第二章熱滅活乳酸菌微生態制劑

——全新的益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑主要內容一、傳統益生素概念二、熱滅活的乳酸菌三、國外產品臨床試驗結果四、我們的研究五、下一步研究第二章+熱滅活微生態制劑1、益生菌和益生素(Probiotic)益生菌是指能夠在人或動物體內存活，對宿主的生命健康有益的一類微生物。它是人或動物胃腸道共生微生物的培養物或其發酵產品，故又稱活菌制劑或微生態制劑。由活體微生物及其代謝產物制成的有益微生物活性制劑稱作益生素。（袁鐵錚和姚斌，2004，中國生物工程雜志）一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑乳桿菌(Lactobacillusplantarum/acidophilus)一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑糞鏈球菌(Streptococcusfaecalis)附著在小腸表面一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑酵母菌(Yeast)啤酒酵母Saccharomycescerevisiae一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑酵母菌(yeast)假絲酵母Candidaalbicans一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑益生素的作用機理-2前因：益生菌進入畜禽腸道后，在復雜的微生態環境中與近400種正常菌會合，顯現出棲生、偏生、共生、競爭或吞噬等復雜關系，從而對宿主產生營養、免疫、刺激生長及生物拮抗等生物作用，以保持胃腸道微生態環境的平衡，提高動物生長性能，防病治病，最終取得良好的保健效果或經濟效益。益生素的飼喂作用機理概括起來有三大方面，即保健、促生長和防治疾病。一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑益生素作用機理-3保健：作用機制理論基礎是微生態平衡論、失調論。從微生態學角度講，人或畜禽腸胃道疾病是由于體內菌群平衡失調所引起，使用益生素后體內有益菌群逐漸增加，并消耗氧氣而造成厭氧環境，從而抑制致病性需氧菌生長。有益菌產生的有機酸降低pH值，產生溶菌酶、過氧化氫等物質抑制有害菌及毒素的產生，恢復或維持正常菌群原有的平衡狀態，達到保健的目的。一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑促進生長：其作用機制理論基礎是微生物營養論。即產生多種消化酶，提高飼料轉化率和促進腸內營養物質的消化、吸收；降低大腸菌群數，減少營養物質內耗。產生的代謝產物可以抑制腸內胺和氨的產生；產生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等消化酶，有利于物質的分解；合成B族維生素，氨基酸、未明促生長因子等營養物質。

一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑防治疾病：

競爭性排斥作用（competitiveexclusion,CE）;

免疫刺激作用；以IgA為主。

減少胺或氨的產生；

減少致癌致變物質的產生；

代謝產物對致病菌的直接殺滅作用。一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑4、存在的缺點和問題1、受環境條件(溫度、水分、酸堿度等)的影響，其活菌制劑在生產、運輸中易失活，從而降低使用效果；2、飼料加工的高溫過程使大量的活菌致死，導致有效成份損失；3、飼料中添加的或在治療過程使用的抗生素和化學合成抗菌劑，對益生菌同樣具有殺滅或抑制作用；4、進入消化道后不能有效抵抗鹽酸、膽鹽，來不及到達腸道或無法長時間定植腸道發揮其功效；二度感染的可能。5、對動物腸道疾病的治療效果仍不盡人意。一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑4、克服缺點的技術與方法1、選育優良菌種或利用芽孢。耐高溫、耐酸、耐膽鹽或耐氧等。甚至有的公司在宣傳其具有耐藥性的乳酸菌。2、將活菌制成微膠囊。保護作用，隔離高溫、氧氣和胃酸。很有效，但成本高。3、飼料高溫加工后再噴涂。避免高溫失活。一：傳統益生素概念第二章+熱滅活微生態制劑二、熱滅活的乳酸菌制劑概念：有人嘗試將乳酸菌培養好之后，將細胞熱滅活(heat-killed)后，仍保持細胞的完整性（或碎片）作為益生素使用，結果發現同樣具有活菌的效果。后來我們將乳酸菌發酵代謝產物也加入其中，預防和治療人和動物腹瀉效果更加理想。第二章+熱滅活微生態制劑1、發展歷史法國LaboratoireduLactéol公司是這方面的先驅。醫學博士皮埃爾、布卡德(PierreBoucard)先生于一九零七年創建。并率先研究和開發出熱滅活的乳酸菌細胞制成的微生態制劑。用于預防及治療人或畜禽的腹瀉，包括抗生素相關性、細菌性和病毒性腹瀉。目前作為人或動物用藥在全球取得了空前成功。1998年我們首次在國內做了介紹與報道，并于當年展開研究。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑2、熱滅活乳酸菌制劑的優點1、收集純細胞，可制成高濃度制劑，如100-1000億/克甚至更高；2、滅活的細胞不再擔心環境條件的影響；3、不再擔心二度感染；4、同微膠囊比，生產成本大大降低。5、同抗生素一起使用有協同作用；6、不用選育耐高溫、耐抗生素菌種。7、避免了噬菌體的爆發。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑3、作用特點1、細胞濃度高，見效快；2、耐高溫、耐抗生素、耐胃酸和膽鹽，效果穩定。3、粘附到腸細胞皮面，競爭性排斥有害菌；4、選擇性抑殺有害菌，而對乳酸菌沒有作用。可作為治療藥物；5、細胞壁多糖的免疫刺激作用；6、吸附生物毒素，如黃曲霉毒素；7、預防與治療的作用。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑4、作用機理（競爭性排斥）滅活的乳酸菌細胞粘附到腸細胞表面形成具保護作用的生物膜，競爭性排斥有害菌的粘附與侵入。German和Fourniat研究證實熱滅活的LB菌株粘附于HeLa細胞，并對E.coliB41的粘附有阻礙作用二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑AdhesionofStrainLBontoHeLacells

