苦木有效成分生物堿提取工藝的研究

中藥具有清熱解毒、藥物殘留低、耐藥性好等特點。我國中草藥資源豐富,對其進行合理開發和利用具有重要意義和廣闊的應用前景。苦木為苦木科苦木屬植物,主要分布于黃河流域以南各省區,以廣東、廣西最多。苦木性苦,寒,歸肺、大腸經。它的主要藥用成分為莖、枝、葉所含的苦木素(Quassin)、異苦木素(Picrasmin)、苦樹素(Picrasin)、苦木酮堿(Nigakinone)等十幾種生物堿。目前,己有研究表明苦木具有抗菌消炎、解熱降壓、抗癌、抗蛇毒等作用。廣西獸醫研究所獸藥開發中心利用廣西特有的優勢資源,提取苦木的生物堿有效成分,用于預防和治療雞的大腸桿菌病,取得了良好的療效。本文主要比較了苦木超微粉與粗粉中苦木生物總堿的提取率,優化生產工藝,以便更好地開發利用苦木資源。1材料和方法1.1材料表面1.1.1特效藥苦木,采自廣西馬山一帶。1.1.2甲基甲基苯磺酸酯碘化鉀基甲基酰胺基甲基酰胺基甲基]碘化汞鉀、碘、碘化鉍鉀、硅鎢酸·水合、碘化鉀、酒精、鹽酸、石油醚、苯、三氯甲烷、正丁醇、吐溫-80、正已烷、異辛烷、N,N-二甲基甲酰胺。1.1.3酶表面設計電動粉碎機、有蓋錐形滲漉筒、R501BSeastar星海旋轉蒸發器、DZF-6020型真空干燥箱、HH-S型數顯恒溫水浴鍋、pH計。1.2方法1.2.1藥物加工苦木粗粉,用電動粉碎機粉碎三次,過80目篩。苦木超微粉,由肇慶市乾泰科技發展有限公司將苦木粗粉加工成直徑約為5微米的超微粉。1.2.2脂溶性化合物稱取2kg苦木粉,加入2000ml,pH=2的80%乙醇,拌勻、放置1小時,裝筒,繼續加80%乙醇浸漬24小時后開始滲漉,控制流速為1~3ml/min。回收滲漉液至藥粉的8倍量。旋轉蒸發儀50℃減壓回收溶劑,直到濃縮液無明顯乙醇味。加適量5%HCl于濃縮液中調pH至3,攪拌、溶解,靜置過夜,析出不溶于酸的樹脂和油脂,過濾,濾液用等量石油醚萃取3次,除脂溶性雜質,再用等量苯萃取除酸性和中性雜質。將酸性水母液加濃氨水調pH至9~10,此時出現較多沉淀,靜置過夜,分離上清與沉淀。上清液用氯仿萃取5次,蒸餾水洗3次,50℃減壓回收氯仿,水浴、真空干燥,得脂溶性生物堿,稱重。將堿性水母液用正丁醇萃取5次,減壓回收正丁醇,水浴、真空干燥,得水溶性生物堿,稱重。將酸水堿化中出現的沉淀分別用氯仿和正丁醇各萃取5次,充分提取苦木中的脂溶性和水溶性生物堿,稱重。為精確計算得率,苦木超微粉和粗粉中苦木生物堿的提取各重復一次。1.2.3碘化汞鉀mar試劑碘-碘化鉀試劑:取碘0.5g與碘化鉀1.5g,加水25ml使溶解。碘化鉍鉀試劑:7.3g碘化鉍鉀,冰醋酸10ml,加蒸餾水60ml。碘化汞鉀(Mayer)試劑:氯化汞1.36g和碘化鉀5g各溶于20ml水中,混合后加水稀釋至100ml。硅鎢酸試劑:5g硅鎢酸溶于100ml水中,加鹽酸少量至pH2左右。取真空干燥后的生物堿各5mg溶于5ml水或有機溶劑,每個樣本滴加200μl上述試劑,有三種以上試劑反應呈明顯陽性,即能確定樣本中含有生物堿。2結果與分析2.1苦木堿提取提取結果如表1。從結果可看出,苦木超微粉中生物堿的平均提取率要遠高于苦木粗粉。2.2上試劑反應中企業苦木生物堿的定性試驗結果見表2。判定標準:有三種以上試劑反應呈明顯陽性,即能確定樣本中含有生物堿。從結果可以判斷,氯仿和正丁醇提取物中含生物堿,萃取后的上清液和沉淀中幾乎不含生物堿,說明提取完全。3討論3.1酸水堿化法提取本實驗探索出提取苦木生物堿比較合適的方法。游離生物堿及其鹽類一般都能溶于甲醇和乙醇,但甲醇毒性很大,因此用乙醇作為生物堿的提取溶劑應用較為普遍。醇類溶劑提取法一般采用浸漬法、滲漉法或熱回流提取法,本實驗采用滲漉法則更為理想,乙醇經過減壓回收后可以再利用,從而節約大量溶劑,適用于工業化生產。乙醇滲漉后回收溶劑得生物堿粗品,但得到的生物堿粗品中還含有脂溶性雜質,故利用生物堿在酸性條件下成鹽能溶于水的性質,將生物堿粗品溶于酸水,用親脂性有機溶劑除去不溶于水的脂溶性雜質,再將酸水堿化使生物堿游離,利用游離生物堿一般為脂溶性的性質,用氯仿萃取,回收氯仿得到脂溶性生物堿。剩下的堿性水母液用生物堿試劑檢驗,呈明顯的生物堿反應,說明堿性水母液中還含有在酸性和堿性條件下均不被游離的水溶性生物堿,因此堿性水母液需用極性較大的有機溶劑正丁醇萃取,減壓回收正丁醇即得水溶性生物堿。酸水堿化后出現了較多沉淀,從表1數據可看出,酸水堿化后上清中生物堿提取率較高的,沉淀中生物堿提取率較低,與之成反比。我們將產生的沉淀分別用氯仿和正丁醇各萃取5次,再萃取之后的沉淀經生物堿定性試驗檢定為陰性,說明沉淀中存在較多的生物堿也已被充分提取。3.2提取率對藥物有效成分的影響隨著我國中藥產業化和現代化研究方向的確立,超微粉碎技術在中藥加工中的應用也越來越多。藥物經細胞破壁后,破壁細胞中的內容物可直接接觸溶媒,細胞級微粉中藥的有效成分釋出量和釋出速度加快,使得對藥物有效成分的提取率比普通粉碎方法所獲得的中藥粉末高,其釋出的藥物有效成分的種類也要比普通粉碎方法全。盡管超微粉碎技術將中藥細胞膜或細胞壁打破,但沒有使藥物產生理化性質的改變,不會影響中藥的性味歸經、功能主治,更不會對用藥安全構成威脅。從本試驗可以看出,超微粉碎技術不僅可以保留苦木中的生物堿成分,而且可以使細胞破壁,有效成分直接暴露出來,