1、可見(jiàn)光及紫外光分光光度法測(cè)定丁香總黃酮含量的研究(一)【關(guān)鍵詞】 丁香；,總黃酮；,可見(jiàn)光分光光度法；,紫外分光光度法,摘要：目的研究可見(jiàn)光及紫外分光光度法測(cè)定丁香總黃酮含量的方法。方法可見(jiàn)光分光光度法是以蘆丁為參照品，硝酸鋁作顯色劑，在510 nm波長(zhǎng)測(cè)定總黃酮含量。紫外分光光度法是以蘆丁為參照品，在359 nm波長(zhǎng)測(cè)定總黃酮含量。結(jié)果可見(jiàn)光法平均回收率是99.46% , 紫外光法是99.13%。RSD分別是1.15 % 和0.90%。結(jié)論 紫外分光光度法是一種較理想的測(cè)定方法。關(guān)鍵詞：丁香； 總黃酮； 可見(jiàn)光分光光度法； 紫外分光光度法 Study on the Determination

2、 of Flavonoid in Eugenia caryophyllata Thunb. by VIS and UV SpectrophotometryAbstract：ObjectiveTo determine total flavonoid content in Eugenia caryophyllata Thunb. by VIS and UV Spectrophotometry.MethodsThe contrast sample of VIS Spectrophotometry was rutin, the revealing agent was Al(NO3)3 and the

3、analyzed wavelength was 510 nm. The contrast sample of UV Spectrophotometry was rutin and the analyzed wavelength was 359 nm.ResultsThe average recoveries of VIS and UV Spectrophotometry were 99.46% and 99.13%.The RSD were 1.15 % and 0.90%.ConclusionUV Spectrophotometry is a gooel method for detecti

4、on of total flavonoid content in Eugenia caryophyllata Thunb. .Key words：Eugenia caryophyllata Thunb.； Flavonoid； VIS Spectrophotometry； UVSpectrophotometry丁香Eugenia caryophyllata Thunb.又名丁子香、支解香、公丁香。丁香分布于馬來(lái)群島及非洲，我國(guó)廣東、廣西等地均有栽培。丁香中含有酚類、石竹烯、甲基正戊基酮、水楊酸甲酯和黃酮等物質(zhì)。丁香性溫，味辛, 有溫中、曖腎、降逆的功能 1。目前報(bào)道的測(cè)定植物中黃酮含量的方法主

5、要是可見(jiàn)光分光光度法2，但可見(jiàn)光及紫外光分光光度法測(cè)定丁香總黃酮含量的方法未見(jiàn)報(bào)道。本文采用可見(jiàn)光與紫外光分光光度法測(cè)定丁香中總黃酮含量，并對(duì)兩種方法進(jìn)行了比較，擬尋找一種準(zhǔn)確而簡(jiǎn)便的測(cè)定丁香中黃酮含量的方法。1 儀器與試劑1.1 儀器上海惠普6010型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；上海二分7230G可見(jiàn)光分光光度計(jì)；北京賽多利斯電子分析天平；索氏抽提器；PHILIPS7120S粉碎機(jī)。1.2 試劑與樣品蘆丁對(duì)照品從廣州中醫(yī)藥大學(xué)藥物化學(xué)研究所購(gòu)買,蘆丁含量98%；其它試劑均為分析純。丁香樣品購(gòu)于廣州，經(jīng)粉碎后過(guò)60目篩，在60 烘箱干燥6 h后冷卻備用。2 方法2.1 樣品處理精確稱取丁香粉末1.00

6、0 0 g，在索氏抽提器中經(jīng)石油醚脫脂到無(wú)色，放冷后轉(zhuǎn)出石油醚，加入80 ml無(wú)水甲醇，抽提至無(wú)色。提取液全部轉(zhuǎn)移到100 ml容量瓶，用無(wú)水甲醇定容作為試液待用。2.2 可見(jiàn)光分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取120干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品250 mg, 用無(wú)水甲醇溶解,轉(zhuǎn)移入250 ml容量瓶中, 用無(wú)水甲醇定容，搖勻精確移取5.00 ml至50 ml容量瓶中，用無(wú)水甲醇定容，搖勻。此蘆丁對(duì)照品溶液濃度為0.1 mg?ml-1。準(zhǔn)確吸取0.1 mg?ml-1蘆丁對(duì)照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml,分別置25 ml容量瓶中,各加50 %乙醇至6

7、 ml，分別加5 %亞硝酸鈉溶液1.00 ml，搖勻,放置6 min后分別加10%硝酸鋁溶液1.00 ml，搖勻,放置6 min,再分別加1 %氫氧化鈉溶液10.00 ml，再用50 %乙醇定容，搖勻，放置15 min后,以空白溶液為參比，在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)吸光度，得回歸方程。2.3 可見(jiàn)光分光光度法回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取5份已知總黃酮含量的丁香粉末1.000 0 g,加入一定量的蘆丁對(duì)照品,按照2.1所述制得樣品液,按照2.2所述顯色并測(cè)定吸光度, 由回歸方程計(jì)算總黃酮含量,按回收率（實(shí)測(cè)值樣品所含的總黃酮）/加入的蘆丁100 %。2.4 可見(jiàn)光分光光度法樣品的總黃酮含量測(cè)定分別準(zhǔn)確吸取1

