醫學細胞生物學設計性實驗報告

實驗項目一：動物細胞融合實驗原理兩個或兩個以上的細胞在自發或誘導條件下合并成為一個雙核或多核細胞的過程成為。在通常情況下，兩個細胞接觸并不會發生融合現象。因為各自存在完整的細胞膜，在特殊融合誘導物的作用下，兩個細胞膜發生一定變化，就可以促進兩個或多個細胞聚集，相接觸的細胞膜之間融合，繼而細胞質融合，形成一個大的融合細胞，在自然界的就是細胞融合的過程。

細胞融合受精

目前，細胞融合的誘導物種類很多，常用的主要有滅活的仙臺病毒，聚乙二醇（PEG）和電脈沖。目前應用最廣泛的是聚乙二醇，因為它易得，簡單，且融合效果穩定。實驗用品

（1).材料：雞血。

（2).試劑：Hanks液,PEG溶液(MV=400)，1640液（含10%滅活小牛血清和不含血清的兩種），0.85%生理鹽水，0.2%次甲基藍染

(3).儀器設備：顯微鏡(800r/min)，離心機，水浴箱，酒精燈，吸管，載玻片、蓋玻片，濾紙。

注意事項

1.制備50%PEG一定要保溫在37℃水浴中，不然冷卻后會有結晶析出。2.在離心管中加PEG之前，一定要將離心管倒置在濾紙上，流盡液體，否則殘留液會改變PEG的濃度。3.融合過程觀察：分別于溫育5min、10min、20min、30min取細胞懸液一滴制成臨時裝片。

兩個細胞核發生，形成一個含有兩個或多個核的圓形細胞。

預期結果融合細胞融合過程實驗原理：實驗項目二：細胞核的分離與鑒定

細胞核。細胞內各種結構的比重和大小都不相同，在同一離心場內的沉降速度也不同，用不同的轉速和不同的介質離心，就可以將細胞內各組分分級分離出來。細胞核的分離就是利用了細胞核的比重大小與細胞內其他組分不同，先將組織制成勻漿，再在懸浮的均勻介質中進行離心，分離，甲苯胺藍又可以將細胞核染成藍紫色，這樣，就可以鑒別分離出來的細胞核。實驗用品：材料：小白鼠試劑：生理鹽水,0.25mol/L蔗糖，0.003mol/L氯化鈣溶液，1%甲苯胺藍染液儀器設備：顯微鏡，普通離心機，天平，離心管，滴管，玻璃漏斗，量筒，25ml燒杯，解剖剪，鑷子，沖洗瓶，紗布，伯樂均漿器，載玻片，蓋玻片，染色盤架實驗步驟：斷頭處死小白鼠迅速開腹取肝加8ml預冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L綠化高永液于燒杯中，將剪碎的肝組織倒入玻璃勻漿器，是勻漿器下端侵入盛有冰塊的器皿。盡量剪碎肝組織，取1克放入燒杯中反復洗滌手提尾部使其血液盡量流出左手握持勻漿器右手將勻漿搗桿垂直插入管中勻漿，直至看不到明顯的組織塊過濾勻漿液于離心管中

2500r/min離心15min離心

5到7分鐘后取上清液制一張涂片1將原離心管中剩余上清液吹打成沉淀成懸液另制涂片2滴染甲苯胺藍染液用8層紗布滴染甲苯胺藍染液

5到7分鐘洗滌，晾干洗滌，晾干鏡檢注意事項：1.操作規范，防止試劑污染。2.細胞懸液的涂片制作要輕柔。3.使用離心機要注意平衡，轉速從低到高。預期結果：低倍鏡下找到標本，再換高倍鏡，可見肝細胞核已游離出來，被染成藍紫色，圓形，中央有2到4個甚至更多個深藍色的核仁。設計組名單姓名學號王正旭1120150135羅秀1120150136徐鷺1120150137汪俊成112015