中華人民共和國國家標準010食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中牛磺酸的測定 of in 華人民共和國衛生部發布 2010布 2010施 010 I 前 言 本標準第二法等同采用國際分析家學會（ in 本標準代替 幼兒食品和乳粉 牛磺酸的測定。 本標準與 要變化如下： 將原標準方法 增加單磺酰氯柱前衍生高效液相色譜法為第二法； 對原標準的結構進行了修改。 外標法定量采用標準曲線法； 增加附錄 A 標樣的液相色譜圖。 本標準附錄 本標準所代替標準的歷次版本發布情況為： 413 010 1 食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中牛磺酸的測定 1 范圍 本標準規定了嬰幼兒食品和乳品中牛磺酸的測定方法。 本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中牛磺酸的測定。 2 規范性引用文件 本標準中引用的文件對于本標準的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。 第一法 后衍生法 3 原理 樣品用偏磷酸溶液溶解，經超聲波振蕩提取、離心、微孔濾膜過濾后，通過鈉離子色譜柱分離，與鄰苯二甲醛（ 生反應，用熒光檢測器進行檢測，外標法定量。 4 試劑和材料 除非另有規定，所用試劑均為分析純，水為 6682 規定的一級水。 磷酸（ 檬酸三鈉( 酚( 酸( 醇( 色譜純。 酸( 氧化鉀( 苯二甲醛( 氧乙烯月桂酸醚（ 磺酸標準品：純度 99%。 磷酸溶液（ 10 g/L）：稱取 10.0 g 偏磷酸（ 用水溶解并定容至 1000 010 2 檬酸緩沖液：稱取 19.6 g 檸檬酸三鈉（ 加 950 溶解，加入 1 酚（ 用硝酸（ 至 孔濾膜過濾。 后熒光衍生溶劑（鄰苯二甲醛溶液） 硼酸鉀溶液（ 0.5 ）：稱取 30.9 g 硼酸（ 26.3 g 氫氧化鉀（ 用水溶解并定容至 1000 鄰苯二甲醛衍生溶液：稱取 g 鄰苯二甲醛（ 用 10 醇（ 解后，加入 0.5 g 用 0.5 的硼酸鉀溶液（ 容至 1000 m 微孔濾膜過濾。臨用前配制。 磺酸標準溶液 牛磺酸標準儲備溶液（ 1mg/：準確稱取 g 牛磺酸標準品（ ，用水溶解并定容至 100 備液在 4下可保存 7 天。 牛磺酸標準工作液：將牛磺酸標準儲備液（ 水稀釋制備一系列標準溶液，標準系列濃度為： 0、 5、 10、 15、 20 g/用前配制。 5 儀器和設備 效液相色譜儀，帶有熒光檢測器。 后反應器。 光衍生溶劑輸液泵。 聲波振蕩器。 5.5 ：精度為 心機：轉速 5000 轉 /分鐘。 m 微孔濾膜。 平：感量為 1 6 分析步驟 樣的處理 準確稱取固體樣品 1 g 5 g 試樣，液體樣品 5 g 20 g（精確至 樣中含牛磺酸 5 g 以上） ，加 30 磷酸溶液 （ 溶解， 充分搖勻， 移入 100 量瓶中； 放入超聲波振蕩器中振蕩 10 5 取出冷卻至室溫后， 用水定容至刻度； 樣液在 5000 轉 /分鐘條件下離心 10 取上清液經 m 微孔膜（ 濾，接取中間濾液以備進樣。 定 考色譜條件 色譜柱：鈉離子氨基酸分析專用柱（ 250 .6 同等性能的色譜柱。 流動相：檸檬酸緩沖液（ 。 流動相流速： mL/ 010 3 熒光衍生溶劑流速： mL/ 柱溫： 55 。 檢測波長：激發波長： 338 射波長： 425 進樣量： 20 L。 準曲線繪制 將牛磺酸標準系列工作液（ 次經衍生后按上述推薦色譜條件上機測定，記錄色譜峰面積，色譜圖參見附錄 A。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 液測定 將試液按上述推薦色譜條件上機測定，從標準曲線中查得試液相應的濃度。 7 分析結果的表述 果計算 1000100=( 1) 式中： X 試樣中牛磺酸的含量，單位為毫克 /100 克（ 00g） ； c 試液的進樣濃度，單位為微克 /毫升（ g/； V試樣定容容積，單位為毫升（ ； m試樣質量，單位為克（ g） 。 果表示 以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。 8 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的 10 %。 第二法 單磺酰氯柱前衍生法 9 原理 樣品用水溶解，用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白質。