血小板檢測現狀及在各類疾病中的應用研究TOC\o"1-3"\h\u1前言 42血小板檢測現狀 42.1血小板聚集功能檢測 42.1.1比濁法檢測 42.1.2全血法檢測 52.1.3其他檢測方法 52.2血小板活化功能檢測 63血小板檢測在各類疾病中的應用 63.1血小板檢測在糖尿病中的應用 63.2血小板檢測在免疫炎癥反應中的應用 73.3血小板檢測在心血管疾病中的應用 73.4血小板檢測在腫瘤轉移中的應用 84重組人血小板生成素的應用及發展 85小結 9參考文獻 101前言血小板作為當前臨床所發現的最小的循環血細胞，具有維持出凝血平衡、促進機體止血、發揮免疫的重要作用。就目前臨床發現而言，血小板并不存在細胞核，但是細胞內卻存在不少顆粒，其中有些分子顆粒承擔了促進機體各類生理機制運轉的重要任務[1]。盡管單個血小板體積較小，但是血液中的運轉量較為活躍，其活躍度可以說僅次于紅細胞。根據臨床數據報道顯示血小板在血液中含量的異常與各類疾病的病理過程有極大的關系，包括糖尿病、血栓性疾病、腫瘤、炎癥等，因而對于人體重要生理活動的運作及維持生命運轉均發揮重要作用。當前在血小板功能的各項研究中，血栓和止血是當前有較多相關研究的重要觀點，但是除了血栓性疾病，隨著越來越多臨床研究的開展，血小板也逐漸在糖尿病、膿毒癥、炎癥等疾病中展開了相關研究[2]。通過文獻查找國內外目前有關血小板應用及發展的相關報道，對目前血小板在不同疾病中的作用機制及血小板制品的應用進行了解，發現其缺少綜合及系統的闡述，故本論文對血小板的檢測現狀及其在臨床應用發展情況進行分析，從而為當前臨床相關疾病的治療及對癥處理方式提供新思路的指導。2血小板檢測現狀2.1血小板聚集功能檢測血小板聚集試驗通常可作為血小板功能不全疾病例如凝血酶原狀態及血栓性疾病的主要臨床診斷方式，當前臨床將其作為首要的篩查標準。該試驗通過跨膜激活血小板的各種衍生物與血小板膜受體的相互作用，激活膜表面的另一種受體糖蛋白IIb/IIa，與血漿中的纖維蛋白原結合，從而使得血小板發生聚集[3]。血小板聚集的測定是對血小板活化和釋放反應、膜蛋白受體和其他綜合因子常見表現進行反映，是血小板功能檢測的基礎，故而臨床上常對血小板聚集功能進行測定，該指標也是臨床檢測血小板活化程度的重要方式[4]。常規血小板檢測方法并不能直接對異常的血小板聚集功能進行反映，且該方法缺乏一定的靈敏性。2.1.1比濁法檢測臨床上檢測血小板聚集功能的方法有很多種，但最早用于檢測血小板聚集功能的是渾濁度法，由Bon于1962年發現并應用。該方法是一種比較廣泛的檢測血小板聚集功能的方法[5]。該方法主要由于其血小板絮凝劑能夠簡便、快速地獲得血小板聚集狀態，可用于評價血小板聚集功能，具有簡便、快速的優點，因而在過去幾十年中較為常見，然而其缺點也較為明顯，離心分離和其他步驟很可能會導致體外血小板活化，對血小板聚集不敏感，而且該方法重復性非常差，顯色樣品和血凝素樣品會影響濁度的結果，相同條件下與其他檢測方法相比需要更多的血液量才能完成檢測[7]。隨著全血法、流式細胞術等臨床新檢測技術的出現，該檢測方法的應用也逐漸減少。2.1.2全血法檢測全血聚集儀檢測、血小板功能分析儀檢測和血小板計數法均為全血法檢測血小板聚集功能的重要手段。全血聚集儀可通過對血液電極間微小的電流或電阻變化而形成聚集曲線，從而實現對患者血小板聚集功能的檢測，明文娟等[7]的研究通過采用全血聚集儀對新鮮血液中血小板進行采集，發現該方法的優點是血液不需要離心，因而檢測更為便利，然而相對光學聚集儀來說可能會花費更長的時間，且對于小聚集物交不敏感，電極安放環境需要更高的要求，故而對于臨床工作需求也相對更難滿足。血小板功能分析儀對于血小板功能障礙性疾病有良好的篩選能力，作為一次性反應杯，內有一層膜，膜上小孔，使得其可以對相關誘導劑進行覆蓋，抗凝血如果能夠經由小孔被吸出，則可通過計算“封閉時間”以反映血小板聚集速率[8-9]。血小板計數法可通過測量血小板數目的改變來對血小板聚集所花時間進行測定，該方法對小樣品尺寸小團聚體的形成敏感快速。王楠等[10]通過血小板計數法對小紅細胞性貧血患者內血液樣本進行檢測，并將其與電阻抗法及手工法檢測結果進行比較，結果顯示血小板計數法對于血小板聚集的檢測更具價值，相較于其余兩種檢測方法來說可以獲取更高的準確度。