第二章

藥物分析基本知識1、藥品檢驗程序2、藥物分析數據處理3、分析方法評價

2023/10/51取樣——均勻、合理（科學性，真實性，代表性）抽樣件數和取樣量：3倍全檢量，抽樣量在每個抽樣單元中的分配應大致相等取樣工具與取樣方式：洗凈干燥、滅菌取樣記錄：在取樣包裝上貼上“藥品封簽”將所抽樣品簽封，填寫“藥品抽樣記錄及憑證”，并由抽樣人員和被抽樣單位有關人員簽字，加蓋抽樣單位和被抽樣單位公章一、藥品檢驗工作的基本程序取樣-分析測定-報告性狀、鑒別、檢查、含量測定2023/10/52性狀與鑒別性狀——指外觀、色澤、溶解度、物理常數等，其綜合反映了藥品內在質量鑒別——用來判斷藥物的真偽。依據藥物的化學結構和理化性質，選擇專屬性強、重復性好的鑒別方法通常一項鑒別試驗，只能表示藥物的某一特征，不能將其作為判斷的唯一依據；同時采用的方法也不一定是被檢藥物所唯有的專屬試驗。因此，通常采用一組（二個或幾個）試驗項目來綜合鑒定一個藥物，以提高鑒別的專屬性，力求結論正確無誤2023/10/53檢查與含量（效價）測定檢查——是判斷藥物的純度，即藥物中存在的雜質種類和量是否符合規定，通常采用限度試驗含量（效價）測定——測定有效成分的量，是評價藥物質量的主要指標之一。含量測定不僅是藥物有效性的保證，同時也反映了藥物的純度判斷一個藥物的質量是否符合要求，必須根據鑒別、檢查與含量測定三者的檢驗結果，同時結合藥物的性狀，全面考慮作出評估2023/10/54原始記錄要求：真實、完整、詳細、不得涂改。內容包括：樣品信息：品名、規格、批號、數量、來源、檢驗依據日期：取樣日期、檢驗日期檢測內容與結果：包括檢驗項目、操作方法、原始數據、觀察到的現象、結果計算等簽章：檢驗人、復核人、負責人簽名或蓋章原始記錄是藥品檢驗的第一手資料，是出具檢驗報告書的原始依據，必須用藍黑墨水或碳素筆書寫，字跡應清晰，不得任意涂改，若寫錯時，在錯誤的地方劃上單線或雙線，在旁邊改正重寫，并簽名或蓋章。原始記錄應按頁編號，不得缺頁，按規定歸檔保存2023/10/55檢驗報告檢驗報告書是對藥品質量檢驗結果的證明書，是對藥品質量作出的技術鑒定，是具有法律效力的技術文件，應長期保存其內容包括：品名、規格、批號、數量、來源、檢驗依據、取樣日期、報告日期、檢驗項目和測定結果、檢驗結論、簽名（檢驗人、復核人、負責人）和蓋章（檢測單位）要求：依據準確，數據無誤，結論明確，文字簡潔，書寫清晰，格式規范每一張藥品檢驗報告書只針對一個批號2023/10/56二、藥物分析數據處理

分析誤差與偏差誤差指測量值與真值之差，是衡量一個分析方法的準確度的指標。誤差越小，方法的準確度越高偏差反映一組測量值之間彼此符合的程度，是衡量分析方法的精密度的指標。偏差越大，精密度越低2023/10/57誤差的分類與特點根據誤差來源與性質不同，分為：系統誤差偶然誤差也稱可定誤差，有固定的方向和大小，重復測定時重復出現。根據來源分為：方法誤差，試劑誤差，儀器誤差，操作誤差也稱不可定誤差、隨機誤差，由偶然原因引起（如室溫、儀器等），其大小、正負不固定，大誤差出現概率小，小誤差出現概率大，正、負誤差概率大致相等，增加平行試驗，可減小誤差2023/10/58誤差的表示與計算方法

