水質 糞大腸菌的測定 多管發法ii目 次前 言 ii用圍 1范引文件 1語定義 1法理 1擾消除 2劑材料 2器設備 33析驟 4果算表示 5精度準度 6量證質控制 6物理 7附錄A（資性錄大可數（MPN）8附錄B（資性錄大腸群驗錄報推薦式 1211水質 糞大腸菌群的測定 多管發酵法本標準規定了測定水中糞大腸菌群的多管發酵法。本標準適用于地表水、地下水、生活污水和工業廢水中糞大腸菌群的測定。本方法的檢出限：12管法為3MPN/L；15管法為20MPN/L。GB/T14581 水質 和水采技指導HJ494 水質 樣指導HJ/T91 下列術語和定義適用于本標準。3.1糞大菌群 fecalcoliforms（eooeantcoo。44.524的需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。3.2最大可能數mostprobablenumber（MPN）（。將樣品加入含乳糖蛋白胨培養基的試管中，37℃初發酵富集培養，大腸菌群在培養基中生長繁殖分解乳糖產酸產氣，產生的酸使溴甲酚紫指示劑由紫色變為黃色，產生的氣體進入倒管中，指示產氣。44.5℃復發酵培養，培養基中的膽鹽三號可抑制革蘭氏陽性菌的生長，最后產氣的細菌確定為是糞大腸菌群。通過查MPN表，得出糞大腸菌群濃度值。22活性氯具有氧化性，能破壞微生物細胞內的酶活性，導致細胞死亡，可在樣品采集（8.1）時加入硫代硫酸鈉溶液（6.7）消除干擾。（6.8）蛋白胨10g牛肉浸膏3g乳糖5g氯化鈉5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml1000mlpH7.2～7.4，1.6%120min1000ml水中，配成三倍乳糖蛋白胨培養基，配制方法同上。EC胰胨20g乳糖5g膽鹽三號1.5g磷酸氫二鉀4g磷酸二氫鉀1.5g氯化鈉5g1000ml20minpH6.9注：配制好的培養基（6.1～6.3）5℃±33～6或體積變化明顯時廢棄不用。12120min，備用。（Na2S2O3·5H2O）（C10H14N2O8Na2·2H2O）。ρ（Na2S2O3）=0.10g/ml稱取5.7g.10033ρ（C10H14N2O8Na2·2H2O）=0.15g/ml稱取5g（61000。500ml12137℃±0.544℃±0.5℃。pH0.1pH3。試管：300、50、20。注：玻璃器皿及采樣器具試驗前要按無菌操作要求包扎，121℃高壓蒸汽滅菌20min備用。樣品點位布設及采樣頻次按照GB/T14581、HJ/T494和HJ/T91的相關規定執行。采集微生物樣品時，采樣瓶（7.1）不得用樣品洗滌，采集樣品于滅菌的采樣瓶中。清潔水體的采樣量不低于400ml，其余水體采樣量不低于100ml。10～15cm80%3～5min，370%～75%1min采集地表水、廢水樣品及一定深度的樣品時，也可使用滅菌過的專用采樣裝置采樣。在同一采樣點進行分層采樣時，應自上而下進行，以免不同層次的攪擾。7125ml0.1ml（6.8125ml0.3ml注：15.7mg硫代硫酸鈉（6.5）可去除樣品中1.5mg活性氯，硫代硫酸鈉用量可根據樣品實際活性氯量調整。2h106h42h441555ml（6.2）（10510ml6.1（15菌的0l6.）（0.1。10410、1ml0.1。151。當樣品接種量小于1ml時，應將樣品制成稀釋樣品后使用。按無菌操作要求方式吸取ml90ml1:101:1010ml90ml1:100注：吸取不同濃度的稀釋液時，每次必須更換移液管。生活飲用水等清潔水體也可使用12管法。表1 15法品種參考表樣品類型接種量（ml）1010.110-210-310-410-5地表水水源水▲▲▲湖泊（水庫）▲▲▲河流▲▲▲廢水生活污水▲▲▲工業廢水處理前▲▲▲處理后▲▲▲地下水▲▲▲12將樣品充分混勻后，在2支裝有已滅菌的50ml三倍乳糖蛋白胨培養基（6.2）的大試管中（00，在05l三倍乳糖6.）10。55將接種（9.1）后的試管，在37℃±0.5℃下培養24h±2h。輕微振蕩在初發酵試驗（9.2）中顯示為陽性或疑似陽性（只產酸未產氣）（7.5）EC（6.3）的試44.5℃±0.524h±2h30（7.3）每次試驗都要用無菌水（6.4）按照步驟9.1～9.3進行實驗室空白測定。（Escherichia（Enterobacteraerogenes）300～3000MPN/L（9.2）（9.3）接種12份樣品時，查附錄A中表A.1可得每升糞大腸菌群MPN值。15A中表A.2得到MPNPN：CMPN值100f

