icam-1和ifn-在口腔扁平苔蘚病損中的表達及意義

扁平口腔是一種常見的非感染性口腔疾病。研究表明:T細胞介導的細胞免疫反應、局部釋放因子的作用及角質細胞的凋亡異常可能在OLP病程形成和發展中起重要作用。現已發現干擾素γ(interferon-gamma,IFN-γ)在OLP局部病損中表達上調,可能參與了OLP病損的形成。細胞間黏附分子1(intercellularadhesionmolecule-1,ICAM-1)是一種細胞表面黏附分子,它通過和受體結合參與T細胞與T細胞、T細胞與基質細胞及T細胞與靶細胞間相互作用和炎癥反應,調節免疫功能,參與免疫與炎癥反應的許多環節。有研究顯示ICAM-1高表達可能與IFN-γ有關。本研究通過檢測OLP局部病損中ICAM-1和IFN-γ蛋白的表達,探討OLP局部病損中ICAM-1和IFN-γ表達之間的相關性及其在OLP發生發展中的作用和意義。1材料和方法1.1osp標本的一般資料分布標本來自貴陽醫學院附屬醫院口腔內科,選擇2005～2008年臨床和病理資料完整且未經任何治療并不伴有皮損的OLP活檢組織標本,經4%甲醛溶液固定、石蠟包埋、常規HE染色及嚴格的病理診斷。選取拔牙或清創正常口腔黏膜組織10例;OLP組織55例,其中男23例,女32例,年齡18～70歲。OLP標本按臨床類型分為糜爛型15例,非糜爛型40例;按病程分為<6個月31例,≥6個月24例。OLP組與正常組在一般資料的分布上無統計學差異。每例標本作4μm連續切片5張。1張HE染色片由2位病理醫師盲法重新核實病理學診斷和病理改變程度計分,其余作免疫組織化學染色。1.2ifn-單克隆抗體bsm-需要鼠抗人ICAM-1單克隆抗體(SC-8439)購自美國Santacruze公司;鼠抗人IFN-γ單克隆抗體(bsm-0388M,北京博奧森生物技術有限公司);SP免疫組化抗鼠試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)。1.3染色總異性型抗操作步驟嚴格按SP試劑盒說明書進行,高壓抗原修復(0.1mol/L檸檬酸鹽緩沖液pH=6.0)。一抗的工作濃度分別為1∶250(ICAM-1)和1∶300(IFN-γ),每批染色同時設置陽性和陰性對照。ICAM-1和IFN-γ分別以淋巴結和胰腺癌標本作為陽性對照,PBS液代替一抗作為陰性對照。1.4評估結果1.4.1病理改變的結果的確定參考張筱林提出的OLP淋巴細胞浸潤程度和基底細胞變性程度的計分標準進行計分,具體計分標準見表1。1.4.2細胞級細胞系統分級ICAM-1染色以細胞膜出現明確的黃色或黃褐色顆粒為陽性細胞;IFN-γ染色以細胞質出現明確的黃色或黃褐色顆粒為陽性細胞。采用盲法每張切片隨機選擇5個高倍視野(×400),每個視野計數100個細胞,至少500個細胞,計數陽性細胞百分比,取5個視野的平均數參照Shimizu方法進行分級,ICAM-1陽性細胞數分別占上皮細胞和炎細胞數<30%計分為1分;30%～70%計分為2分;>70%計分為3分;IFN-γ參照Tanaka等的方法,IFN-γ陽性細胞數占總淋巴細胞數<10%,計分為1分;11%～30%計分為2分;>30%計分為3分。同時兩者均按染色顏色深淺分為3級,淺黃色計分為1分,黃色計分為2分,棕黃色計分為3分。每張切片最終分數按陽性率和染色強度兩個參數的乘積計算,0～1分為陰性(-),2～5分為陽性(+),6～9分為強陽性(++),陽性和強陽性都歸為陽性。1.5率的分析:相關分析和卡方檢驗采用SPSS11.5統計軟件進行分析,率的比較采用卡方檢驗、秩和檢驗;相關分析采用Spearman相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。2結果2.1潤程度及基底液化程度對osp組織的影響HE染色顯示55例OLP組織均有淋巴細胞浸潤和基底細胞液化的病理改變,按計分標準分別計分,其中淋巴細胞浸潤程度為1分的OLP組織13例,2分的OLP組織24例,3分的OLP組織18例;基底液化程度為1分的OLP組織29例,2分的OLP組織19例,3分的OLP組織7例。Spearman相關分析顯示,OLP病損區淋巴細胞浸潤程度與基底細胞液化變性程度之間存在正相關關系(r=0.465,P<0.01)。2.2osp上皮組織的icam-1表達情況在10例正常口腔黏膜中只有ICAM-1陽性表達率為20%(2/10),顏色為淺黃色,主要分布在上皮棘細胞層(圖1),其余均為陰性表達(圖2)。