inducingagainsttheadhesionofE.coliB41二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑AdhesionoftheHeat-killedLBStraintotheBrushBorderofIntestinalEpitheliaCells二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑競爭排斥的原理二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑4、作用機理（抑菌活性）產生的乳酸、類細菌素、類抗生素等物質對胃腸道致病菌有抑殺作用。而對產酸菌沒有抑殺作用。German等（1980）發現，有熱滅活的LB存在時，68%的外源菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌）和64%腸道致病菌的生長被延遲了10小時。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑5、作用機理(刺激產酸菌生長)發酵過程中產生的大量B族維生素（B2）能作為刺激產酸菌，如乳酸菌生長的生長因子（growthfactor）。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑4、作用機理（免疫刺激作用）給受試動物以滅活的LB菌刺激，使IgA局部水平顯著提高。Lysates由多種細菌與真菌組成。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑5、滅活菌益生素菌種要求國家有關部門批準使用的菌種；對人或動物腸道有很強的粘附能力；代謝產物對致病菌有抑殺作用；能產生生長因子，促進產酸菌的生長。對環境條件有耐受性。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態制劑三、國外產品臨床試驗

——1、人類臨床試驗1992-1994年對腸易激綜合征的六項癥狀指標（腹痛、腹脹、排便次數、糞便稀軟、便中帶粘液及排便不完全）以滅活的LB菌處理，達到50%的有效治愈率。對30例慢性腹瀉進行治療，29例有不同程度的改善，達96.6%。特別是對I類慢性肝源性腹瀉效果尤佳。（趙洪濤，1994）第二章+熱滅活微生態制劑對嬰幼兒輪狀病毒性腸炎的治療效果顯著。治療組有效率達91.7%，補充電解質和水份組為63.3%，差異顯著(P<0.01)。(孫先軍，1996）。治療使用抗生素后引起的小兒腹瀉。治療組治愈率達73%；對照組為20%。差異顯著（P<0.01)三：國外產品臨床試驗第二章+熱滅活微生態制劑2、動物臨床試驗試驗設計（法國）260只3周齡小豬分成4組，37天試驗飼料抗生素LB添加量L1加入25萬個/克飼料L2加入50萬個/克L4不加250萬個/克C加入0三：國外產品臨床試驗第二章+熱滅活微生態制劑平均日增重/飼料報酬22%16%三：國外產品臨床試驗第二章+熱滅活微生態制劑四、我們的研究乳桿菌的分離純化與鑒定1、從動物糞便中分離出多株乳酸菌；2、耐酸、耐膽鹽試驗；可耐受0.6%膽鹽，pH值低至2.0。3、生長快、產酸量大。4、發酵產物對沙門菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有抑制作用。（可能是類抗生素）第二章+熱滅活微生態制劑對腸道致病菌的抑制作用大腸桿菌O78雞沙門氏菌發酵液及細胞煮沸10min煮沸30min第二章+熱滅活微生態制劑乳桿菌及其發酵液處理大腸桿菌大腸桿菌O-78先培養24小時，之后與乳桿菌發酵液同培養24小時。大腸桿菌全部被滅活。四：我們的研究第二章+熱滅活微生態制劑熱滅活乳桿菌對竹絲肉雞免疫性能的影響在基礎日糧中添加熱滅活乳桿菌制劑，研究其對竹絲肉雞免疫性能的影響。結果表明熱滅活乳桿菌制劑能明顯地促進竹絲肉雞法氏囊的生長發育和機體的細胞免疫水平。在28日齡時，0.15‰添加組法氏囊指數比對照組高36.1%，差異顯著(P<0.05)；T淋巴細胞的轉化率0.10‰與0.15‰添加組比對照組分別高