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文檔簡介

細胞器的分別河北大學細胞生物學實驗室細胞器的分別細胞由細胞膜、細胞核和細胞質組成，細胞質中含有假設干細胞器和細胞骨架等，這些也稱作亞細胞組分。對于細胞的構造和功能的研討，是細胞生物學的根本課題，其重要的研討手段之一是分別純的亞細胞組分，察看它們的構造或進展生化分析。分別亞細胞組分的方法主要有差速離心和密度梯度離心。在密度均一的介質中由低速到高速逐級離心，用于分別不同大小的細胞和細胞器。速度逐漸提高，樣品按大小先后沉淀差速離心

〔differentialcentrifugation〕

差速離心在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、最后為核蛋白體。由于各種細胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢沉降顆粒經常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中，普通反復2～3次效果會好一些。差速離心只用于分別密度和大小懸殊的細胞，更多用于分別細胞器。對于精細的分別，那么是密度梯度離心效果更好。密度梯度離心

〔densitygradientcentrifugation〕

用一定的介質在離心管內構成一延續或不延續的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質的頂部，經過重力或離心力場的作用使細胞分層、分別。這類分別又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種。A等速度沉降，B等密度沉降密度梯度離心速度沉降〔velocitysedimentation〕主要用于分別密度相近而大小不等的細胞或細胞器。這種沉降方法所采用的介質密度較低，介質的最大密度應小于被分別生物顆粒的最小密度。生物顆粒〔細胞或細胞器〕在非常平緩的密度梯度介質中按各自的沉降系數以不同的速度沉降而到達分別。等密度沉降〔isopycnicsedimentation〕適用于分別密度不等的顆粒。細胞或細胞器在延續梯度的介質中經足夠大離心力和足夠長時間那么沉降或漂浮到與本身密度相等的介質處，并停留在那里到達平衡，從而將不同密度的細胞或細胞器分別。介質的最高密度應大于被分別組分的最大密度，而且介質的梯度要求較高的陡度，不能太平緩。這種方法適于分別細胞器，而不太適于分別和純化細胞。葉綠體的分別實驗方法1.選取新穎的嫩菠菜葉片，洗凈擦干后去除葉梗和粗脈，撕成小碎塊，稱3g放于玻璃勻漿器中，參與10ml0.35MNaCl溶液，勻漿3～5min。2.勻漿液用4層紗布過濾于50ml燒杯中。3.將濾液平分到2個離心管中，天平配平，1000r/min下離心2min。棄去沉淀。4.將上清液在3000r/min下離心5min。棄去上清，沉淀即為葉綠體。5.將沉淀用0.35MNaCl溶液懸浮，取一滴葉綠體懸液滴于載片上，加蓋片察看：①在普通光鏡下察看；②在熒光顯微鏡下察看。葉綠體的分別實驗結果1.普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖型，在

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