1、藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法分類一:中國(guó)法規(guī)規(guī)章庫(kù)分類二:醫(yī)藥衛(wèi)生頒布時(shí)間:1991-05-16有效時(shí)間:1991-05-16失效時(shí)間頒布機(jī)構(gòu):衛(wèi)生部數(shù)據(jù)庫(kù):法律法規(guī)資料庫(kù)前言中成藥、化學(xué)藥品、生化藥品的非滅菌制劑及藥用原料、輔料，除另有規(guī)定外，皆按本法進(jìn)行檢驗(yàn)。并按中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒布的藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)規(guī)定判定檢驗(yàn)結(jié)果。注年月日衛(wèi)生部發(fā)布的藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法同時(shí)廢止。藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法總則抽樣供試品一般按批號(hào)抽樣抽樣時(shí)，凡發(fā)現(xiàn)有異常或可疑的樣品，應(yīng)抽選有疑問(wèn)的樣品，但因機(jī)械損傷明顯破裂的包裝不得作為樣品。凡已能從藥品、瓶口（外蓋內(nèi)側(cè)及瓶口周圍）外觀看出長(zhǎng)螨、發(fā)霉、蟲(chóng)蛀以及變質(zhì)的藥品，可直接判為不合格品

2、，無(wú)需再抽樣檢驗(yàn)。抽樣量一般應(yīng)為檢驗(yàn)用量（個(gè)以上最小包裝單位）的倍量。一般采用隨機(jī)抽樣方法抽樣。供試品保存供試品在檢驗(yàn)之前，應(yīng)保存在陰涼干燥處（勿冷藏或冷凍），以防供試品中的污染菌因保藏條件所引起致死、損傷或繁殖。供試品在檢驗(yàn)之前，應(yīng)保持原包裝狀態(tài)，嚴(yán)禁開(kāi)啟。包裝已開(kāi)啟的樣品不得為供試品。檢驗(yàn)供試品檢驗(yàn)項(xiàng)目按中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部頒布的藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)確定。檢驗(yàn)的全過(guò)程必須符合無(wú)菌技術(shù)要求。除另有規(guī)定外，供試品制備成供試液后，應(yīng)在均勻狀態(tài)取樣。供試品制成供試液后，應(yīng)在小時(shí)內(nèi)注皿操作完畢。檢驗(yàn)量所有劑型的檢驗(yàn)均需取自個(gè)以上包裝單位。口服固體制劑中成藥丸劑、片劑、沖劑、散劑、膠劑、茶劑、曲劑、膠囊劑等檢

3、驗(yàn)量均為。蜜丸除應(yīng)取自個(gè)以上包裝外，還應(yīng)取自丸以上。化學(xué)藥品、生化藥品的粉劑、膠囊劑、片劑、沖劑、滴丸劑等檢驗(yàn)量為。口服液體制劑：糖漿劑、乳劑、合劑、溶液劑、混懸劑、酒劑等檢驗(yàn)量為。半固體制劑：膏劑等檢驗(yàn)量為。外用液體制劑：滴眼劑、滴鼻劑及其他液體制劑檢驗(yàn)量為。外用栓劑、軟膏劑、眼膏劑等檢驗(yàn)量為。膜劑，除另有規(guī)定外，中藥膜劑檢驗(yàn)量取平方厘米，化學(xué)藥及生化藥膜劑取平方厘米，以上均需取自個(gè)以上包裝并片以上。特殊貴重的或極微量包裝的藥品，其檢驗(yàn)量可酌減。除另有規(guī)定外，口服固體制劑不得低于；液體制劑采用原液者不得少于、采用供試液者不得少于；外用藥品不得少于。檢查活螨的取樣量，見(jiàn)活螨檢驗(yàn)法。供試液的制備

4、一般供試品的供試液制備方法。固體供試品稱取，置研缽中，以稀釋劑（生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（）分次加入研磨細(xì)勻，并轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，使成供試液。或?qū)⒐┰嚻泛拖♂寗┩脛驖{儀中，以轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)分，開(kāi)機(jī)-分鐘。對(duì)吸水膨脹或粘度大的供試品，可制成供試液。液體供試品量取，加入含稀釋劑的錐形瓶中，混勻成供試液。合劑（含王漿、蜂蜜者）、滴眼劑等可以原液為供試液。半固體供試品稱取，加入含稀釋劑的錐形瓶中，混勻成供試液。特殊供試品的供試液制備方法非水溶性基質(zhì)供試品供試液的制備方法（）軟膏劑、乳膏劑吐溫西黃蓍膠（或羧甲基纖維素鈉）法稱取供試品，置研缽或燒杯中，加吐溫-，充分研勻。加入西黃蓍膠或羧甲基纖維素鈉，充分研勻以的稀

