T/CAS951—2024Qualitycontrolspecificationsforimmunohistochemicaldetectionenzyme-labeledsecond 2 2 2 2 3 3 3 3 5 5 6 6 6 7 7 7 7 請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件起草單位：中國醫學科學院北京協和醫院、遵義醫科大學附屬醫院、南京大學醫學院附屬鼓樓醫院、安徽醫科大學第一附屬醫院、佰諾全景生物技術（北京）有限公司、北京大學第一醫院、北京實安科技有限公司、北京整合醫學學司、長治市中醫醫院、空軍軍醫大學基礎醫學院病理學教研室暨第一附屬醫院、徠卡生物科技（上院、浙江大學醫學院附屬第一醫院、中山大學腫瘤防治中心、中國醫學科學院血液病醫院（中國醫本文件主要起草人：薛曉偉、王進京、付堯、吳鴻雁、樊祥山、羅文武、焦磊、熊焰、李娜、盧佳斌、孫世珺、孫琦、戴其全、王燕、許雪英、樊1基于酶標記二抗的免疫組織化學檢測質量控制規范本文件規定了基于辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記二抗的免疫組織化學檢測實驗室基本要求、本文件適用于辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記二抗的免疫組織化學技術的檢測以及免疫組化下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用GB39707醫療廢物處理處置污染CNAS-CL02:2023醫學實驗室質量和利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記在抗體上的顯色物質（熒光素、酶、將組織浸入適宜的固定劑，使細胞內的物質盡可能保持在其生活狀態時的形態、結構和位置的2注：免疫原性物質的分子包含一種或多種帯有獨特化學在免疫學中，凡能刺激機體免疫系統產生抗體，并能與ALK：間變性淋巴瘤激酶（anaplasticALP：堿性磷酸酶（alkalinephosphatase）DAB：二氨基聯苯胺（Diaminobenzidine3HRP：辣根過氧化物酶（HorseraPBS：磷酸鹽緩沖液（Phosphatebu免疫組織化學檢測實驗室應符合《病理科建設與管理指南（試行）》的要求，實驗室空間設置估，針對生物、化學、放射及物理等危害制定防護性措施及合適的化學實驗室的空間和布局應與實驗室活動相匹配，宜設立單獨的免疫組織化學染色區b)軟件要求：軟件具備升級功能、數據儲存功能、質量控制功能和打印功能，可與現行的病a)一抗、二抗和顯色劑等應按照《體外診斷b)選擇二抗時應選擇與組織無交叉反應的酶標二抗；c)顯色劑的選擇：HRP標記的二抗均宜選用穩定性4g)含骨組織應先充分固定后進行脫鈣，使用含酸脫鈣液四乙酸（EthyleneDiamineTetraacetb)脫水過程應緩慢進行，每種梯度乙醇的作用時間宜設定為60min～120min；d)脫水劑應定期或根據組織數量進行更換，確認達到脫水效果。a)透明程序宜使用二道透明劑，宜根據組織的類型和大小及脫水機的效率a)透明后的組織應經過2次～3次浸蠟程序，每次時間為30min～90min；b)建議使用熔點為56℃~58℃或58℃~60℃的優質切片石蠟，浸蠟溫度控制在60℃~b)在包埋組織時，應根據所處理組織的類型決定組織的包埋方向；c)應根據烤片溫度確定烤片時間，例如60℃~65℃烤片時間應控制在60min～120min，70℃~80℃烤片時間應控制在30min～60min，不應高溫長時間烤片。b)新鮮組織樣本冷凍切片后應及時固定。固定液應根據實驗具體要求選擇含有丙酮（10min~d)細胞樣本如需要制備成細胞蠟塊，則離心沉淀后用濾紙或滲透性好的紙張包裹，放開始實驗前，應核對樣本檢測信息，核對無誤后進入實驗環節。手工操作流程包b)抗原修復（可選擇熱修復方式或酶修復方式）；d)3%過氧化氫封閉內源性過氧化物酶，室溫孵育10f)用免疫組織化學筆在距離組織2mm～3mm處畫圈；j)滴加適量二抗試劑（HRP/ALP標記二抗），37℃20min；l)顯色劑顯色，根據不同酶標抗體檢測系統合理搭配顯色劑（見表1），HRP標注：常用的細胞核復染劑有蘇木素和核固紅兩種，不同的復染試劑染色結果6o)分化和返藍（根據復染劑的需求），流動水沖洗3min～5min；p)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片（如DAB顯色）或水溶性封片劑封片（如c)設置玻片，部分實驗室信息系統與免疫組化機連接后，此步驟可直接在切片操作打印玻片此時不應判讀為陽性；抗體的不同克隆號在不同組織中的定位不同，此時應標注陽性部位某些抗體在不同腫瘤類型表達的部位不同，此時應標注陽性部位，要求如b)應區分在出血、壞死、刀痕和邊合型四種陽性細胞類型強度可以被觀察到，反之則為陰性；），呈細胞質內的顆粒狀，如呈胞質均勻一致的染色效果，則染色f)有些抗原（如錯配修復基因等）在正常組織普遍表達，而在特定的腫瘤中缺失表達。b)對于多臺儀器可同時做一種檢測項目，每年應對儀器設備間進行內部比對；7b)對于檢測過程中有特殊要求的可設置試劑陰性對照，如ALK檢測；d)對于新的檢測項目/新準入試劑，確定預期陰、陽性標本實驗并進行記錄，非工作液應對該a)免疫組織化學檢測實驗室應根據國家衛健委病理專業醫療質量控制指標設立免疫組化染色切片優良率以反映免疫組化切片染色及制片質量，免疫組化切片質量考核標準參a)免疫組織化學檢測實驗室應根據國家衛健委病理免疫組化染色室間質評合格率（指參加省級及以上病理質控中心、國際標準化組織或中國b)