2食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)植物源性食品中敵螨普和6種敵螨普酚留量的測定液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法本文件規(guī)定了植物源性食品中敵螨普和6種敵螨普酚殘留量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定方法。本文件適用于植物源性食品中敵螨普和6種敵螨普酚殘留量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的應(yīng)用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3原理試樣用乙腈提取，提取液經(jīng)分散固相萃取凈化，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除非另有說明，在方法中僅使用分析純的試劑，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。4.1試劑4.1.1乙腈（CH3CN，CAS號：75-05-8）。4.1.2乙腈（CH3CN，CAS號：75-05-8）：色譜純。4.1.3甲醇（CH3OH，CAS號：67-56-1）：色譜純。4.1.4氯化鈉（NaCl，CAS號：7647-14-5）。4.1.5乙酸鈉三水合物（CH3COONa·3H2O，CAS號：6131-90-4）。4.1.6乙酸（CH3COOH，CAS號：64-19-7）。4.1.7無水硫酸鎂（MgSO4，CAS號：7487-88-9）。4.1.8檸檬酸鈉二水合物（C6H5Na3O7·2H2O，CAS號：6132-04-3）。4.1.9檸檬酸二鈉鹽倍半水合物（C6H6Na2O7·1.5H2O，CAS號：6132-05-4）。4.1.10甲酸（HCOOH，CAS號：64-18-6）：色譜純。4.1.11甲酸銨（HCOONH4，CAS號：540-69-2）。4.2溶液配制4.2.1乙腈-乙酸溶液（99+1，體積比）：量取10mL乙酸（4.1.6）加入990mL乙腈（4.1.2）中，混勻。4.2.20.01%甲酸水溶液：吸取0.1mL甲酸（4.1.10），用水溶解并稀釋至1000mL，搖勻。34.2.30.01%甲酸甲醇溶液：吸取0.1mL甲酸（4.1.10），用甲醇（4.1.3）溶解并稀釋至1000mL，搖勻。4.2.4甲酸銨-甲酸水溶液（2mmol/L）：稱取0.1261g甲酸銨（4.1.11），用0.01%甲酸水溶液（4.2.2）溶解并稀釋至1000mL，搖勻。4.2.5甲酸銨-甲酸甲醇溶液（2mmol/L稱取0.1261g甲酸銨（4.1.11用0.01%甲酸甲醇溶液（4.2.3）溶解并稀釋至1000mL，搖勻。4.3標(biāo)準(zhǔn)品4.3.1敵螨普（包含6種異構(gòu)體）（C18H24N2O6，CAS號：39300-45-3）：純度≥98%。4.3.26種敵螨普酚（C14H20N2O5）：純度≥98.5%，CAS號參見附錄A。4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制4.4.1敵螨普標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L準(zhǔn)確稱取10mg（精確至0.1mg）敵螨普標(biāo)準(zhǔn)品（4.3.1用甲醇（4.1.3）或乙腈（4.1.2）溶解并分別定容至10mL，避光-18℃及以下條件保存，有效期1年。4.4.26種敵螨普酚標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（6000mg/L）：分別準(zhǔn)確稱取6種敵螨普代謝物標(biāo)準(zhǔn)品（4.3.2）各10mg（精確至0.1mg），分別用甲醇（4.1.3）或乙腈（4.1.2）溶解并分別定容至10mL，分別得到6種敵螨普酚標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，避光-18℃及以下條件保存，有效期1年。4.4.36種敵螨普酚混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（10mg/L）：吸取一定量的6種敵螨普酚混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（4.4.2）于容量瓶中，用乙腈（4.1.2）定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存，有效期6個(gè)月。4.4.4敵螨普標(biāo)準(zhǔn)溶液（10mg/L）：準(zhǔn)確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（4.4.1）于容量瓶中，用乙腈（4.1.2）定容至刻度，避光-18℃及以下條件保存，有效期6個(gè)月。4.5材料4.5.1乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）：粒徑40μm～60μm。4.5.2十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）：粒徑40μm～60μm。4.5.3石墨化炭黑（GCB）：粒徑40μm～120μm。4.5.4微孔濾膜（有機(jī)相）：13mm×0.22μm，或相當(dāng)者。5儀器5.1液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧離子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.01mg和0.01g。5.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于5000r/min。5.4組織搗碎機(jī)。5.5渦旋混合器。6試樣制備6.1試樣制備樣品測定部位按照GB2763-2021附錄A的規(guī)定執(zhí)行。