5、釋劑，邊加邊研磨，使成均勻乳劑，并移至錐形瓶中，即為供試液。注吐溫-預(yù)先以高壓滅菌分鐘。西黃蓍膠、羧甲基纖維素鈉預(yù)先以干熱滅菌分鐘。-原注液體石蠟吐溫法稱取供試品，分別量取液體石蠟（液體石蠟，預(yù)先以干熱滅菌小時(shí)），吐溫-，稀釋劑。先將供試品置研缽中，邊研磨邊加液體石蠟，然后再邊研磨邊滴加吐溫-，研磨均勻后，再邊加稀釋劑邊研磨，初始每次約，待起團(tuán)塊時(shí)，加入量可增至約，稍停分鐘，再輕輕研磨至乳化，將稀釋劑加完為止。即得供試液。（）栓劑稱取供試品，置錐形瓶（內(nèi)含玻璃珠若干粒）中，加適量稀釋劑，置水浴浸泡分鐘使融，加吐溫-，振搖使之乳化，再加稀釋劑（稀釋劑和吐溫總量為）制成供試液。（）油劑量取供試品，

6、加入吐溫-稀釋劑，混勻，制成供試液。膠囊劑、膠丸及膠劑供試液制備方法（）膠囊劑、膠丸劑稱取供試品置錐形瓶中，加入稀釋劑，于水浴中振搖至溶，即為供試液。（）膠劑取膠劑若干，搗碎，稱取，再用研缽研細(xì)，轉(zhuǎn)入錐形瓶中，加入稀釋劑，置于水浴中，振搖使溶，即為供試液。腸溶膠囊（片）劑供試液制備方法稱取供試品，置錐形瓶中并放入水浴，加入磷酸鹽緩沖液（附錄二），保溫、振搖，使腸衣溶解，混勻，即得供試液。氣霧劑供試液制備方法。將供試品置冰室內(nèi)小時(shí)后，取出，用滅菌鋼錐小心鉆孔，使拋射劑緩慢釋放，然后再用滅菌注射器加入適量稀釋劑，混勻后吸取相當(dāng)于或的供試品，再稀釋成供試液。膜劑供試液制備方法中藥膜劑除另有規(guī)定外，取

7、-平方厘米，將藥膜剪成碎片，置錐形瓶中，加稀釋劑適量，使每含平方厘米濃度，浸泡分鐘，搖勻，即得。化學(xué)藥膜劑除另有規(guī)定外，取平方厘米，置錐形瓶中，加稀釋劑，浸泡、振蕩使溶，即得。必要時(shí)，可置水浴中助溶。含抑菌成分供試品的供試液制備方法。凡含有防腐劑或抑菌成分且影響檢驗(yàn)（陽(yáng)性對(duì)照控制菌不生長(zhǎng)）的供試品，可根據(jù)供試品的性質(zhì)，控制菌的特性及檢驗(yàn)條件等按下列方法之一（或兩種以上方法聯(lián)合應(yīng)用）及其他適宜方法處理后，作控制菌檢驗(yàn)。離心沉淀法可溶性供試液取供試液，置入刻度離心管中，以轉(zhuǎn)分以上離心沉淀分鐘，用毛細(xì)吸管吸取上清液棄掉，留下管底約殘余液，將其全部洗入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。混懸供試液取供試液，置

8、刻度離心管中，先以轉(zhuǎn)分離心沉淀分鐘，取其上層液移入另一離心管中，再經(jīng)轉(zhuǎn)分以上離心沉淀分鐘，棄去上清液，保留約殘余液，全部洗入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。本法適用于一些抑菌作用不強(qiáng)的中、西藥品，如蜜丸、水丸、片劑、散劑、沖劑、膠囊劑及液體制劑。應(yīng)用本法須嚴(yán)防操作污染，并注意上層液或上清液和管底殘?jiān)姆蛛x，避免沉渣混入其中。薄膜過(guò)濾法取規(guī)定量的供試液，按加生理鹽水約的比例，混勻，置入薄膜過(guò)濾器內(nèi)，減壓過(guò)濾至干，再以生理鹽水或其他適宜溶劑沖洗濾膜次，每次。取出濾膜，剪成-片，使每片相當(dāng)于供試品或。放入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。本法適用于水溶性抑菌成分的中、西藥品和滴眼劑等的制劑“滅活”處理。安放濾

9、膜時(shí)，注意濾膜與濾器應(yīng)密合，防止濾膜破損、漏液。本法所用微孔濾膜孔徑應(yīng)為±。鈍化劑中和法磺胺類藥物中和法取規(guī)定量供試液，加入含對(duì)氨基苯甲酸的增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。本法適用于含磺胺較少的制劑、如三磺軟膏、消炎眼藥水、斑馬眼藥水等。應(yīng)用本法可因供試品不同，對(duì)氨基苯甲酸的用量，可適當(dāng)調(diào)整。含重金屬藥物中和法取規(guī)定量供試液，加入硫乙醇酸鈉-胱氨酸增菌液（附錄三）中，作增菌培養(yǎng)即得。本法適用于含重金屬鹽類藥物的檢驗(yàn)，如磺胺嘧啶銀軟膏等。含洗必泰等制劑中和法取規(guī)定量供試液，加入含適量吐溫-等表面活性劑的增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。本法適用于洗必泰含片、洗必泰栓、霉滴栓及其他含抑菌成分的供試品。

