1、1.基因工程專項練習 2017.12.281.（2017，全國）真核生物基因中通常有內含子，而原核生物基因中沒有，原核生物沒有真核生物所具有的切除內含子對應的RNA序列的機制。已知在人體中基因A(有內含子)可以表達出某種特定蛋白(簡稱蛋白A)?；卮鹣铝袉栴}：(1)某同學從人的基因組文庫中獲得了基因A，以大腸桿菌作為受體細胞卻未得到蛋白A，其原因是_。(2)若用家蠶作為表達基因A的載體，在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中，不選用_作為載體，其原因是_。(3)若要高效地獲得蛋白A，可選用大腸桿菌作為受體，因為與家蠶相比，大腸桿菌具有_(答出兩點即可)等優點。(4)若要檢測基因A是否翻譯出蛋白A，可用的檢

2、測物質是_(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗體”)。(5)艾弗里等人的肺炎雙球菌轉化實驗為證明DNA是遺傳物質做出了重要貢獻，也可以說是基因工程的先導，如果說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示，那么，這一啟示是_。2.（2017，全國）幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：(1)在進行基因工程操作時，若要從植物體中提取幾丁質酶的mRNA，常選用嫩葉而不選用老葉作為實驗材料，原因是_。提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是_。(2)以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是_。

3、(3)若要使目的基因在受體細胞中表達，需要通過質粒載體而不能直接將目的基因導入受體細胞，原因是_(答出兩點即可)。(4)當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是_。(5)若獲得的轉基因植株(幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是_。3.（2016，全國）某一質粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導致相應的基因失活（Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環素抗性基因）。有人將此質粒載體用BamH I酶切后，與用BamHI酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應，用得到的混合物直接轉

4、化大腸桿菌。結果大腸桿菌有的未被轉化，有的被轉化。被轉化的大腸桿菌有三種，分別是含有環狀目的基因、含有質粒載體、含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌。回答下列問題：（1）質粒載體作為基因工程的工具，應具備的基本條件有_（答出兩點即可）。而作為基因表達載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子。（2）如果用含有氨芐青霉素的培養基進行篩選，在上述四種大腸桿菌細胞中，未被轉化的和僅含環狀目的基因的細胞不能區分的，其原因是_；并且_和_的細胞也是不能區分的，其原因是_。在上述篩選的基礎上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌單菌落，還需使用含有_的固體培養基。（3）基因工程中，某些

5、噬菌體經改造后可以作為載體，其DNA復制所需的原料來自于_。4.（2015，全國）已知生物體內有一種蛋白質（P），該蛋白質是一種轉運蛋白，由305個氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質（P1）不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性?；卮鹣铝袉栴}：（1）從上述資料可知，若要改變蛋白質的功能，可以考慮對蛋白質的_進行改造。（2）以P基因序列為基礎，獲得P1基因的途徑有修飾_基因或合成_基因，所獲得的基因表達時是遵循中心法則的，中心法則的全部內容包括_的復制；以及遺傳信息在不同分子之間的流動，即：_。（3）蛋白質工程也被稱為第二代基因

6、工程，其基本途徑是從預期蛋白質功能出發，通過_和_，進而確定相對應的脫氧核苷酸序列，據此獲得基因，在經表達、純化獲得蛋白質，之后還需要對蛋白質的生物_進行鑒定。5.（2017，江蘇）金屬硫蛋白(MT)是一類廣泛存在的金屬結合蛋白，某研究小組計劃通過多聚酶鏈式反應(PCR)擴增獲得目的基因，構建轉基因工程菌，用于重金屬廢水的凈化處理。PCR擴增過程示意圖如下，請回答下列問題：(1)從高表達MT 蛋白的生物組織中提取mRNA，通過_獲得_用于PCR擴增。(2)設計一對與MT基因兩端序列互補配對的引物(引物1和引物2)，為方便構建重組質粒，在引物中需要增加適當的_位點。設計引物時需要避免引物之間形成

7、_，而造成引物自連。(3)圖中步驟1代表_，步驟2代表退火，步驟3代表延伸，這三個步驟組成一輪循環。(4)PCR擴增時，退火溫度的設定是成敗的關鍵。退火溫度過高會破_的堿基配對。退火溫度的設定與引物長度、堿基組成有關，長度相同但_的引物需要設定更高的退火溫度。(5)如果PCR反應得不到任何擴增產物，則可以采取的改進措施有_(填序號：升高退火溫度 降低退火溫度 重新設計引物)。6.(2016，天津)人血清白蛋白(HSA) 具有重要的醫用價值，只能從血漿中制備。下圖是以基因工程技術獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。（1）未獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_合成總cDNA，然后以cDNA

