1、精選優質文檔-傾情為你奉上土壤硝態氮的測定-酚二黃酸比色法1、 方法原理土壤浸提液中NO3-N在蒸干無水的條件下能與酚二磺酸試劑作用，生成硝基酚二磺酸： C6H3OH(HSO3)2 + HNO3 C6H2OH(HSO3)2NO2 + H2O 2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸此反應必須在無水條件下才能迅速完成，反應產物在酸性介質中無色，堿化后則為穩定的黃色溶液，黃色深淺與NO3-N含量在一定范圍內成正相關，可在400-425nm處（或用藍色濾光片）比色測定。酚二磺酸法的靈敏度很高，可測出溶液中0.1mg/L NO3-N，測定范圍為0.1-2mg/L。2、 主要儀器分光光度計、水浴鍋、

2、瓷蒸發皿3、 試劑CaSO4·2H2O（分析純、粉狀）、CaCO3（分析純、粉狀）、Ca（OH）2（分析純、粉狀）、MgCO3（分析純、粉狀）、Ag2SO4（分析純、粉狀）、1:1NH4OH、活性炭（不含NO3-）。酚二磺酸試劑：稱取白色苯酚（C6H5OH，分析純）25.0g置于500ml三角瓶中，以150ml純濃硫酸溶解，再加入發煙硫酸75ml，并置于沸水浴中加熱2h，可得酚二磺酸溶液，儲于棕色瓶中保存。使用時須注意其強烈的腐蝕性。如無發煙硫酸，可用酚25.0g，加濃硫酸225ml，沸水浴中加熱6h配成。試劑冷后可能析出結晶，用時須重新加熱溶解，但不可加水，試劑必須貯于密閉的玻塞棕

3、色瓶中，嚴防吸濕。10 g/ml NO3-N標準溶液：準確稱取KNO3（二級）0.7221g溶于水，定容1L，此為100 g/ml NO3-N溶液，將此溶液準確稀釋10倍，即為10g/ml NO3-N溶液。4、 操作步驟（1）浸提。稱取新鮮土樣50g放在500ml三角瓶中，加入CaSO4·2H2O 0.5g和250ml水，蓋塞后，用振蕩機振蕩10min。放置5min后，將懸液的上部清液用干濾紙過濾，澄清的濾液收集在干燥潔凈的三角瓶中。如果濾液因有機質而呈現顏色，可加活性炭除之。（2）測定。吸取清液25-50ml（含NO3-N 20-150g）于瓷蒸發皿中，加CaCO3約0.05g，在

4、水浴上蒸干，到達干燥時不應繼續加熱。冷卻，迅速加入酚二磺酸試劑2ml，將皿旋轉，使試劑接觸到所有蒸干物。靜止10min使其充分作用后，加水20ml，用玻璃棒攪拌直到蒸干物完全溶解。冷卻后緩緩加入1:1 NH4OH并不斷攪拌混勻，至溶液呈微堿性（溶液顯黃色）再多加2ml，以保證NH4OH試劑過量。然后將溶液全部轉入100ml容量瓶中，加水定容。在分光光度計上用光徑1cm比色杯在波長420nm處比色，以空白溶液作參比，調節儀器零點。NO3-N工作曲線繪制：分別取10 g/ml NO3-N標準溶液0、1、2、5、10、15、20ml于蒸發皿中，在水浴上蒸干，與待測液相同操作，進行顯色和比色，繪制成標

5、準曲線，或用計算器求出回歸方程。5、 計算 土壤中NO3-N含量（mg/kg）=(NO3-N)×V×ts/m式中：（NO3-N）-從標準曲線上查得（或回歸所求）的顯色液NO3-N質量濃度（g/ml）； V-顯色液的體積（ml）； ts-分取倍數； m-烘干樣品質量，g。注釋：注1:硝酸根為陰離子，不為土壤膠體吸附，且易溶于水，很易在土壤內部移動，在土壤剖面上下層中移動頻繁，因此測定硝態氮時應注意采樣深度。即不僅要采集表層土壤，而且要采集心土和底土，采樣深度可達40cm、60cm以致120cm。試驗證明，旱地土壤上分析全剖面的硝態氮含量能更好地反映土壤的供氮水平。和表層土壤比

6、較，則全剖面的硝態氮含量與生物反應之間有更好的相關性，土壤經風干或烘干易引起NO3-N變化，故一般都用新鮮土樣測定。注2：用酚二磺酸法測定硝態氮，首先要求浸提液清徹，不能混濁，但是一般中性或堿性土壤濾液不易澄清，且帶有機質顏色，為此在浸提液中應加入凝聚劑。凝聚劑的種類有很多，有CaO、Ca(OH)2、CaCO3、MgCO3、KAl(SO4)2、CuSO4、CaSO4等，其中CuSO4有防止生物轉化的作用，但在過濾前必須以氫氧化鈣或碳酸鎂除去多余的銅，因此以CaSO4法提取較為方便。注3：如果土壤浸提液由于有機質而有較深的顏色，則可用活性炭除去，但不宜用H2O2，以防最后顯色時反常。注4：土壤中

7、的亞硝酸根和氯離子是本法的主要干擾離子。亞硝酸和酚二磺酸產生同樣的黃色化合物，但一般土壤中亞硝酸含量極少，可忽略不計。必要時可加少量尿素、硫尿和氨基磺酸(20g/LNH2SO3H)以除去之。例如亞硝酸根如果超出了1g/ml時，一般每10ml待測液中加入20mg尿素，并放置過夜。以破壞亞硝酸根。檢查亞硝酸根的方法：可取待測液5滴于白瓷板上，加入亞硝酸根試粉0.1g，用玻璃棒攪拌后，放置10min，如有紅色出現，即有1mg/L亞硝酸根存在。如果紅色極淺或無色，則可省去破壞亞硝酸根手續。 NO3-+3Cl-+4H+NOCl+Cl2+H2O 亞硝酰氯Cl-對反應的干擾，主要是在加酸后生成亞硝酰氯化合物或其它氯的氣體。如果土壤中含氯化合物超過15mg/kg，則必須加Ag2SO4除去，方法是每100ml浸出液中加入Ag2SO4 0.1g(0.1gAg2SO4可沉淀22.72mgCl-)搖動15min，然后加入Ca(OH)2 0.2g及MgCO3 0.5g，以沉淀過量的銀，搖動5min后過濾，繼續按蒸干顯色步驟進行。注5：在蒸干過程中加入碳酸鈣是為了防止硝態氮損失。因為在酸性和中性條件下蒸干易導致硝酸離子的分解，如果浸出液含銨鹽較多，更易產生負誤差。注6：此反應必須在無水