10、應(yīng)用本法須注意，由于供試品不同，用量應(yīng)預(yù)試，表面活性劑的用量應(yīng)預(yù)試，用量不可過(guò)大，否則本身亦產(chǎn)生抑菌作用。沉降法（）取規(guī)定量供試液，自然沉降分鐘，吸取上層液于增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。（）取規(guī)定量供試液，自然沉降分鐘，吸取上層液于含對(duì)氨基苯甲酸的增菌液中，作增菌培養(yǎng)即得。本法適用于水溶性小的抗菌制劑檢驗(yàn)，如磺胺類藥。（）法適用于單一成分固體制劑，如磺胺嘧啶片檢驗(yàn)；（）法適用于復(fù)方磺胺制劑，如復(fù)方磺胺嘧啶片、復(fù)方新諾明片等檢驗(yàn)。應(yīng)用本法時(shí)，供試品應(yīng)充分研細(xì)，并與稀釋劑充分搖勻，使污染菌分散于液相中；沉降時(shí)間不宜超過(guò)分鐘，以防菌細(xì)胞下沉；取上層液時(shí)，避免吸入藥渣。稀釋法取供試液，加入較大量增菌液中

11、（使該供試品稀釋至陽(yáng)性對(duì)照菌能生長(zhǎng)的濃度），作增菌培養(yǎng)即得。本法適用于抑菌作用不強(qiáng)的中藥、化學(xué)藥品檢驗(yàn)。對(duì)照試驗(yàn)陰性對(duì)照試驗(yàn)測(cè)試檢驗(yàn)全過(guò)程無(wú)菌技術(shù)的可靠性。菌數(shù)測(cè)定陰性對(duì)照試驗(yàn)：用吸管從供用的稀釋劑中各吸取于個(gè)無(wú)菌平皿中，分別按細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)測(cè)定方法注皿培養(yǎng)、檢查，不得長(zhǎng)菌。控制菌檢驗(yàn)陰性對(duì)照試驗(yàn)：用吸管從供用的稀釋劑中吸取于增菌液中，按控制菌檢驗(yàn)方法檢查，不得長(zhǎng)菌。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)檢查供試品是否對(duì)控制菌生長(zhǎng)產(chǎn)生干擾作用及檢查培養(yǎng)條件是否適宜。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)方法同供試品檢驗(yàn)，于供試液中加入一定量的相應(yīng)對(duì)照菌，作平行試驗(yàn)。規(guī)定陽(yáng)性對(duì)照菌株：大腸桿菌（）、沙門氏菌（）、綠膿桿菌（）、金黃色葡萄球菌（）及

12、破傷風(fēng)桿菌（）。對(duì)照菌的加入量為個(gè)，可事前預(yù)試確定。需氣菌常用計(jì)數(shù)方法，取培養(yǎng)小時(shí)的新鮮肉湯培養(yǎng)物，倍遞增稀釋至，取其于普通肉湯瓊脂平板表面涂抹或取稀釋液以注皿法進(jìn)行菌數(shù)測(cè)定。當(dāng)供試品未檢出供試菌時(shí)，而陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)也未能檢出，不能做出供試品未檢出控制菌的結(jié)論。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)操作必須與供試品檢驗(yàn)操作嚴(yán)格分開(kāi)，避免交叉污染。檢驗(yàn)報(bào)告單位細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)和酵母菌數(shù)的測(cè)定一般以或?yàn)閱挝坏木鋽?shù)表示。中藥膜劑以平方厘米、化學(xué)藥及生化藥膜劑以平方厘米為單位的菌落數(shù)表示。眼科用藥的霉菌和酵母菌數(shù)以或?yàn)閱挝坏木鋽?shù)或“未檢出”表示。控制菌檢驗(yàn)報(bào)告一般以或、中藥膜劑以平方厘米、化學(xué)及生化藥膜劑以平方厘米為單位報(bào)告“