根據計算與表示方法不同，分為：絕對誤差相對誤差δ=測量值－真值=χ－μ

===×100%絕對誤差真值

2023/10/59偏差的表示與計算方法

表示方法：偏差平均偏差相對平均偏差標準差相對標準差偏差反映方法的精密度，也說明偶然誤差大小2023/10/510提高分析準確度的措施

選擇合適的分析方法：各種分析方法具有不同的準確度和靈敏度，適合于不同樣品的分析。如：容量分析法準確度高，相對誤差小（約0.2%~0.3%），主要用于常量或半微量分析儀器分析法的靈敏度和專屬性較高，可達

g/ml甚至ng/ml級，但其準確度較容量分析低，相對誤差大（約2%~3%），適用于多組份樣品分析校準儀器：如對分析天平、容量儀器、分光光度計的波長、吸光度準確性、色譜儀器的系統適用性試驗

2023/10/511提高分析準確度的措施對照試驗：用含量已知的標準品或純品進行試驗（如對照品比較法）回收試驗：在無標準試樣時可采用加樣回收試驗空白試驗：不加供試品或以等量溶劑替代供試液，同法操作所得結果。從樣品測定值中扣除空白值，以消除由試劑不純或滴定終點與化學計量點不完全吻合等產生的試劑或方法誤差，Ch.P.收載的滴定分析法中多數規定需進行空白試驗減少測量過程的誤差：根據誤差疊加原理，盡量減少各步操作的誤差增加平行試驗：減小（但不能消除）偶然誤差2023/10/512誤差與偏差的關系

兩者為準確度與精密度的關系測量值的準確度表示測量的正確性，而測量值的精密度則表示測量的重復性。一組測量值的精密度高低，反映了偶然誤差的大小。精密度低，其準確度也往往較低，即使其平均值與真值非常接近，也常常是出于偶然精密度是保證準確度的先決條件。但精密度高，其平均值的準確度不一定就高，因為測量值中可能存在系統誤差，只有在消除系統誤差后，才能用精密度同時表達準確度2023/10/513有效數字任何測量方法的準確度都是有一定限度的，測量數據的記錄與測量結果的表示均應與測量方法的準確度相符在分析工作中實際能測量到的數據稱為有效數字，對于有效數字，只允許數的最末一位欠準，且欠準數字的最大誤差為±1如稱量數據0.2066g中，最后一位數字6是欠準的，其他數字是準確的，即準確重量為0.2066±0.0001g；又如滴定管讀數22.10ml中，末位0是欠準的，準確讀數為22.10±0.01ml2023/10/514有效數字位數與表示方法

有效數字由數位準確數字和最后1位欠準數字構成，如上述0.2066g和22.10ml均為4位有效數字在一組數字中，除0外的其他數字均為有效數字，而數字0有幾種情況：在藥物分析中，容量分析結果的準確度為千分之一。所以，在數據的紀錄和結果的報告中一般要求4位有效數字2023/10/515有效數字位數確定中的注意點

小數部分末位0是不能省略首位是8或9，有效數字位數可多計1位數字過小或過大時，用10的乘方表示pH、lgK等對數值，有效數字的位數取決于其小數部分數字的位數樣本

x±s的有效數字一般以s的1/3定位數2500可寫成：2.500×103（4位）pH=4.36，為2位(98.67±0.31)%，s的1/3=0.1應寫(98.7±0.3)%0.050800.828為4位有效數字2023/10/516有效數字的修約規則四舍六入五留雙（或尾留雙）

不允許連續修約中間數字可多保留一位有效數字表示不確定度的數字修約結果應使不確定度增加5后有數，則進位；5后無數，進位后數值末位為偶數則進位（0為偶數）SD=0.4312，若保留2位有效數字，宜修約為0.44；若保留1位，則修約為0.52023/10/517有效數字的運算法則根據誤差傳遞規律，按照有效數字運算法則，合理取舍加減法時是各數值的絕對誤差傳遞——按照小數點后位數最少的那個數保留其他各數的位數，然后再相加減乘除法時是各數值的相對誤差傳遞——按照有效數字位數最少的那個數值保留其他各數的位數，然后再相乘除

