大腸桿菌檢測方法一、檢測流程圖注：（1） ］代表非糞大腸桿菌，沒必要在進行下一步鑒定。（2）典型菌落：深紫黑色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，具有金屬光澤。也有呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紫色，中心較深的菌落。二、培養基和試劑雙倍乳糖膽鹽培養基（貨號：022041，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取60g到1L蒸餾水或去離子水，加熱攪拌完全溶解，分裝到帶有小倒管的試管,115°C高壓滅菌20min。伊紅美藍培養基（貨號：022060，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取37.5g,加入蒸餾水或去離子水1L,121°C高壓滅菌15min。蛋白胨水（貨號：022110，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取25g到1L蒸餾水或去離子水，加熱攪拌完全溶解，分裝到試管，121C高壓滅菌15min。靛基質試劑柯凡克試劑：5g對二甲氨基苯甲醛溶于75ml戊醇，緩慢加入濃鹽酸25ml。革蘭氏染色1）染液制備結晶紫染色液，革蘭氏碘液，脫色液（95%乙醇），復染液（沙黃復染液/稀石碳酸復紅液）2）染色法A將涂片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染1min,水洗。B滴加革蘭氏碘液，作用1min,水洗。C滴加95%乙醇脫色，約30s,或將乙醇滴滿整個涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個涂片，脫色10s,水洗。D滴加復染液，復燃1min,水洗，待干，鏡檢。3）染色結果革蘭氏陽性呈紫色，革蘭氏陰性呈紅色。銅綠假單胞桿菌檢測方法檢測流程圖革蘭氏染色.—■-I! i檢測流程圖革蘭氏染色.—■-I! i'陽］V注：（1） 代表非銅綠假單胞桿菌，沒必要在進行下一步鑒定。（2） 典型菌落：扁平無定形，向周邊擴散或略有蔓延，表面濕潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養基常擴散有水溶性色素。（3）氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在平皿內，用無菌玻璃棒挑取可疑菌落涂在濾紙上。滴加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試劑，在15s-30s之內出現粉紅色或紫紅色為陽性，陰性不變色。（4） 綠膿菌素試驗：取可疑菌落2-3個，分別接種在綠膿菌.素測定培養基上，置37°C培養24h,加入氯仿3-5m1,充分振蕩是培養物中的綠膿菌素溶解于氯仿內，待提取液為藍色時,將其轉移到試管并加入lmol/L鹽酸lml,振蕩，靜置。上層鹽酸出現粉紅色到紫紅色為陽性。（5） 硝酸鹽還原產氣試驗：取可疑菌落，接種硝酸鹽蛋白胨水培養-基，37C培養24h。小倒管有氣體為陽性。（6） 明膠液化試驗:取可疑菌落，穿刺接種在明膠培養基,37C培養24h后,放冰箱10-30min,陽性呈溶解狀，陰性為凝固不溶。（7） 42C生長實驗：取可疑菌落接種普通培養基，41-42C培養24-48h,若能生長為陽性，不生長為陰性。二、培養基和試劑SCDLP液體培養基（貨號：027010,廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取38g到1L蒸餾水或去離子水，加熱攪拌完全溶解，分裝量90ml,121C高壓滅菌20min。十六烷基三甲基溴化銨培養基（貨號：027040，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取33.3g到1L蒸餾水或去離子水，115C高壓滅菌20min。綠膿菌素測定用培養基（貨號：027050，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取46.4g到1L蒸餾水或去離子水，再加10g甘油，加熱攪拌完全溶解，分裝試管，115C高壓滅菌20min。放置成斜面。硝酸鹽蛋白胨水培養基（貨號：027060，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取15.5g到1L蒸餾水或去離子水，加熱攪拌完全溶解，分裝到帶有小倒管的試管,115C高壓滅菌20min。明膠培養基（貨號：022250，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取128g到1L蒸餾水或去離子水，加熱攪拌完全溶解，分裝試管（60-75mm）,115C高壓滅菌20min。垂直放置待其凝固。營養瓊脂培養基（貨號：022020，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取33g到1L蒸餾水或去離子水，121C高壓滅菌15min。

金黃色葡萄球菌檢測方法注：（1） ;代表非金黃色葡萄球菌，沒必要在進行下一步鑒定。（2）典型菌落：金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。（3） 甘露醇發酵試驗：取可疑菌落，接種甘露醇培養基，液面加2-3mm滅菌液體石蠟，37°C培養24h,產酸為陽性。（4） 血漿凝固酶試驗：取1：4新鮮血漿0.5m1,置于滅菌小試管，加入待檢菌24h肉湯培養物0.5ml。混勻，放37C培養箱，每半小時觀察一次，6h內出現凝塊，則為陽性。同時要做陽性和陰性菌株肉湯培養物對照實驗。二、培養基和試劑SCDLP液體培養基（貨號：027010，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取38g到1L蒸餾水或去離子水，加熱攪拌完全溶解，分裝量90ml，121C高壓滅菌20min。血瓊脂培養基（貨號：024060，廠家：廣東環凱微生物科技有限公司）稱取40g到1L蒸餾水或去離子水，121C高壓滅菌15min。使用時每100ml培