1、劉瑞錦劉瑞錦20112011年年1010月月幾個問題幾個問題v 為什么要進行方法學驗證？為什么要進行方法學驗證？v 方法驗證主要包括那幾個方面？方法驗證主要包括那幾個方面？v 需要進行驗證的檢測項目主要有哪些？需要進行驗證的檢測項目主要有哪些？v 一般有哪些驗證內容？一般有哪些驗證內容？方法驗證的概念方法驗證的概念1方法驗證的主要方面方法驗證的主要方面2方法的具體內容方法的具體內容3審評關注點審評關注點4一、方法驗證的概念一、方法驗證的概念v 對所采用的分析方法的科學性、準確性和可行性進行驗證，對所采用的分析方法的科學性、準確性和可行性進行驗證，以充分表明分析方法符合測試項目的目的和要求。以充

2、分表明分析方法符合測試項目的目的和要求。v 根據檢測項目的要求，預先設置一定的驗證內容，并通過根據檢測項目的要求，預先設置一定的驗證內容，并通過設計合理的試驗來驗證所采用的分析方法能否符合檢測項目設計合理的試驗來驗證所采用的分析方法能否符合檢測項目的要求。的要求。開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列 每個檢測項目采用的分析方法，均每個檢測項目采用的分析方法，均需要進行方法驗證需要進行方法驗證方法驗證的內容應根據檢測項目的方法驗證的內容應根據檢測項目的要求，結合所采用分析方法的特點要求，結合所采用分析方法的特點確定確定同一分析方法用于不同的檢測項目同一分析方法用于不同的檢測項目會有不同的

3、驗證要求。會有不同的驗證要求。一、方法驗證的概念一、方法驗證的概念一般原則一般原則 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列鑒別鑒別雜質定量雜質定量專屬性專屬性準確度準確度定量限定量限專屬性專屬性 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列一、方法驗證的概念一、方法驗證的概念專屬性：專屬性：指在其他成分（如雜質、降解物、輔料等）能存在下，采用的分析方法能夠正確鑒定、檢出被分析物質的特性。 線性：線性：在設計的測定范圍內，檢測結果與供試品中被分析物的濃度（量）直接呈線性關系的程度準確度：準確度：用該方法測定的結果與真實值或認可的參考值之間接近的程度。有時也稱真實度。 精密度：精密度：在規定

4、的測試條件下，同一均質供試品，經多次取樣進行一系列檢測所得結果之間的接近程度。檢測限：檢測限：試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。 名詞定義名詞定義定量限：定量限：試樣中的被分析物能夠被定量測定的最低量1 1、需要驗證的檢測項目、需要驗證的檢測項目開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列二、方法驗證的主要方面二、方法驗證的主要方面鑒別，專屬性最重鑒別，專屬性最重要要雜質檢查：包括限度雜質檢查：包括限度試驗和定量試驗試驗和定量試驗定量測定：包括專定量測定：包括專含量測定、溶出度、含量測定、溶出度、釋放度等釋放度等其他特定檢測項目其他特定檢測項目 開發部指導原則培訓系列開

5、發部指導原則培訓系列2 2、分析方法、分析方法 為完成上述各檢測項目而設定和建立的測試方法，一般包括分析方法原理、儀器及儀器參數、試劑、系統適用性試驗、 供試品溶液制備、對照品溶液制備、測定、計算及測試結果的報告等。 測試方法可采用化學分析方法和儀器分析方法。這些方法各有特點，同一測試方法可用于不同的檢測項目，但驗證內容可不相同。3 3、驗證內容、驗證內容 驗證內容包括方法的專屬性、線性、范圍、準確度、精密度、檢測限、定量限、耐用性和系統適用性二、方法驗證的主要方面二、方法驗證的主要方面 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列三、方法驗證的具體內容三、方法驗證的具體內容u鑒別：證明能與可

