠、豬、馬、牛、雞、鴨等二抗。【一抗的類別亞型】二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對(duì)單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會(huì)在產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中都會(huì)有描述，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對(duì)這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以選擇抗IgG1的二抗，此種抗體在

5、雙標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應(yīng)物種IgG。*捷能為您提供通用的IgG（H+L）二抗，或者特異性只結(jié)合IgM的AntiIgM（mu）Antibody、IgA的AntiIgA（alpha-Antibody、IgE的AntiIgE（epsilon）Antibody等。【二抗的種屬來(lái)源】一般來(lái)說(shuō)，不同的種屬來(lái)源與二抗的質(zhì)量沒(méi)有必然的聯(lián)系，來(lái)源于山羊的二抗與來(lái)源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒(méi)有太多的差別。然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里，如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里，如果其中一個(gè)一抗是山羊來(lái)源的，一個(gè)是小鼠來(lái)源的，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時(shí)候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來(lái)源

6、的。有相應(yīng)的驢來(lái)源的二抗，非常適合做類似雙標(biāo)的免疫實(shí)驗(yàn)。【二抗的耦聯(lián)標(biāo)記】1 / 3一般來(lái)講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團(tuán)（FITC、Rhodamine、TexasRed、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于WesternBlot和ELISA，最常用的二抗是酶標(biāo)二抗；而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（細(xì)胞免疫化學(xué)，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)）中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過(guò)氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào)，可以使用

7、Biotin/Avidin檢測(cè)系統(tǒng)。在一些熒光檢測(cè)方案中，則需要選擇不同的熒光標(biāo)記；而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。*捷能為您提供上述所有不同類型標(biāo)記的二抗。【是否經(jīng)過(guò)血清吸附過(guò)的二抗】為減少二抗與樣本的非特異性結(jié)合，*捷還能為您提供不同血清吸附的原裝進(jìn)口二抗。如您的檢測(cè)樣本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗就需要選擇抗小鼠源的二抗，如果您對(duì)實(shí)驗(yàn)的特異性要求很高，那我們向您推薦經(jīng)過(guò)人血清吸附過(guò)的抗小鼠源的二抗，這種二抗由于經(jīng)過(guò)人血清吸附而排除了與人源組織（如IgG等）可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的IgG，因此將非特異性結(jié)合降低到最低。一，一抗的選擇檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗

8、體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮如下幾種因素：分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型l樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)l樣本的種屬l抗體宿主的種類l抗體的標(biāo)記和檢測(cè)l1.分析試驗(yàn)應(yīng)用的類型一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WBIHCICCELASA分析等，如果抗體說(shuō)明書(shū)沒(méi)有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證，如果抗體不適用某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說(shuō)明書(shū)上標(biāo)注出來(lái)不適于某分析試驗(yàn)。2.樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體，至少兩方面因素需要考慮待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫

9、原免疫宿主而制備得來(lái)，其中的免疫原包括：全長(zhǎng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，抗體說(shuō)明書(shū)一般都有免疫原的描述，如果打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FACS流式檢測(cè)活細(xì)胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來(lái)免疫制備的抗體。l樣本的提取或處理過(guò)程：某些抗體要求樣本經(jīng)過(guò)某些特殊處理，例如：許多抗體只識(shí)別還原和變性的、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅識(shí)別天然折疊狀態(tài)的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時(shí)，應(yīng)注意某些抗體只識(shí)別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則適用于無(wú)需抗原修復(fù)

10、解交聯(lián)步聚的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會(huì)在抗體說(shuō)明書(shū)上應(yīng)用部分標(biāo)示出來(lái)l3.樣本的物種應(yīng)選擇物種相同或有交叉反應(yīng)的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應(yīng)，因其氨基酸序列同源性較高，如果樣本的種類未列入抗體說(shuō)明書(shū)上的交叉反應(yīng)種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過(guò)，應(yīng)通過(guò)序列比對(duì)的方法來(lái)預(yù)測(cè)交叉反應(yīng)，可應(yīng)用Expasy和NCBIBLAST來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。4.一抗宿主物種的選擇一般說(shuō)來(lái)，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種選擇較為重要，對(duì)于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)，例如：檢測(cè)小鼠樣本蛋白，則不應(yīng)選擇小鼠或大鼠源的一抗，最好選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測(cè)分子（酶、熒光素、生物素等）的抗兔IgG。如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測(cè)方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對(duì)不含IgG的細(xì)胞裂解物樣本的westernblotting檢測(cè)，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白，還原變性樣本中含IgG，在westernblot檢測(cè)中則結(jié)合出現(xiàn)Ig