（3） 對(duì)于已確定為惡性腫瘤的患者，則需要了解其手術(shù)范圉是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。（4） 在做剖腹探查時(shí)所發(fā)現(xiàn)的腫塊或者異樣的組織。（5） 顯示組織中的脂肪和脂類物質(zhì)，這常見于某些病例如脂肪瘤及肉瘤,某些科研組織等。（6） 某些酶的顯示如ATP酶，琥珀酸脫氫酶等。（7） 神經(jīng)病理學(xué)技術(shù)中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。（8）對(duì)某些物質(zhì)所進(jìn)行的免疫熒光的研究。編輯本段冰凍切片的制作方法低溫恒冷箱冷凍切片制作法以ShandonAs620E型恒溫箱冷凍切片機(jī)為例，該機(jī)的箱面上有電子控制板，裝有即時(shí)冷凍鍵和除霜鍵，啟動(dòng)即時(shí)冷凍鍵，機(jī)器馬上進(jìn)行工作狀態(tài),并可持續(xù)lOminso啟動(dòng)即時(shí)除霜鍵，可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉，并可持續(xù)15minso有照明鍵一個(gè)，啟動(dòng)該鍵可照明工作間，有利工作及觀察組織的冰凍狀況。配有消毒鍵一個(gè)，當(dāng)進(jìn)行一周的工作或者一天的工作后，啟動(dòng)該鍵，可對(duì)工作間進(jìn)行消毒。當(dāng)每天工作完畢時(shí)，可啟動(dòng)密鎖鍵，鎖住工作間。除此之外，箱面的左邊有四個(gè)按鍵，兩個(gè)為快速自動(dòng)進(jìn)退鍵，兩個(gè)為微小進(jìn)退鍵，還有一個(gè)手動(dòng)旋鈕，調(diào)節(jié)修組織塊時(shí)的進(jìn)退。冷凍箱內(nèi)左邊的冷凍臺(tái)，溫度可達(dá)-60°C左右，冷凍箱的中間為一臺(tái)切片機(jī)，工作間的溫度在0-30°C間可任意調(diào)節(jié)，并在箱面上的熒屏顯示出來。操作方法及步驟取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費(fèi)時(shí)，大者難以切完整，最好為24X24X2mmo取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺(tái)上,冰凍。小組織的應(yīng)先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個(gè)小臺(tái)后，再放上細(xì)小組織，滴上包埋劑。將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機(jī)持承器上，啟動(dòng)粗進(jìn)退鍵，轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕，將組織修平。'④調(diào)/曲切的片度，根據(jù)不同的組織而定，原則上是細(xì)胞密集的薄切，纖維多細(xì)胞稀的可稍為厚切，一般在5?10um間。⑤調(diào)好防卷板。制作冰凍切片，關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上，這就要求操作者要細(xì)心，準(zhǔn)確地將其調(diào)較好，調(diào)校至適當(dāng)?shù)奈恢谩Ｇ衅瑫r(shí)，切出的切片能在第一時(shí)間順利地通過刀防卷板間的通道，平整地躺在持刀器的鐵板上。這時(shí)便可掀起防卷板，取一載玻片，將其附貼上即可。⑥應(yīng)視不同的組織選擇不同的冷凍度。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根據(jù)不同的組織而定，不能一概而論。如：切未經(jīng)固定的腦組織，肝組織和淋巴結(jié)時(shí)，冷凍箱中的溫度不能調(diào)太低，在-10--15°c左右，切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時(shí)，可調(diào)在-15?20°C左右，切帶脂肪的組織時(shí)，應(yīng)調(diào)至-25°C左右，切含大量的脂肪時(shí)，應(yīng)調(diào)至-309。冰凍切片時(shí)的注意事項(xiàng)防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應(yīng)保持干凈，需經(jīng)常用毛筆挑除切片殘余和用柔軟的紙張擦。有時(shí)需要每切完一張切片后就用紙擦一次。因?yàn)檫@個(gè)地方是切片通過和附貼的地方，如果有殘余的包埋劑粘于刀或板上，將會(huì)破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。多例多塊組織同時(shí)需做冰凍切片時(shí)，可各自放于不同的支承器上，于冷凍臺(tái)上凍起來，然后依據(jù)不同的編號(hào)，依序切片，這樣做既不費(fèi)時(shí)也不會(huì)亂。放置組織冰凍前，應(yīng)視組織的形狀及走勢來放置，所謂“砍柴看柴勢”,切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。組織塊不須經(jīng)各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達(dá)到固定前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預(yù)先固定，一是為了爭取時(shí)間,二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片，就會(huì)岀現(xiàn)冰晶。