6、能共存的物質或結構相似化合物區分，需確證含被分析物的供試品呈正反應（如，阿卡波糖顯色反應，鈉鹽焰色反應）u雜質檢查：向供試品中加入一定量的雜質 強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化破壞u含量測定：在供試品中加入雜質或輔料，考察測定結果是否受干 擾，并與未加的供試品比較結果； 采用破壞性試驗（強光照射，高溫，高濕，酸、堿水 解及氧化） ，得到含有雜質或降解產物的試樣專屬性專屬性 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列三、方法驗證的具體內容三、方法驗證的具體內容線性線性涉及定量測定的項目，如雜質定量試驗和含量測定均需驗證。應在設計的測定范圍內測定線性關系。至少制備5個濃度。（頭孢呋辛酯顆粒

7、發補） 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列范圍范圍范圍系指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被分析物高低限濃度或量的區間。三、方法驗證的具體內容三、方法驗證的具體內容u用標準偏差或相對標準偏差表示時，取樣測定次數應至少 6次。 u精密度可以從三個層次考察：重復性、中間精密度、重現性。u重復性測定可在規定范圍內，至少用 9 次測定結果進行評價 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列三、方法驗證的具體內容三、方法驗證的具體內容u在規定范圍內，制備 3 個不同濃度的試樣，各測定 3次，報告已知加入量的回收率或測定結果平均值與真實值之差及其可信限。準確度準確度精密

8、度精密度檢測限定量限以能準確、可靠檢測被測物的最小量或最低濃度來建立。信噪比為3：1 時相應的濃度確定檢測限含有已知濃度被測物的試樣進行分析，在準確度和精密度都符合要求時確定信噪比為10：1時相應濃度確定 三、方法驗證的具體內容三、方法驗證的具體內容u對一些儀器分析方法，在進行方法驗證時，有必要將分析設備、電子儀器與實驗操作、測試樣品等一起當作完整的系統進行評估。u所有色譜方法均應進行該指標驗證，并將系統適用性作為分析方法的組成部分。 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列三、方法驗證的具體內容三、方法驗證的具體內容u指測定條件發生小的變動時，測定結果不受影響的承受程度。經試驗，應說明小

9、的變動（如流速、PH）能否符合系統適用性試驗要求，以確保方法有效。 耐用性耐用性系統適用性系統適用性 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列三、方法驗證的具體內容三、方法驗證的具體內容方法再驗證方法再驗證 原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發生部分改變等，均有必要對分析方法再次進行全面或部分驗生部分改變等，均有必要對分析方法再次進行全面或部分驗證，以保證分析方法可靠。證，以保證分析方法可靠。再驗證原則：根據改變的程度進行相應的再驗證。再驗證原則：根據改變的程度進行相應的再驗證。 已有國家標準的藥品質量研究中，基于申報的原料藥合成已有國家

10、標準的藥品質量研究中，基于申報的原料藥合成工藝、制劑處方中的輔料等一般無法保證與已上市藥品的一致工藝、制劑處方中的輔料等一般無法保證與已上市藥品的一致性，需對質量標準中部分項目進行方法的再驗證。性，需對質量標準中部分項目進行方法的再驗證。 幾個問題幾個問題v 為什么要進行方法學驗證？為什么要進行方法學驗證？v 方法驗證主要包括那幾個方面？方法驗證主要包括那幾個方面？v 需要進行驗證的檢測項目主要有哪些？需要進行驗證的檢測項目主要有哪些？v 一般有哪些驗證內容？一般有哪些驗證內容？ 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列三、方法驗證的具體內容三、方法驗證的具體內容鑒別鑒別雜質測定雜質測定定

11、量測定定量測定雜質限度雜質定量專屬性線性范圍準確度精密度檢測限定量限耐用性以下檢測項目需要做哪些驗證內容？以下檢測項目需要做哪些驗證內容？ 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列四、審評關注點四、審評關注點關于鑒別 由于一種分析方法基于被分析物的某一特定基團或某一特定由于一種分析方法基于被分析物的某一特定基團或某一特定結構結構, ,因此通常采用因此通常采用 2 2種或以上分析方法種或以上分析方法, ,而且采用不同原理的而且采用不同原理的分析方法作為鑒別項分析方法作為鑒別項, , 以加強鑒別項目的整體專屬性。以加強鑒別項目的整體專屬性。鑒別方法設置不全面忽視仿制藥鑒別項分析方法的專屬性驗證