然而在小聚集體快速形成，不能滿足僅有大血小板聚集體可測的形態，各時間點進行動態計數器分析，通常在加合體劑30秒后開始，6分鐘結束，因而操作步驟相對來說較為復雜，缺少一定時效性[10]。2.1.3其他檢測方法散射性粒子子檢測法主要通過血小板在聚集過程中引起的光散射變化來對其進行檢測，分別通過聚集塊大小生成數量來對血小板凝聚功能進行檢測[11]。流式細胞術可通過探測器對每個細胞的熒光訊號和散射光進行收集，并將其傳入計算機進行分析，從而實現對血小板聚集率的測量，這種方式使得標本處理方式被簡化，且具有較高的重復性和敏感性，但是由于檢測價格較為昂貴，還不能在臨床被大量使用[12]。2.2血小板活化功能檢測血小板的活化功能經常通過流式細胞術檢測，流式細胞術能夠敏感、特異性地檢測血液中的活化血小板并評估其功能。血小板活化狀態以及血小板應答可以在全血中血小板糖蛋白的免疫熒光技術分析通過熒光和光散射特性鑒定血小板后確定。與靜態血小板相比，活化的血小板在膜糖蛋白上發生明顯變化，成為活化血小板的檢測標志物。流式細胞術的優點如下：（1）血小板可特異性檢測，不受其他類型細胞或片段干擾[13]。（2）分析單一或亞組血小板膜上活化標志物的變化，結果真實客觀。該方法的缺點為檢測成本高，操作復雜。為了避免血小板體外活化，樣品需要在45分鐘內處理。僅檢測循環血小板功能并不反映血管壁上血小板的激活和最近清除的血小板。3血小板檢測在各類疾病中的應用3.1血小板檢測在糖尿病中的應用糖尿病是當前有著較多發病人群的代謝性疾病，當糖尿病患者發生血管病變后就有可能使得血小板粘附增加、聚集并增強釋放反應，導致動脈粥樣硬化，引起相關糖尿病并發癥的進一步形成，而糖尿病患者并發癥的發生可能是由于相關因素引起的血小板粘附聚集有關。李海東等[14]的研究對2型糖尿病患者血小板體積與糖尿病性黃斑水腫的關系進行研究，將160例研究對象分為四組，分別為健康對照組、有糖尿病無糖尿病視網膜病變組、有糖尿病視網膜病變但無黃斑水腫組及有視網膜病變伴黃斑水腫組，結果顯示后兩組血小板體積明顯大于前兩組，故而得出結論，血小板體積增高參與了糖尿病視網膜病變及黃斑水腫的進展，由于大體積的血小板所包含的活性物質增多，其代謝能力旺盛，故而聚集功能也會明顯增強，甚至還有研究提出大體積血小板的膜可表達的糖蛋白受體數量增多，使得纖維蛋白原之間的親和力更強，故而更容易引起血小板粘附、聚集能力的增加，并引起血管相關變化，因而通過監測血小板體積可幫助臨床醫師對糖尿病相應并發癥的發生進展進行預測。同時，糖尿病患者血漿可在ADP或腎上腺素后提高正常人群血小板聚集；降糖時，血小板聚集和釋放也明顯不會有異常。高血糖引起血小板聚集及釋放能力增強，血小板處于激活狀態，可能是糖尿病患者發生心腦血管并發癥的機制之一。研究表明，高血糖可明顯增強血小板的粘附功能。影響血栓形成的因素之一是血小板的活化[15]。另外，臨床認為血小板的改變也與胰島素抵抗存在明顯相關性，故而可通過對血小板進行相關檢測來了解患者糖尿病胰島素抵抗狀態。胰島素抵抗期間產生的糖基化產物會改變血小板膜的流動性。血小板膜蛋白糖基化程度與膜流動性下降呈負相關，這表明糖基化程度越高，膜的流動性越小，血小板的活化越容易。3.2血小板檢測在免疫炎癥反應中的應用一般情況下，血小板遇到一氧化氮或前列腺素等抑制劑時，其活性受到阻礙，身體外部循環顯示靜息狀態。許多炎癥疾病就會出現明顯的血小板活性增加或是單核細胞聚集增多，如炎癥性腸病患者中出現明顯的血小板活化。Kullaya等[16]的研究將呼吸道合胞病毒與血小板和單核細胞在體外共培養，認為血小板可以內化病毒顆粒，并使得單核細胞的干擾素α的分泌產生強化刺激，從而減少了病毒對于單核細胞的感染。在感染、炎癥、膿毒癥鄧冰中，血小板也通過多種機制發揮免疫防御作用，然而隨著病毒感染加劇，就會出現明顯血小板減少及出血傾向，因而近年來血小板數量夠、血小板平均體積、血小板活化水平等的改變也明顯對膿毒癥患者預后產生明顯的預測作用。還有研究認為膿毒癥患者在基線未成熟血小板指數水平低時已經可以對持續血小板減少和更高的死亡率進行預示，從而幫助臨床醫師盡早采取相應的措施對患者進行救治，從而改善其最終預后結果。