8、.00 ml試液置25 ml容量瓶中, 按照2.2所述顯色并測(cè)定吸光度，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A,由回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量。2.5 紫外光分光光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取120干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品96.4 mg， 用無(wú)水甲醇溶解，轉(zhuǎn)移入100 ml容量瓶中, 用無(wú)水甲醇定容,搖勻精確移取10.00100 ml容量瓶中，用無(wú)水甲醇定容，搖勻。此蘆丁對(duì)照品溶液濃度為0.096 4 mg?ml-1。 準(zhǔn)確吸取濃度0.096 4 mg?ml-1蘆丁對(duì)照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，6.00 ml， 分別置25 ml容量瓶中, 各加無(wú)水甲醇定容，在359 nm處

9、測(cè)吸光度，得回歸方程。2.6 紫外光分光光度法回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取5份已知總黃酮含量的丁香粉末1.000 0 g,加入一定量的蘆丁對(duì)照品,按照2.1所述制得樣品液,用無(wú)水甲醇稀釋樣品液，在359 nm處測(cè)吸光度，由回歸方程計(jì)算總黃酮含量,按回收率（實(shí)測(cè)值樣品所含的總黃酮）/加入的蘆丁100 %。2.7 紫外光分光光度法樣品的總黃酮含量測(cè)定分別準(zhǔn)確吸取1.00 ml試液置25 ml容量瓶中, 用無(wú)水甲醇稀釋定容，在359 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A，由回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮含量。3 結(jié)果3.1 可見(jiàn)光分光光度法將配制好的不同濃度的蘆丁對(duì)照品溶液在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A，得回歸方程為：A=-0

10、.011 5+0.020 62C （A為吸光度，C為濃度mg?L-1），相關(guān)系數(shù)r=0.999 7。這表明蘆丁濃度在4 24 mg/L范圍內(nèi)線性良好。3.2 紫外光分光光度法將配制好的不同濃度的蘆丁對(duì)照品溶液在359 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度A，得回歸方程為：A=0.000 405 4+0.027 18C（A為吸光度，C為濃度mg?L-1），相關(guān)系數(shù)r=0.999 7。這表明蘆丁濃度在424 mg/L范圍內(nèi)線性良好。3.3 樣品的總黃酮含量測(cè)定 黃酮類化合物具有特定的紫外吸收帶，其結(jié)構(gòu)中的肉桂酰環(huán)產(chǎn)生的帶在300400 nm內(nèi)，由苯甲酰環(huán)產(chǎn)生的帶在240285 nm內(nèi)，不同的黃酮在這兩個(gè)吸收帶的吸

11、收強(qiáng)度不同3。含黃酮類化合物的原料經(jīng)一定的提取純化后，可直接于最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，以蘆丁為對(duì)照品對(duì)照計(jì)算其含量4。本實(shí)驗(yàn)選擇蘆丁在帶的最大吸收波長(zhǎng)359 nm作為紫外光分光光度法的測(cè)量波長(zhǎng)。取不同產(chǎn)地的丁香樣品, 分別用可見(jiàn)光分光光度法和紫外光分光光度法對(duì)每個(gè)樣品平行測(cè)定3次,RSD=1.09 %,各個(gè)樣品的總黃酮含量結(jié)果見(jiàn)表1。表1 不同產(chǎn)地的丁香樣品的總黃酮含量測(cè)定結(jié)果（略）從表1可見(jiàn)，不同產(chǎn)地的丁香全草的總黃酮含量有一定差異，其中以廣東丁香2號(hào)黃酮含量最高,而廣西丁香1號(hào)黃酮含量最低。用可見(jiàn)光分光光度法測(cè)得的總黃酮含量總是比用紫外光分光光度法測(cè)得的總黃酮含量要稍高，這可能因?yàn)榭梢?jiàn)

12、光分光光度法是在強(qiáng)堿性溶液與鋁離子反應(yīng)后顯色, 而丁香又含酚類,酚羥基在該條件下也能夠與鋁離子結(jié)合,在510 nm處也被吸收,這樣就導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏高5。3.4 回收率實(shí)驗(yàn) 把一定量的蘆丁對(duì)照品加入已知總黃酮含量的廣東丁香2號(hào)中做回收率實(shí)驗(yàn)，由表2可見(jiàn)，回收率范圍符合定量分析要求。表2 廣東丁香2號(hào)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)（略）4 結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，可見(jiàn)光分光光度法和紫外光分光光度法兩種方法測(cè)定丁香總黃酮含量都有較好的線性關(guān)系。紫外光分光光度法能直接測(cè)定黃酮的含量，不需用硝酸鋁顯色，從而能夠避免丁香中酚羥基的干擾，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，是測(cè)定丁香總黃酮含量較佳的方法。參考文獻(xiàn)：1 劉德軍.中藥材綜合開(kāi)發(fā)技術(shù)與利用M.北京： 中國(guó)中醫(yī)藥出版社，1998：229.2