12、如不考察由于輔料不同可能對主藥鑒別帶來的負面如不考察由于輔料不同可能對主藥鑒別帶來的負面影響影響 , ,不提供空白輔料的干擾試驗資料不提供空白輔料的干擾試驗資料 , ,無法判斷無法判斷鑒別方法的專屬性。鑒別方法的專屬性。 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列關于雜質檢查關于雜質檢查四、審評關注點四、審評關注點存在的問題: 未能對原料藥合成工藝中涉及到的起始原料、 中間體、 聚合物、 副產物等全面地進行與主藥的分離度試驗 ,往往僅是做了一部分可獲得的雜質與主藥之間的分離度實驗。忽視提供起始原料、 中間體、 聚合物、 副產物等可獲得雜質的最低檢測限 ,無法判斷在現有的檢測條件和方法下能否檢

13、出主藥中的雜質。破壞性試驗不規范：體現在試驗條件的確定,降解產物的檢測、 分離度的確定等方面。用原料藥的破壞性試驗結果作為制劑的破壞性試驗資料 ,忽視了輔料在劇烈條件下降解可能帶來的干擾和影響。未提供空白輔料的實驗圖譜和結果 ,無法判斷輔料是否干擾。當輔料對實驗結果存在干擾時 ,未能采取有效方法排除其干擾。色譜圖中主峰出現明顯的其他雜質峰,未優化實驗條件。 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列關于定量測定關于定量測定四、審評關注點四、審評關注點1驗證的內容不全面 ,忽視部分驗證內容 ,如耐用性、 樣品溶液穩定性等分析方法驗證資料。2l準確度的實驗內容不規范 ,未按要求在規定的范圍內 ,

14、設計 3個不同濃度 ,每個濃度各分別制備 3份供試品溶液進行測定。l未能按四位有效數.字提供準確度測定結果 。3樣品的測定濃度不在驗證的范圍之內。4樣品溶出量或釋放量的測定,通常采用含量測定方法 ,但有時也不完全一致。當不一致時 ,未重新提供溶出量或釋放量測定方法的驗證資料。 開發部指導原則培訓系列開發部指導原則培訓系列項目名稱項目名稱階段階段發補日期發補日期內容內容頭孢克肟干混懸劑頭孢克肟干混懸劑臨床 2009.6.21、質量研究和質量標準：（1）有關物質：建議對方法和樣品做如下研究：所附有關物質方法學研究圖譜顯示輔料在該色譜條件下有色譜峰出現，干擾有關物質測定結果。建議優化色譜條件，消除輔

15、料對有關物質檢測的干擾，將記錄色譜圖時間延長至主峰保留時間的3倍。此外，采用列表形式，用LC/MS或其他合適的方法，盡量采用原發企業進口品或者進口相同給藥途徑不同劑型品種，進行雜質種類和含量的比較分析，提供相應的研究資料和圖譜，并將其訂入標準；（2）聚合物：進行聚合物研究，并結合臨床使用的水溫進行研究；注射用頭孢美唑鈉注射用頭孢美唑鈉生產 2010.12.29 1、建議對特定雜質N-甲巰基四唑含量進行限定，進一步嚴格標準，增加該已知雜質限度；2、建議參考上市品種情況，適當提高聚合物限度要求；頭孢地嗪頭孢地嗪生產 2011.1.111、有關物質：采用國外原研企業或ICH成員國上市產品為參比制劑，對雜質種類和含量進行系統比較研究。2、參考國外原研企業或ICH成員國上市產品聚合物的詳細比較基礎上，制定合適限度；3、將異常毒性檢查項訂入質量標準頭孢特侖新戊酯膠囊頭孢特侖新戊酯膠囊 生產 200