這是因?yàn)楹墓潭ㄒ涸诮M織未經(jīng)固定前，其中的水份也可滲入到組織中去，當(dāng)冰凍發(fā)生時(shí)，這些水份就存留于組織中，形成了冰晶。當(dāng)切片時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)冰凍過度時(shí)，可將冰凍的組織連同支承器取出來,在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調(diào)高冰凍點(diǎn)。用于附貼切片的載玻片，不能存放于冷凍處，于室溫存放即可。因?yàn)楫?dāng)附貼切片時(shí)，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當(dāng)溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時(shí)，山于兩種物質(zhì)間溫度的差別，當(dāng)它們碰撞在一起時(shí)，分子彼此間發(fā)生轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，山于溫度相同，沒有發(fā)生上述的現(xiàn)象。冰凍切片的快速染色法冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即可染色。以往，為了防止切片脫落，當(dāng)切片附貼于載玻片后，即用電吹風(fēng)吹干后再固定。根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)比認(rèn)為這種做法欠妥未經(jīng)固定的切片，強(qiáng)熱作用后,蛋口發(fā)生變性，核內(nèi)含有的物質(zhì)山于熱的作用融合在一起，染色后鏡下分辨不出核內(nèi)的各種物質(zhì)。冰凍切片附貼于載玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，這樣可以使切片中細(xì)胞內(nèi)各種物質(zhì)都在沒有任何變化的情況下被固定起來，核染色質(zhì)清晰，核仁明顯，其他物質(zhì)都完好保存。方法：切片固定30秒一1分鐘。水洗。染蘇木素3—5分鐘。分化。于堿水中返藍(lán)20秒。伊紅染色10-20秒。脫水，透明，中性樹膠封固。冰凍組織1—2分鐘，切片1分鐘，固定1分鐘，染色共五分鐘。總共在10分鐘內(nèi)完成快速制片過程，結(jié)果與石蠟切片不相上下。冰凍切片的方法還有很多種，如屮醇循環(huán)的半導(dǎo)體冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，半導(dǎo)體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在H前來說已很少使用，因此在這里不作闡述。編輯本段優(yōu)缺點(diǎn)（一）優(yōu)點(diǎn)：簡便，可以不需要對(duì)組織固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)即可進(jìn)行切片，減少了一些中間環(huán)節(jié)。快速，用時(shí)短。組織變化不大。能很好保存脂肪，類脂等成分。能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類，特別是對(duì)于那些對(duì)有機(jī)溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存較好。（二）缺點(diǎn)：不容易做連續(xù)切片。切取的組織不能過大，組織過大不容易凍結(jié)或者組織凍結(jié)不均，影響切片及染色效果。不容易制作較薄的切片。組織塊在凍結(jié)過程中容易產(chǎn)生水的結(jié)晶而影響細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及抗原物質(zhì)的定位，并且組織結(jié)構(gòu)也不如石蠟切片清晰。曲空段冰凍切片操作中的注意事項(xiàng)（1）新鮮的組織制備組織盡可能新鮮、驟冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的驟冷劑有：①C02氣（-78°C）②丙酮干冰冷卻的輕石油瞇、乙烷和庚烷（-80°C）③液氮（一190°C）④液氮冷卻的丙烷（一19°C）o液氮適用于組織化學(xué)，較安全。缺點(diǎn)：組織塊易發(fā)生龜裂。（2） 固定組織的制備為防止水解酶和其他物質(zhì)的移位、彌散，常用4°C、24小時(shí)的屮醛固定能很好地保存酶類。但對(duì)許多脫氫酶和轉(zhuǎn)移酶能滅活。故不宜使用，低溫，冷屮醛短時(shí)間固定（10分鐘左右）固定，可顯示琥珀酸脫氫酶。電鏡出現(xiàn)后，需要保存細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，以4%緩沖戊二醛（25%戊二醛16ml；0.1M二屮腫酸（pH7?）84ml；蔗糖8g）固定較好。這些固定液主要用于水解酶，而不適于許多氧化還原酶和轉(zhuǎn)移酶。（3） 恒冷箱溫度一般在冷凍后10分鐘，到接近冷室溫度時(shí)再切，一般組織在一15?一20°C切片最易成功。每種組織有其合適的切片溫度、刀的溫度和冷室溫度，Pearse及Bancroft的經(jīng)驗(yàn)如下：組織刀溫度組織溫度恒冷箱溫度肝-18-10-5腎-15-8-5皮膚-35-10-5腦T8-5-5固定組織一般高3-5度（4） 切片機(jī)的使用抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離，使切片平滑通過。抗卷板略高于刀面的最高點(diǎn)。可憑經(jīng)驗(yàn)調(diào)整刀對(duì)組織的角度，一般新刀為20°o操作程序：先接通電源，調(diào)定恒冷箱溫度，調(diào)整切片刀的角度，調(diào)定切片厚度，標(biāo)本