13、檢出”或“未檢出”。復(fù)試菌數(shù)測(cè)定不合格者應(yīng)復(fù)試。控制菌檢驗(yàn)以次檢出為準(zhǔn)，不再?gòu)?fù)試，但應(yīng)保留檢出菌株個(gè)月備查。復(fù)試項(xiàng)目以不合格項(xiàng)目為準(zhǔn)，作單項(xiàng)復(fù)試。復(fù)試需另取同批號(hào)樣品，測(cè)定次。復(fù)試報(bào)告以次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值報(bào)告。眼科用藥的霉菌和酵母菌數(shù)復(fù)試報(bào)告，須以二次復(fù)試結(jié)果均不得長(zhǎng)菌，方可判定合格。特別抽樣不符合部頒藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的藥品，經(jīng)衛(wèi)生行政部門審批準(zhǔn)予在不影響外觀與質(zhì)量的前提下，充許采取適宜措施進(jìn)行處理，處理后的藥品抽樣按本款進(jìn)行。抽樣方法大包裝抽樣，按出廠的大包裝，件以下抽件，件以上每增加件加抽件，最后不足件者不加抽，超過(guò)件加抽件。小包裝抽樣，按規(guī)定手續(xù)，從大包裝中隨機(jī)抽取小包裝個(gè)以上單位為

14、供試品。檢驗(yàn)項(xiàng)目：按部頒藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定檢驗(yàn)，不得單項(xiàng)檢驗(yàn)。檢驗(yàn)報(bào)告測(cè)定菌數(shù)報(bào)告：以各次測(cè)定結(jié)果全部平均值報(bào)告。控制菌按全部復(fù)試檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告，如全部復(fù)試均未檢出控制菌時(shí)，報(bào)告為：“按規(guī)定抽樣檢驗(yàn)結(jié)果未檢出××菌”；如全部抽樣中任一樣品檢出控制菌時(shí)，報(bào)告為：“按規(guī)定抽樣檢驗(yàn)，檢出××菌，不符合藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定”。注報(bào)告中寫(xiě)出具體的控制菌名稱。細(xì)菌數(shù)測(cè)定細(xì)菌數(shù)是指規(guī)定單位的非規(guī)定滅菌藥品制劑中污染活細(xì)菌的數(shù)量。是判定藥品受到細(xì)菌污染程度的標(biāo)志。其內(nèi)含是多義的。細(xì)菌數(shù)愈多，表明藥品受到致病微生物污染的可能性以及藥品制劑的變質(zhì)可能性也愈大，安全性也就越差。同時(shí)細(xì)

15、菌數(shù)測(cè)定也是對(duì)生產(chǎn)單位的藥品原輔料、器具設(shè)備、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛(wèi)生狀況進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)之一。細(xì)菌數(shù)測(cè)定采用平板菌落計(jì)數(shù)法，是一種活菌計(jì)數(shù)法。測(cè)定結(jié)果只反映出在規(guī)定條件下生長(zhǎng)的細(xì)菌數(shù)，不可能包括在本法條件下不生長(zhǎng)的細(xì)菌，因而測(cè)定數(shù)只可能低于實(shí)際的污染數(shù)。此外，測(cè)定中個(gè)細(xì)菌可能繁殖成個(gè)菌落，而一群也可能只形成個(gè)菌落，以及污染的不均勻性等等原因，極易造成測(cè)定差異。故在測(cè)定細(xì)菌數(shù)時(shí)，必須嚴(yán)格按本法所規(guī)定條件操作。培養(yǎng)基、試劑肉湯瓊脂（或肉湯瓊脂）（附錄三，）磷酸鹽緩沖液（）或生理鹽水（附錄二）檢驗(yàn)程序制備稀釋稀釋供試品供試液供試液供試液平皿平皿平皿個(gè)個(gè)個(gè) 注皿干燥培養(yǎng)±小

16、時(shí)菌落計(jì)數(shù)報(bào)告操作步驟供試液制備，經(jīng)陰性對(duì)照取樣后，按各類制劑制備供試液的方法（總則）制備。稀釋及吸樣稀釋級(jí)一般應(yīng)采用級(jí)。稀釋取吸管支，吸取混勻的供試液（或原液、供試液），在離稀釋劑液面上約處，沿管壁注入裝有的稀釋劑的試管中，混勻成（或、）的稀釋液。吸樣用上述吸管分別取供試液（或原液、供試液），注入個(gè)平皿中。以另一支吸管，按上述操作，作下一級(jí)的稀釋與吸樣。操作時(shí)，應(yīng)特別注意每次吸液前必須使稀釋液充分混勻（吸管反復(fù)吹吸數(shù)次或充分震蕩），以使菌體充分均勻分散，降低測(cè)定誤差。傾注瓊脂（注皿）與干燥事先將肉湯瓊脂融化、置水浴中，備用當(dāng)供試液及各級(jí)稀釋液均注入平皿后，以上述瓊脂傾注入平皿，每皿約，隨即轉(zhuǎn)