0.5336+0.120.6510.53360.1242=84.82023/10/518三、藥品分析方法的驗證方法驗證的目的意義是判斷采用的分析方法是否科學、合理，是否能有效控制藥品的內在質量的依據不同的分析方法和分析對象具有不同的驗證指標和要求Ch.P.收載的《藥品質量標準分析方法驗證指導原則》中規定：在建立藥品質量標準、藥品生產工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法修訂等情況時需對質量標準分析方法進行驗證2023/10/519方法驗證的一般原則與檢測項目原則上每個檢測項目采用的分析方法，均需要進行方法驗證驗證的內容應根據檢測項目的要求，結合所采用分析方法的特點確定同一方法用于不同的檢測項目會有不同的驗證要求檢測項目分為四類：鑒別雜質檢查（限度試驗、定量試驗）定量測定（含量測定、溶出度、釋放度等）其他特定檢測項目（包括粒徑分布、旋光度、分子量分布等）2023/10/520驗證內容準確度（accuracy）精密度（precision）檢測限（limitofdetection，LOD）定量限（limitofquantitation，LOQ）專屬性（specificity）線性（linearity）范圍（range）耐用性（robustness）2023/10/521一、準確度準確度是指測定結果與真實值或參考值接近的程度，一般以回收率%表示原料藥可用已知純度的對照品或供試品進行測定制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進行測定。如不能得到制劑的全部組分，可采用加樣回收試驗，向制劑中加入已知量的被測物進行測定回收率%=測得量/加入量×100%加樣回收率%=×100%測得總量－本底量加入量2023/10/522數據要求回收率試驗要求測定高、中、低三種濃度各三份（從取樣開始操作）,用9個數據進行評價也可將本法所得結果與已建立的另一方法（已知準確度）結果進行比較

例某注射液的含量測定回收率試驗：按處方及制法，精密稱取藥物對照品適量（相當于標示量的80%，100%，120%），加溶媒制成模擬制劑，按含量測定項下方法測定，計算回收率規格加入量（mg/ml）回收率（%）（x

SD）1mg/ml0.80499.2

0.170.984100.0

0.261.20099.9

0.402023/10/523加樣回收試驗加樣回收試驗中，樣品取樣量一般為樣品測定時取樣量的50%左右，然后加入高、中、低濃度的對照品，使加樣后的被測物總濃度仍在規定的范圍內（一般為含量測定濃度的80%～120%）

2023/10/524例：某藥中A成分的含量測定取樣品0.2g，精密稱定，按設定方法制備溶液、分析測定、計算含量，得樣品中A成分含量為12.00%（n=6），以此值作為加樣回收試驗中的本底量。然后取該藥9份，每份約0.1g，精密稱定，分別精密加入A對照品（溶液）適量，配制成低、中、高三個濃度的回收率試驗溶液各3份，依法測定2023/10/525加樣回收率試驗示例

樣品稱量(g)本底量(g)A加入量(g)測得A總量(g)A回收量(g)回收率(%)均值(%)RSD(%)0.10060.012070.009600.021560.0094998.998.80.50.10020.012020.009040.020990.0089799.20.09990.011990.009250.021090.0091098.40.09930.011920.012020.023990.01207100.499.51.20.10330.012400.011880.024070.0116798.20.10050.012060.012210.024250.0121999.80.09530.011440.014450.026090.01465101.499.71.60.10720.012860.014800.027400.0145498.20.09190.011030.013920.024890.0138699.62023/10/526雜質定量測定方法的準確度可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。雜質的定量方法多采用色譜法測定，當不能測得雜質或降解物的響應因子或相對于原料藥的相對響應因子情況下，可用原料藥主成分的響應因子替代，并應明確表明單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（%）或面積比（%）2023/10/527二、精密度指在規定實驗條件下，同一均勻樣品經多次取樣測定所得結果間的接近程度用偏差、標準偏差(SD),相對標準偏差(RSD)表示中國藥典規定測定重復性、中間精密度和重現性重復性指在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度在規定范圍內,用9次測定結果進行評價，取理論測定濃度的80%，100%，120%的量各測定3次或取測定濃度（100%）供試液至少6份測定結果進行評價2023/10/5282.中間精密度在同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備測定結果的精密度重現性在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度。當分析方法將成為法定標準時，應進行重現性試驗，通過協同檢驗得出結果2023/10/529區別方法的重復性不同于色譜系統適用性試驗中的重復性方法的重復性試驗中6次測定結果是指從取樣開始，同法制備6份樣品，平行測定的結果而色譜（HPLC或GC）系統適用性試驗中的重復性是指同一溶液重復進樣5～6針測得的結果2023/10/530三、專屬性系指在其他成分（如雜質、降解產物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正