OLP上皮組織中ICAM-1陽性表達率為67.27%(37/55),顏色為黃色或棕黃色,主要分布在上皮的基底層及棘細胞層下部角質形成細胞(圖3);OLP組織固有層內ICAM-1陽性表達率為85.45%(47/55),顏色為黃色或棕黃色,主要分布在固有層炎細胞(圖4)。ICAM-1在OLP組織中上皮和固有層炎細胞表達陽性率均高于正常口腔黏膜,兩者相比差異均有統計學意義(P<0.05,表2)。2.3皮質細胞表達情況IFN-γ在正常口腔黏膜為陰性表達(圖5),55例OLP病損區發現36例IFN-γ陽性表達,陽性表達率為65.45%,陽性細胞主要為固有層內浸潤的淋巴細胞(圖6);OLP組IFN-γ陽性表達率高于正常口腔黏膜組,差異具有統計學意義(P<0.01,表3);OLP上皮組織中ICAM-1的陽性率在IFN-γ陽性組高于IFN-γ陰性組,Spearman相關分析結果顯示,IFN-γ和上皮角質細胞表達的ICAM-1呈正相關(r=0.369,P<0.05);但與固有層炎細胞表達的ICAM-1不相關(r=0.256,P>0.05)。2.4基本蛋白表達IFN-γ和ICAM-1在OLP組織中的陽性表達率在不同的基底細胞液化程度組間的差異有統計學意義(P<0.05)。Spearman相關分析顯示上皮ICAM-1和IFN-γ在OLP組織中的陽性表達與基底細胞液化程度相關(r=0.338,P=0.012;r=0.318,P=0.018);但IFN-γ、ICAM-1在不同臨床類型、不同病程、不同淋巴細胞浸潤程度之間的差異均無統計學意義(P>0.05)。3icam-1和t細胞間的互聯互通口腔扁平苔蘚是口腔黏膜慢性炎性疾病,密集淋巴細胞帶狀浸潤和基底細胞液化是OLP的典型的病理學特征。本研究中,OLP淋巴細胞浸潤和基底細胞液化計分成正相關,說明OLP組織中固有層浸潤的淋巴細胞越多,基底細胞液化變性也越嚴重,與孫善珍相關研究結果一致,提示基底細胞液化可能與局部浸潤的淋巴細胞有關。我們推測浸潤T淋巴細胞的細胞毒作用對上皮細胞的免疫性攻擊,造成基底層細胞和基底膜損傷,可能是導致基底細胞液化變性的原因之一。ICAM-1屬于細胞表面黏附分子免疫球蛋白超家族,與受體結合可以參與細胞黏附、抗原呈遞和T細胞活化、細胞介導的細胞毒作用等過程。本研究中,與正常口腔黏膜相比,OLP局部病損上皮細胞和固有層內浸潤的炎細胞上ICAM-1表達升高,且OLP上皮ICAM-1陽性表達率與基底細胞液化程度成正相關。已有研究顯示在OLP中浸潤的T淋巴細胞上ICAM-1的受體表達增加,據此,我們推測OLP病損中基底角質形成細胞的ICAM-1通過和T細胞上的LFA-1結合使角質細胞成為靶細胞而引起角質細胞的凋亡,從而導致基底細胞液化變性的病理改變。本研究還發現ICAM-1陽性表達率在OLP不同臨床類型、不同病程之間差異無統計學意義,提示ICAM-1在非糜爛型和糜爛型OLP病損中均起一定作用,與臨床類型無關;并且共同參與了OLP的早期與晚期病損形成過程。而OLP組織ICAM-1的表達與淋巴細胞浸潤程度不相關,提示ICAM-l分子在角質細胞上的表達不依賴于上皮下浸潤淋巴細胞的數量,與國內王增文在皮膚扁平苔蘚中的研究結果一致。此外,本研究還發現ICAM-1在OLP固有層中炎細胞的陽性表達率為85.45%(47/55)。炎細胞不僅表達LFA-1分子,與表達ICAM-1分子的其它細胞黏附接觸,它們自身也可表達ICAM-1,并且認為ICAM-1陽性T細胞處于激活狀態。OLP病損中浸潤的多數炎細胞上ICAM-1陽性反應,并且浸潤的炎細胞主要以T淋巴細胞為主,說明淋巴細胞不僅通過受體(LFA-1)與角質細胞結合,同時其本身也表達ICAM-1,從而借助ICAM-1/LFA-1途徑使淋巴細胞間黏附性增加,淋巴細胞間信號傳遞功能進一步增強,表明這些細胞處于活化狀態,進一步為OLP細胞免疫功能異常提供新的證據。IFN-γ是典型的Th1型細胞因子,可誘導其它細胞因子、MHC類抗原及白細胞粘連分子的表達,從而促進細胞毒性T細胞的細胞毒作用。已有研究表明IFN-γ可誘導體外培養的角質細胞表面ICAM-1分子的表達,與LFA-1結合,在細胞毒反應中起重要作用。本研究中,與正常口腔黏膜相比,OLP局部病損中IFN-γ蛋白表達上調,與相關研究結果一致,提示IFN-γ可能在OLP局部病損形成中起重要作用。OLP上皮組織中ICAM-1表達陽性率在IFN-γ陽性組高于IFN-γ陰性組,IFN-γ和上皮ICAM-1的陽性表達間存