17、動(dòng)平皿，使樣液與瓊脂混勻后置水平臺(tái)上待凝。干燥瓊脂凝固后，在凈化條件下開(kāi)蓋倒置或換滅菌的陶瓦蓋，使平板干燥，減少平板表面的水分，防止菌落蔓延生長(zhǎng)。干燥時(shí)間一般在小時(shí)左右，干燥時(shí)間計(jì)入培養(yǎng)時(shí)限。將上述平板倒置于培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)±小時(shí)。菌落計(jì)數(shù)細(xì)菌菌落是個(gè)菌細(xì)胞或菌細(xì)胞團(tuán)在局限位置上，經(jīng)一定條件繁殖成肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌群體。由于細(xì)菌種類繁多，形成菌落大小、形狀、色澤、透明度等皆因種而異，差別甚大。計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于平板背面或正面仔細(xì)觀察。不要漏計(jì)瓊脂層內(nèi)和平板邊緣生長(zhǎng)的菌落。并須注意細(xì)菌菌落與藥渣或培養(yǎng)基的沉淀物，酵母菌及霉菌菌落的區(qū)別。必要時(shí)，用顯微鏡鑒別。用肉眼直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)

18、器上點(diǎn)計(jì)，然后用倍放大鏡檢查，有否遺漏。若平板上有個(gè)或個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以個(gè)或個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。平板上有片狀菌落或花斑樣菌落蔓延生長(zhǎng)以及平板受到污染的情況，該平板計(jì)數(shù)無(wú)效。計(jì)算各稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)。當(dāng)用一稀釋級(jí)使用個(gè)平板時(shí)，應(yīng)采用個(gè)平板菌落數(shù)的均值為平均平板菌落數(shù)。若個(gè)平板菌落數(shù)相差在倍以上時(shí)，該稀釋級(jí)不宜采用，但不包括個(gè)平板菌落數(shù)均在個(gè)以下的情況。注以下兩平板菌落數(shù)允許幅度、。當(dāng)同一稀釋級(jí)使用個(gè)平板時(shí)，應(yīng)采用個(gè)平板菌落數(shù)的均值為平均菌落數(shù)。若其中個(gè)平板菌落數(shù)與其他個(gè)相近的平板菌落數(shù)的均值相差倍以上時(shí)，該平板菌落數(shù)不能參與平均，但不包括平板菌落數(shù)均在個(gè)以下的情況。注以下平板最大與最小

19、菌落數(shù)的允許幅度，、。菌數(shù)報(bào)告規(guī)則一般宜選取平均平板菌落數(shù)在間的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)計(jì)算的依據(jù)。若有個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)處在時(shí)，將該稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，為報(bào)告菌數(shù)。若有個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)處在時(shí)，先計(jì)算兩稀釋級(jí)菌落數(shù)的比值。高稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)比值低稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)當(dāng)比值時(shí)，以兩級(jí)的菌落數(shù)均值為報(bào)告菌數(shù)。當(dāng)比值時(shí)，以低稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。若有個(gè)稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)均處在時(shí)，采用后個(gè)稀釋級(jí)計(jì)算級(jí)間比值。當(dāng)比值時(shí)，以兩級(jí)的菌落數(shù)的均值為報(bào)告菌數(shù)。當(dāng)比值時(shí)，以低稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。

20、若各稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)均在以上，按最高的稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)，或適當(dāng)增加稀釋級(jí)，重作測(cè)定后報(bào)告結(jié)果。若各稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)均不在間，其中一稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)大于，相鄰稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)又小于時(shí)，以最接近或的稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。若各稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)均小于時(shí)，按最低稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。但若應(yīng)用原液為供試液，當(dāng)稀釋級(jí)與原液的平均平板菌落數(shù)相等或大于時(shí)，應(yīng)以培養(yǎng)基稀釋法測(cè)定，按測(cè)定結(jié)果報(bào)告菌數(shù)。培養(yǎng)基稀釋法：吸取供試液（原液或供試液），注入個(gè)平皿內(nèi)（每皿，總量為）。共作份，共個(gè)平皿。每皿傾注融化并冷至左右的普通

21、肉湯瓊脂約，旋轉(zhuǎn)混合，冷凝后按規(guī)定培養(yǎng)溫度與時(shí)限培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。將每注入個(gè)平板的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果合并為每菌落數(shù)，共得組數(shù)據(jù)。取組數(shù)據(jù)平均值乘稀釋倍數(shù)，為報(bào)告菌數(shù)。若各稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)均無(wú)菌落生長(zhǎng)或測(cè)定數(shù)在個(gè)以下時(shí)，報(bào)告菌數(shù)為個(gè)。表細(xì)菌數(shù)報(bào)告規(guī)則舉例供試品稀釋倍數(shù)級(jí)間 報(bào)告數(shù) 規(guī)則原液菌落數(shù) 1 23 比值 書(shū)寫(xiě) 1010 10 5.1 1365 16420 16400 16×10或16000 35.2.1 276029546 1.6 37750 38×10或38000 35.2.2 289027160 2.2 27100 27×10或27000 35.3.1 239