4食用菌、熱帶和亞熱帶水果（皮可食）隨機(jī)取樣1kg，水生蔬菜、莖菜類蔬菜、豆類蔬菜、核果類水果、熱帶和亞熱帶水果（皮不可食）隨機(jī)取樣2kg，瓜類蔬菜和水果取4~6個(gè)個(gè)體（取樣量不少于1kg），其他蔬菜和水果隨機(jī)取樣3kg。對于個(gè)體較小的樣品，取樣后全部處理；對于個(gè)體較大的基本均勻樣品，可在對稱軸或?qū)ΨQ面上分割或切成小塊后處理；對于細(xì)長、扁平或組分含量在各部分有差異的樣品，可在不同部位切取小片或截成小段后處理；取后的樣品將其切碎，充分混勻，用四分法取一部分或全部用組織搗碎機(jī)勻漿后，放入聚乙烯瓶中。干制蔬菜、水果和食用菌隨機(jī)取樣500g，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中。谷類隨機(jī)取樣500g，粉碎后使其全部可通過425μm的標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，放入聚乙烯瓶或袋中。油料、茶葉、堅(jiān)果和香辛料隨機(jī)取樣500g，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中。植物油類攪拌均勻，隨機(jī)取樣500mL放入聚乙烯瓶中。6.2試樣貯存將試樣按照測試和備用分別存放。于-18℃及以下條件保存。7分析步驟7.1蔬菜、水果、食用菌和糖料加入4g無水硫酸鎂、1g氯化鈉、1g檸檬酸鈉二水合物、0.5g檸檬酸二鈉鹽倍半水合物，劇烈震蕩1min后4200r/min離心5min。定量吸取上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中（每毫升提取液使用150mg無水硫酸鎂、25mgPSA）；對于顏色較深的試樣，離心管中另加入GCB（每毫升提取液使用2.5mg），渦旋混勻1min。4200r/min離心3min，吸取上清液過微孔濾膜（4.5.4），待測定。7.2谷物、油料和堅(jiān)果稱取5g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加10mL水渦旋混勻，靜置30min。加入15mL乙腈-乙酸溶液（4.2.1劇烈震蕩1min，加入6g無水硫酸鎂、1.5g乙酸鈉三水合物，劇烈震蕩1min后4200r/min離心5min。定量吸取上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中（每毫升提取液使用150mg無水硫酸鎂、50mgC18和50mgPSA），渦旋混勻1min。4200r/min離心3min，吸取上清液過微孔濾膜（4.5.4），待測定。7.3茶葉和香辛料稱取2g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加10mL水渦旋混勻，靜置30min。加入15mL乙腈-乙酸溶液（4.2.1劇烈震蕩1min，加入6g無水硫酸鎂、1.5g乙酸鈉三水合物，劇烈震蕩1min后4200r/min離心5min。定量吸取上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中（每毫升提取液使用150mg無水硫酸鎂、50mgC18、50mgPSA和25mgGCB渦旋混勻1min。4200r/min離心3min，吸取上清液過微孔濾膜（4.5.4），待測定。7.4植物油5稱取2g試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，加入5mL水。加入10mL乙腈（4.1.1劇烈震蕩1min，加入4g無水硫酸鎂、1g氯化鈉、1g檸檬酸鈉二水合物、0.5g檸檬酸二鈉鹽倍半水合物，劇烈震蕩1min后4200r/min離心5min。定量吸取上清液至內(nèi)含除水劑和凈化材料的塑料離心管中（每毫升提取液使用150mg無水硫酸鎂、50mgC18和50mgPSA渦旋混勻1min。4200r/min離心3min，吸取上清液過微孔濾膜（4.5.4），待測定。7.5測定7.5.1液相色譜參考條件a）色譜柱：C18，2.1mm（內(nèi)徑）×100mm，1.8μm，或相當(dāng)者；b）流動相：A相為甲酸銨-甲酸甲醇溶液（4.2.5B相為甲酸銨-甲酸水溶液（4.2.4）。流動相梯度條件見表1；c）流速：0.2mL/min;d）柱溫：40℃;e）進(jìn)樣量：2μL。表1流動相及其梯度條件（VA+VB）minA（VA）B（VB）039713977.57030982982397233977.5.2質(zhì)譜參考條件a）離子源類型：電噴霧離子源；b）掃描方式：負(fù)離子掃描；c）離子噴霧電壓：3000V；d）離子源溫度：300℃;e）霧化氣流速：3.0L/min；f）干燥氣流速：10.0L/min；g）加熱氣流速：10.0L/min；h）加熱模塊溫度：400℃;i）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），多反應(yīng)監(jiān)測條件見表2。表2多反應(yīng)監(jiān)測條件表V6295.1/235.27.5.3基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線7.5.3.1敵螨普基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線選擇與被測樣品性質(zhì)相同或相似的空白樣品按照7.1～7.4部分進(jìn)行前處理，得到空白基質(zhì)溶液。精確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級用空白基質(zhì)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為0.002mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.02mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L和0.5mg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，根據(jù)儀器性能和檢測需要選擇不少于5個(gè)濃度點(diǎn)，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。