3.3血小板檢測在心血管疾病中的應用心血管疾病的發生基礎為冠狀動脈粥樣硬化，而粥樣硬化的發生機制與動脈內皮、內膜損傷、炎癥-纖維增生性反應密切相關。凝血瀑布反應的發生會導致動脈管腔狹窄加劇，從而導致血小板消耗，最后，血小板分布幅度增加，不僅血小板數量增加，其活性也增加。應激狀態下，皮質醇和兒茶酚胺在血液中的釋放增加，產生骨髓抑制，反向調節淋巴細胞增殖和分化，加重細胞凋亡。在嚴重炎癥的狀態下，低淋巴細胞增多癥也可能發生。研究表明血小板幾乎參與了動脈粥樣硬化的整個過程，血小板被認為是不穩定斑塊形成和急性冠狀綜合征發展的重要因素[17]。動脈粥樣硬化性心血管疾病被朱春梅等[18]人認為與血小板體積有密切相關的作用，其通過對3081名18~80歲居民進行隨訪調查，研究患者動脈粥樣硬化性心血管疾病被十年風險概率與血小板體積的作用，通過建立風險模型認為兩者存在明顯正相關，因而認為血小板體積的增加可明顯提高患者動脈粥樣硬化性心臟病的發生風險。此外，血流中各種細胞間的交聯和粘附也參與了一系列血栓的形成和炎癥的發展。循環血小板是中風發展所有階段的一個非常重要的因素。3.4血小板檢測在腫瘤轉移中的應用腫瘤轉移是惡性腫瘤患者發展至晚期的常見現象，也是加快患者死亡的重要原因，然而血小板在腫瘤轉移過程中發揮重要作用，腫瘤為環境內，血小板可能受到刺激從而產生異常聚集現象，進而幫助腫瘤細胞產生免疫逃逸，使得腫瘤細胞轉移的存活率明顯提升。此外血小板還提供了腫瘤生長所需的活性因子，從而促進了腫瘤的轉移。通過對腫瘤患者血小板功能進行檢測，可以對其腫瘤轉移活性進行了解，有利于臨床醫師對腫瘤轉移情況進行預測，從而盡早采取相應干預措施并制定合適的診療計劃。（這個應用是為了干什么）王禾等[19]的研究通過小規模試驗表明非小細胞肺癌患者早期會呈現血小板聚集功能異常狀態，而通過讓患者服用阿司匹林，可對環氧化酶進行抑制，使得患者體內循環中血小板數量和活性得到明顯減少，進而使得血小板與腫瘤細胞間的相互作用進行阻斷，從而進一步降低腫瘤轉移的發生。血液中循環腫瘤細胞是腫瘤血行轉移的重要機制，其數量多少和預后也有明顯關聯，既往研究從模型小鼠的血小板膜表面表達凋亡誘導配體進行檢測，認為豐富的血小板表達使得循環腫瘤細胞的血行加快，從而促進其在小鼠體內的轉移，因而對于人體腫瘤轉移的治療，也可考慮通過對血小板聚集活性進行抑制的方式來降低腫瘤轉移風險[20]。4重組人血小板生成素的應用及發展當前臨床研究認為，重組人的血小板性素有利于增加中、重量骨髓，抑制患者血小板的數量，有助于恢復血小板。重組的血小板生成素是治療血小板減少癥的有效藥，孫少勤等[21]的臨床研究通過隨機對比實驗，觀察了110例血液惡性腫瘤患者的化學治療后血小板水平及炎癥因子水平，認為重組人血小板生成素對于改善患者炎性水平，改善血小板計數均有良好效果，因而對其在血液腫瘤因化療所致血小板減少癥中有較為良好的作用，且不良反應少，安全性良好。此外重組人血小板生成素還可應用于膿毒癥、心血管疾病等重要疾病，可通過對血小板減少癥狀進行有效抑制，從而使得血小板功能被調節，降低相關惡性事件，使得炎癥及相應連鎖反應能得到控制，進而使得患者預后得到好轉，因而在當前臨床使用中還有較為廣泛的應用空間。重組人血小板生成素的藥理作用目前還比較單一，主要在增加血小板生成方面，另有研究對于心臟以及血管也有一定的保護作用。近年來，隨著血小板越來越多的關注，重組人凝血酶原酶的藥理學效應研究不斷增加[22]。目前，重組人凝血酶原酶的研究正在進行中，但其化學研究需要更深層次的進展。5小結血小板作為人體血液內細胞必不可少的構成部分，對于當前臨床醫師有較高的指導價值，本研究對血小板相關檢測方式進行了闡述，認為當前主要從血小板聚集及活化功能兩方面來實現對血小板的檢測，主要檢測方式包括比濁法和全血法，此外，糖尿病、免疫炎癥反應、心血管疾病、惡性腫瘤轉移等均可通過檢測血小板對其疾病進展程度進行反映，從而幫助臨床更好的治愈疾病。重組人類血小板生成素在當前作為增加血小板生成的重要藥物，對于血液、免疫、神經等各個系統均起到一定保護作用，但還需要臨床進一步研究對其進行觀察探討。

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