22、 20235 1.7 27600 28×10或28000 3 5.3.2 236 19642 2.1 19600 20×10或20000 45.4 不可計(jì)4650 513513000 51×10或510000 35.5 不可計(jì)30512 30500 30×10或300005.6 2419 12 24024×10或2405.6 22.3277 27027×10或2705.7 0.6 00610 報(bào)告數(shù)書(shū)寫(xiě)菌落數(shù)在個(gè)以內(nèi)時(shí)，按實(shí)測(cè)數(shù)書(shū)寫(xiě)報(bào)告。菌落數(shù)大于時(shí)，取二位有效數(shù)字，第三位數(shù)按有效數(shù)字處理規(guī)則處理，為簡(jiǎn)便計(jì)，也可用的指數(shù)報(bào)告。霉菌和酵

23、母菌數(shù)測(cè)定霉菌和酵母菌數(shù)是指規(guī)定單位非規(guī)定滅菌藥品制劑中污染的霉菌和酵母菌的活菌數(shù)量。霉菌和酵母菌廣泛分布于自然界，土壤、空氣及水中都有它們的菌體及孢子存在。因而在藥品生產(chǎn)、貯藏等各個(gè)環(huán)節(jié)均可污染藥品，以致引起藥品變質(zhì)，危害人體健康。有些霉菌毒素也是重要的致癌物質(zhì)。霉菌和酵母菌數(shù)是判定藥品受到污染程度的標(biāo)志之一，也是對(duì)藥品原料、生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)環(huán)境以及操作人員衛(wèi)生狀況進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)之一。霉菌和酵母菌種屬繁多，采用一種培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，不可能適合所有霉菌和酵母菌的生長(zhǎng)繁殖。故本法測(cè)定結(jié)果只能是在一定條件下平板生長(zhǎng)的霉菌和酵母菌菌落數(shù)。本法規(guī)定，一般制劑用虎紅瓊脂作霉菌數(shù)測(cè)定（液體制劑包括

24、酵母菌數(shù)）。但含蜂蜜或王漿的合劑另以酵母膏，蛋白胨、葡萄糖（）瓊脂作酵母菌數(shù)測(cè)定，而霉菌數(shù)測(cè)定仍用虎紅瓊脂。培養(yǎng)基、試劑磷酸鹽緩沖液（）（附錄二）生理鹽水（附錄二）瓊脂培養(yǎng)基（附錄三）虎紅瓊脂培養(yǎng)基（附錄三）檢驗(yàn)程序供試品供試液供試液供試液合劑（含蜂蜜或王漿者）滴眼劑平皿個(gè)平皿個(gè)平皿個(gè)平皿個(gè)虎紅瓊脂，瓊脂（含蜂蜜或王漿的合劑用）注皿培養(yǎng)±小時(shí)菌落計(jì)數(shù)報(bào)告操作步驟供試液的制備（總則）與稀釋，按細(xì)菌數(shù)測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行。稀釋級(jí)一般采用級(jí)。合劑（含蜂蜜或王漿者）和滴眼劑可用原液作第級(jí)供試液，分別在作倍遞增稀釋的同時(shí)，即可取該稀釋級(jí)的吸管吸取稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋級(jí)個(gè)平皿。各稀釋液注入

25、平皿后，應(yīng)及時(shí)將融化并冷至左右的虎紅瓊脂培養(yǎng)基（如供試品為含蜂蜜或王漿的合劑，加用瓊脂培養(yǎng)基測(cè)定酵母菌數(shù)）約傾注平皿內(nèi)，搖勻待凝。凝固后，置培養(yǎng)箱內(nèi)，一般培養(yǎng)±小時(shí)，如有可疑，可標(biāo)記后適當(dāng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。菌落計(jì)數(shù)方法菌落形態(tài)霉菌菌落形態(tài)：具有放射狀或樹(shù)狀分枝的菌絲是霉菌菌落的特征。初形成時(shí)，多無(wú)色透明，有明顯的折光性，在較暗的背景下，以透射光觀察，易于識(shí)別。少數(shù)生長(zhǎng)在瓊脂表面的菌落，初起時(shí)，似為小塊水跡，需借助暗反射光才能看清。成熟的霉菌菌落多數(shù)有各種顏色的孢子形成，隨種而異，極易判定。酵母菌菌落形態(tài)：在虎紅瓊脂平板上，多數(shù)為圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑濕潤(rùn)，呈不透明乳脂狀，乳白色或粉

26、紅色。少數(shù)表面粗糙或皺褶，有的菌落周邊呈細(xì)分枝狀。位于瓊脂內(nèi)的菌落，可呈鐵餅形、三角形及多角形。菌落外觀與細(xì)菌菌落不易區(qū)別時(shí)，應(yīng)挑取菌落，用水制片，置高倍顯微鏡下觀察，其細(xì)胞個(gè)體比細(xì)菌大數(shù)倍，多為圓形或卵圓形，絕大多數(shù)為出芽繁殖。當(dāng)平板內(nèi)酵母菌菌落甚多時(shí)，常有酒香氣。在瓊脂平板上的菌落與虎紅平板上的形態(tài)相似，但稍大，多數(shù)為乳白色。菌落計(jì)數(shù)：一般在平板背面用肉眼直接點(diǎn)數(shù)，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏。若有根霉或毛霉蔓延生長(zhǎng)時(shí)，為避免影響其它霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)，應(yīng)及時(shí)將平板取出計(jì)數(shù)或從平板背面觀察霉菌生長(zhǎng)中心點(diǎn)或霉菌蔓延生長(zhǎng)區(qū)域來(lái)計(jì)數(shù)。固體制劑僅計(jì)數(shù)霉菌菌落；液體制劑應(yīng)計(jì)數(shù)霉菌菌落和酵母菌菌落的總數(shù)