以農(nóng)藥定量用子離子的質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)，相對應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制敵螨普基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。7.5.3.2敵螨普酚基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線選擇與被測樣品性質(zhì)相同或相似的空白樣品按照7.1～7.4部分進(jìn)行前處理，得到空白基質(zhì)溶液。精確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級用空白基質(zhì)溶液稀釋成質(zhì)量濃度為0.0012mg/L、0.0018mg/L、0.003mg/L、0.006mg/L、0.012mg/L、0.018mg/L、0.03mg/L、0.06mg/L、0.12mg/L、0.18mg/L和0.3mg/L的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，根據(jù)儀器性能和檢測需要選擇不少于5個(gè)濃度點(diǎn)，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定。以農(nóng)藥定量用子離子的質(zhì)量色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)，相對應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制敵螨普酚基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。7.5.4定性及定量7.5.4.1保留時(shí)間被測試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。7.5.4.2離子豐度比在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測定時(shí)，如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標(biāo)化合物選擇的子離子均出現(xiàn)，而且同一檢測批次，對同一化合物，樣品中目標(biāo)化合物的離子豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)農(nóng)藥。7表3定性時(shí)離子豐度比的最大允許偏差>50%>20%至50%>10%至20%±25%±50%7.5.4.3定量外標(biāo)法定量。7.6試樣溶液的測定將基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時(shí)間和離子豐度比定性，測得定量用子離子的質(zhì)量色譜圖峰面積，外標(biāo)法定量，待測樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的定量測定線性范圍之內(nèi)，超過線性范圍時(shí)應(yīng)根據(jù)測定濃度進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進(jìn)行分析。7.7平行試驗(yàn)按以上步驟對同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測定。7.8空白試驗(yàn)除不加試樣外，采用完全相同的測定步驟進(jìn)行平行操作。8結(jié)果計(jì)算試樣中各農(nóng)藥殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，按公式（1）或公式（2）計(jì)算。式中：ω試樣中被測物殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；ρ1基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；ρ2從基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中得到的試樣溶液中被測物的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/LA——試樣溶液中被測物的質(zhì)量色譜圖峰面積；As——基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的質(zhì)量色譜圖峰面積；V——提取液體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，含量超1mg/kg時(shí)保留三位有效數(shù)字。9精密度在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不得超過重復(fù)性限（r），參見附錄B。在再現(xiàn)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測試結(jié)果的絕對差值不得超過再現(xiàn)性限（R），參見附錄B。8本標(biāo)準(zhǔn)方法對敵螨普總量（以敵螨普計(jì)）的定量限為0.009mg/kg～0.043mg/kg（參見附錄C）。11色譜圖敵螨普和6種敵螨普酚的標(biāo)準(zhǔn)溶液多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖參見附錄D。9敵螨普酚6種異構(gòu)體6種敵螨普酚見表A.1。表A.16種敵螨普酚12,4-dinitro-6-(1-methylheptyl)phe22,4-Dinitro-6-(1-ethylhexyl)32,4-Dinitro-6-(1-propylpentyl)ph42,6-Dinitro-4-octan-2-ylphe2,6-dinitro-4-(1-methylhepty