取上清液用丹磺酰氯衍生反應，衍生物經 紫外檢測器（波長 254 熒光檢測器（激發波長 330 射波長 530 測，外標法定量。 10 試劑和材料 除非另有規定，所用試劑均為分析純，水為 6682 規定的一級水。 腈（ ：色譜純。 乙酸（ 。 酸。 水碳酸鈉（ 。 010 4 鐵氰化鉀 N)6。 酸鋅 。 酸鈉 。 酸甲胺（甲胺鹽酸鹽） （ 。 磺酰氯（ 51色譜純。 注： 丹磺酰氯對光和濕敏感不穩定。 磺酸標準品：純度 99%。 酸（ 1 ） ：吸取 9 酸（ ，用水稀釋并定容到 100 淀劑 沉淀劑：稱取 15.0 g 亞鐵氰化鉀（ ，用水溶解并定容至 100 沉淀劑在室溫下 3個月內穩定。 沉淀劑：稱取 30.0 g 乙酸鋅（ ，用水溶解并定容至 100 沉淀劑在室溫下 3 個月內保持穩定。 酸鈉緩沖液（ （ 80 ） ：稱取 g 無水碳酸鈉（ ，加 40 溶解，用1 鹽酸（ 至 水定容至 50 溶液在室溫下 3 個月內穩定。 磺酰氯溶液 （ 1.5 mg/： 稱取 g 丹磺酰氯 （ ， 用乙腈 （ 溶解并定容至 100使用前配制。 酸甲胺溶液（ 20 mg/：稱取 2.0 g 鹽酸甲胺（ ，用水溶解并定容至 100 溶液在 4下 3 個月內穩定。 酸鈉緩沖液（ （ 10 ） ：稱取 g 乙酸鈉（ ，加 800 溶解，用冰乙酸（ 節 至 水定容至 1000 m 微孔濾膜過濾。 磺酸標準溶液 牛磺酸標準儲備溶液（ 1 mg/：稱取 g 牛磺酸標準品（ ，用水溶解并定容至100 備液在 4下可保存 7 天。 牛磺酸標準工作液（紫外檢測用） ：將牛磺酸標準儲備液（ 水稀釋制備一系列標準溶液，標準系列濃度為： 0、 5、 10、 15、 20 g/用前配制。 牛磺酸標準工作液（熒光檢測用） ：將牛磺酸標準儲備液（ 水稀釋制備一系列標準溶液，標準系列濃度為： 0、 g/用前配制。 11 儀器和設備 效液相色譜儀，帶紫外檢測器或二極管陣列檢測器或者熒光檢測器。 11.2 ：精度為 旋混合器。 聲波振蕩器。 010 5 心機：轉速 5000 轉 /分鐘。 m 微孔濾膜。 平：感量 1 12 操作步驟 樣的處理 液提取 稱取固體樣品 1 g 5 g，液體樣品 5 g 30 g 試樣（精確至 g，若用紫外檢測器，試樣中含牛磺酸宜在 1 g 以上，若用熒光檢測器，試樣中含牛磺酸宜在 50g 以上）于 100 量瓶中，加入 80 50 60 ）溶解，充分混勻，置超聲波振蕩器上振蕩 10 卻到室溫。加 1.0 淀劑（ ，渦旋混合， 1.0 淀劑（ ，渦旋混合，用水定容至刻度，充分混勻，試液于 5000 轉 /分鐘下離心 10 上清液備用。上清液在 4 暗處保存放置 24 h 穩定。 液衍生化 吸取 述上清液到 10 塞玻璃試管中，加入 酸鈉緩沖液（ ， ，充分混合，室溫避光衍生反應 2 h（ 1 h 后需搖晃 1 次） ，加入 酸甲胺溶液（ 旋混合，以終止反應，避光靜置至沉淀完全。取上清液經 m 微孔濾膜（ 濾，取濾液備用。衍生物在 4 可避光保存 48 h。 另取 準工作液（ 與試液同步進行衍生。 定 考色譜條件 色譜柱： 徑 5 m， 250 .6 同等性能色譜柱。 流動相： 10 乙酸鈉緩沖液（ 乙腈（ 70+30。 流速： mL/ 柱溫：室溫。 檢測波長：紫外檢測器或二極管陣列檢測器： 254 或熒光檢測器：激發波長： 330 射波長： 530 進樣量： 20 L。 準曲線繪制 將牛磺酸標準系列工作液（紫外檢測用）（ （熒光檢測用）（ 衍生物依次按上述推薦色譜條件上機測定，記錄色譜峰面積，色譜圖參見附錄 A。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。 液測定 將試液衍生物按上述推薦色譜條件上機測定，從標準曲線中查得試液相應的濃度。 13 分析結果的表述 試樣中牛磺酸的含量按式（ 2）計算： 1000100=( 2) 式中： X試樣中牛磺酸的含量，單位為毫克 /100 克（ 00g） ； 010 6 c試液的進樣濃度，單位為微克 /毫升（ g/； V試樣定容體積，單位為毫升（ ； m試樣質量，單位為克（ g） 。 以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。 14 精密度 在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的 10 %。 15 其他 本標準的定量限為： 當取樣量為 g 時， 第一法 0.5 00g ， 第二法中紫外檢測法為 5 00g，熒光檢測法