27、；含王漿或蜂蜜的合劑則應(yīng)將虎紅平板上的霉菌數(shù)加上平板上的酵母菌數(shù)為霉菌和酵母菌總數(shù)，計(jì)算各稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)。菌數(shù)報(bào)告規(guī)則選擇菌落數(shù)在之間的稀釋級(jí)平板計(jì)數(shù)，以該稀釋級(jí)的平均平板菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)作為報(bào)告菌數(shù)。若鄰近的個(gè)稀釋級(jí)平均平板菌落數(shù)均在之間，計(jì)算級(jí)間比值。當(dāng)比值時(shí)，以兩級(jí)菌落數(shù)的平均值為報(bào)告菌數(shù)；比值時(shí)，按低稀釋級(jí)平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均不足時(shí)，以最低稀釋級(jí)平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)為報(bào)告菌數(shù)。菌數(shù)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)固體制劑報(bào)告霉菌數(shù)；液體制劑及半固體制劑報(bào)告霉菌和酵母菌的總數(shù)。菌數(shù)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)參照細(xì)菌數(shù)測(cè)定。眼科用藥各稀釋級(jí)（含原液）均未生長(zhǎng)菌落時(shí)，報(bào)告“未檢出”。大腸桿

28、菌檢驗(yàn)法大腸桿菌為腸桿菌科埃希氏菌屬細(xì)菌，是人和溫血?jiǎng)游锬c道內(nèi)的常住菌，隨糞便排出體外，可直接或間接污染藥品及藥品生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)。藥品中檢出大腸桿菌表明該樣品已受到糞便污染，服用后有可能被糞便中存在的腸道致病菌或寄生蟲(chóng)卵等病原體感染。因此，大腸桿菌被列為糞便污染指示菌，是非規(guī)定滅菌口服藥品的常規(guī)必檢項(xiàng)目。培養(yǎng)基、試劑普通肉湯培養(yǎng)基（附錄三）膽鹽乳糖（）增菌液（附錄三）乳糖發(fā)酵管（附錄三）或乳糖發(fā)酵管（附錄三）蛋白胨水培養(yǎng)基（附錄三）磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（附錄三）西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基（附錄三）伊紅美藍(lán)（）瓊脂（附錄三）麥康凱瓊脂（附錄三）柯凡克試劑（附錄二）甲基紅指示劑（附錄二）試劑（附錄

29、二）革蘭氏染色液（附錄二）檢驗(yàn)程序供試品供試液增菌液±小時(shí)或麥康凱瓊脂±小時(shí)疑似菌落生長(zhǎng)無(wú)菌落生長(zhǎng)普通肉湯瓊脂斜面報(bào)告±小時(shí)革鏡乳靛甲檸蘭檬氏基基酸染試鹽色檢糖質(zhì)紅驗(yàn)±小時(shí)報(bào)告操作步驟增菌培養(yǎng)取供試液（總則），加入備妥的增菌液內(nèi)，置±培養(yǎng)小時(shí)。增菌液呈現(xiàn)混濁。液面可見(jiàn)或未見(jiàn)氣泡都表明有菌生長(zhǎng)，如未見(jiàn)明顯混濁，可延長(zhǎng)增菌培養(yǎng)時(shí)間至小時(shí)。分離培養(yǎng)將上述增菌培養(yǎng)液輕微搖動(dòng)，以接種環(huán)沾取環(huán)劃線接種于或麥康凱瓊脂平板上。置±培養(yǎng)小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間），觀察菌落生長(zhǎng)情況，大腸桿菌在瓊脂平板上的典型菌落呈深紫黑色或中心深紫色，圓形，稍凸起，邊緣