8、為模板，采用PCR技術擴增HSA基因。下圖中箭頭箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向，請用箭頭在方框內標出標出另一條引物的位置及擴增方向。（2）啟動子通常具有物種及組織特異性，構建在水稻胚乳細胞內特異表達rHSA的載體，需要選擇的啟動子是_（填寫字母，單選）。A.人血細胞啟動子   B.水稻胚乳細胞啟動子  C.大腸桿菌啟動子 D.農桿菌啟動子   （3）利用農桿菌轉化水稻受體細胞的過程中，需添加酚類物質，其目的是_。（4）人體合成的初始HSA多肽，需要經過膜系統加工形成正確的空間結構才能有活性。與途徑II相比，選擇途徑I獲取rH

9、SA的優勢是_。（5）為證明rHSA具有醫用價值，須確認rHSA與_的生物學功能一致。7.（2016，江蘇）下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題：（1）用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用_兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過_酶作用后獲得重組質粒。為了擴增重組質粒，需將其轉入處于_態的大腸桿菌。（2）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養基中添加_，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中_。 （3）若BamHI酶切的DNA末端與Bcl I

10、酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為_，對于該部位，這兩種酶_（填“都能”、“都不能”或“只有一種能”）切開。 （4）若用Sau3A I切圖1質粒最多可能獲得_種大小不同的DNA片段。8.（2015，江蘇）胰島素A、B鏈分別表達法是生產胰島素的方法之一。 圖1是該方法所用的基因表達載體,圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產人胰島素的基本流程(融合蛋白A、B分別表示-半乳糖苷酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白)。請回答下列問題:(1)圖1基因表達載體中沒有標注出來的基本結構是_。(2)圖1中啟動子是_酶識別和結合的部位,有了它才能啟動目的基因的表達;氨芐青霉素抗

11、性基因的作用是_。(3)構建基因表達載體時必需的工具酶有_。(4)-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達,可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內部,其意義在于_。(5)溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵,用溴化氰處理相應的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈,且-半乳糖苷酶被切成多個肽段,這是因為_。(6)根據圖2中胰島素的結構,請推測每個胰島素分子中所含游離氨基的數量。你的推測結果是_ ,理由是_。【答案】1.(1)基因A的編碼區中內含子和外顯子，在真核生物細胞內把內含子轉錄來的RNA切除，而原核生物細胞內基因轉錄后不切除，直接表達。(2)噬菌體 噬菌體是細菌病毒，專門寄生在細菌體內，而家蠶

12、是真核生物(3)繁殖快 易培養 產物含量高 產物易分離等(4)蛋白A的抗體(5)不僅證明了生物的遺傳物質是DNA，還證明了DNA可以從一種生物轉移到另一種生物個體。2.(1)嫩葉組織細胞易破碎，基因表達強烈，相應mRNA多；抑制（防止）RNA被水解(2)逆轉錄過程的堿基互補配對(3)目的基因因缺少相應的啟動子和終止子，缺少復制原點(4)磷酸二酯鍵(5)轉錄和翻譯過程受影響3.（1）能自我復制、具有標記基因    （2）二者均不含氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均不能生長  含有質粒載體   含有插入了目的基因的重組質粒（或答含有重組質

13、粒）  二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養基上均能生長    四環素    （3）受體細胞4.（1）氨基酸序列（或結構）（1分）（2）P   P1    DNA和RNA   DNARNA、RNADNA、RNA蛋白質（或轉錄、逆轉錄、翻譯）（3）設計蛋白質結構  推測氨基酸序列  功能5.(1)逆轉錄 cDNA(2)限制性核酸內切酶 堿基互補配對(3)變性(4)引物與模板 GC含量高(5)6.（1）總RNA(或mR

14、NA) ；                         （2）B   （3）吸引農桿菌移向水稻受體細胞，有利于目的基因成功轉化  （4）水稻是真核生物，具有膜系統，能對初始rHSA多肽進行高效加工 （5）HSA7.1）BclI和Hind  連接  感受   TGATCC (GGATCA)（2）四環素     引物甲和引物丙