30、整齊，表面光滑，常有金屬光澤；在麥康凱瓊脂平板上的典型菌落呈桃紅色或中心桃紅、圓形，扁平，光滑濕潤(rùn)。由于藥物影響或非典型菌的存在，大腸桿菌可出現(xiàn)非典型形態(tài)；在瓊脂平板上呈現(xiàn)淺紫、粉紫、粉色，無(wú)明顯暗色中心；在麥康凱瓊脂平板上呈現(xiàn)微紅色或粉色，菌落形態(tài)、質(zhì)地也有改變。以上形態(tài)均應(yīng)作為疑似菌落進(jìn)行鑒定，切勿遺漏。分離平板上無(wú)菌落或無(wú)疑似菌落生長(zhǎng)，可作出未檢出報(bào)告。以接種針輕輕接觸單個(gè)疑似菌落的中心，沾取培養(yǎng)物，每次應(yīng)挑取個(gè)或更多個(gè)疑似菌落，接種于普通肉湯瓊脂斜面或三糖鐵瓊脂斜面上。置±培養(yǎng)小時(shí)，供革蘭氏染色鏡檢及生化試驗(yàn)用。在上述檢驗(yàn)過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)疑似的其它規(guī)定控制菌時(shí)，亦應(yīng)繼續(xù)鑒定。革蘭

31、氏染色鏡檢將上述普通肉湯瓊脂斜面培養(yǎng)物涂片，作革蘭氏染色鏡檢。大腸桿菌為革蘭氏陰性無(wú)芽孢短桿菌。由于菌齡等原因，菌體長(zhǎng)短可有變化。生化反應(yīng)將上述斜面培養(yǎng)物接種于乳糖發(fā)酵管，置±培養(yǎng)小時(shí)，觀察結(jié)果。大腸桿菌應(yīng)發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣，或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。產(chǎn)酸者，以酸性復(fù)紅為指示劑的培養(yǎng)基顯紅色；以溴麝香草酚藍(lán)為指示劑的培養(yǎng)基顯黃色。產(chǎn)氣者，倒管內(nèi)有氣泡。為避免遲緩發(fā)酵乳糖造成假陰性，可選用乳糖發(fā)酵管。絕大多數(shù)遲緩發(fā)酵乳糖的細(xì)菌可于小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。試驗(yàn)靛基質(zhì)試驗(yàn)將斜面培養(yǎng)物接種于蛋白胨水培養(yǎng)基中，置±培養(yǎng)±小時(shí)。沿管壁加入柯凡克試劑，輕微搖動(dòng)，觀察液面顏色。陽(yáng)性反應(yīng)為玫瑰紅色

32、；陰性反應(yīng)為試劑本色。甲基紅試驗(yàn)將斜面培養(yǎng)物接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置±培養(yǎng)±小時(shí)。于每培養(yǎng)液中加入甲基紅指示劑滴，立即觀察結(jié)果，陽(yáng)性反應(yīng)培養(yǎng)液為鮮紅色或桔紅色；陰性反應(yīng)呈黃色。試驗(yàn)將斜面培養(yǎng)物接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置±培養(yǎng)±小時(shí)。于每培養(yǎng)液中加入試劑甲液（萘酚酒精溶液），混勻，再加試劑乙液（），充分振搖，觀察結(jié)果。陽(yáng)性反應(yīng)立刻或數(shù)分鐘后出現(xiàn)紅色。加試劑后小時(shí)無(wú)紅色反應(yīng)時(shí)為陰性，如出現(xiàn)紅色亦應(yīng)判為陽(yáng)性。檸檬酸鹽利用試驗(yàn)將斜面培養(yǎng)物接種于西蒙氏檸檬酸鹽斜面，置±培養(yǎng)±小時(shí)，觀察結(jié)果。斜面有菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基由綠色

33、變?yōu)樗{(lán)色時(shí)為陽(yáng)性反應(yīng)；斜面無(wú)菌苔生長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色無(wú)改變?yōu)殛幮苑磻?yīng)。若斜面有微量菌苔生長(zhǎng)或顏色改變等可疑現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)將待檢菌株重新分離、純化后，再行試驗(yàn)。大腸桿菌反應(yīng)模式應(yīng)為或。對(duì)出現(xiàn)可疑反應(yīng)的培養(yǎng)物，應(yīng)將所分離的待檢菌株于或麥康凱瓊脂平板上重新劃線分離后，再作生化試驗(yàn)證實(shí)。表大腸桿菌同有關(guān)細(xì)菌的鑒別及應(yīng)用靛基質(zhì)甲基紅檸檬酸鹽典型大腸桿菌非典型大腸桿菌典型中間型非典型中間型典型產(chǎn)氣腸桿菌非典型產(chǎn)氣腸桿菌結(jié)果報(bào)告完全符合以下結(jié)果時(shí)，判定為檢出大腸桿菌（）染色鏡檢是革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌；（）乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣，或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；（）試驗(yàn)反應(yīng)為或。沙門氏菌檢驗(yàn)法沙門氏菌為腸桿菌科沙門氏菌屬細(xì)菌，廣泛分布于自然界，是人畜共患的腸道病原菌，常引起傷寒、腸炎、腸熱癥和食物中毒，危害人類健康。沙門氏菌可通過(guò)人類、畜、禽的糞便或帶菌者直接或間接污染藥品，生產(chǎn)環(huán)境及生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，特別是以動(dòng)物、臟器為原