（1）式中：C——樣品中糞大腸菌群數，MPN/L；MPN值——每100ml樣品中糞大腸菌群數，MPN/100ml；100——為10×10ml，其中，10將MPN值的單位MPN/100ml轉換為MPN/L，10ml為MPN表中最大接種量；f——實際樣品最大接種量，ml。測定結果保留至整數位，最多保留兩位有效數字，當測定結果≥100MPN/L時，以科學66123MPN/L”表示；1520MPN/L精密度6（54MPN/L）（2.7×104MPN/L）2.8×107MPN/L）大腸菌群的實際樣品和有證標準樣品（3670MPN/L，可接受范圍為330～7710PN進行了6233.82.～1.1%～5.4%3.4%1.6%5.4%；95%2。表2 實室間95置間低濃度（MPN/L）中濃度（MPN/L）高濃度（MPN/L）有證標準樣品（MPN/L）均值95%置信區間均值95%置信區間均值95%置信區間均值95%置信區間5447～622.7×1049.6×103～7.9×1042.8×1072.2×107～3.6×10737252413～5751準確度63670MPN/L（330～7710的標準樣品進行了6次重復測定：相對誤差范圍為-6.2%～8.4%；相對誤差最終值為-1.7%±10.6%。注：微生物檢測數據為偏態分布，其測定結果全部經以10為底對數轉換后進行計算。Escherichiacoli）Enterobacteraerogenes）300～3000MPN/L300～3000MPN/L（9.3）779.4.1定期按照9.4.2進行陽性及陰性對照試驗，陽性菌株應呈現陽性反應，陰性菌株應呈現陰性反應，否則，該次樣品測定結果無效，應查明原因后重新測定。12130（）88附錄A（）（MPN）表A.1 12管最可數（MPN）10ml樣品量的陽性管數100ml樣品量的陽性瓶數0121L樣品中糞大腸菌群數1L樣品中糞大腸菌群數1L樣品中糞大腸菌群數0＜3411138182713273111838414245251830706223692727431208315116193660230104069＞230注：接種2份100ml樣品，10份10ml樣品，總量300ml。表A.2 15管最可數（MPN）各接種量陽性份數MPN/10095%置信限各接種量陽性份數MPN/100ml95%置信限10ml1ml0.1ml下限上限10ml1ml0.1ml下限上限000＜230081190012＜0.57301112250024＜0.57302133310035303160047304200059305230102＜0.57310112250114＜0.511311144340126＜0.5153121754601373132066099續表各接種量陽性份數MPN/10095%置信限各接種量陽性份數MPN/100ml95%置信限10ml1ml0.1ml下限上限10ml1ml0.1ml下限上限01493142301511315270204＜0.511320144340216＜0.51532117546022732220660023932324024113242702513325310306＜0.515330175460317331217630329332240331133328034133343203515335360408340217630419341248720421134228043133433204415344360451734540050935025875051113512905213352320531535337054173544105519355451002＜0.57400133311014＜0.511401175461026＜0.51540221763103811940325875104104043010512405361104＜0.511410175461116＜0.515411217631128119412269781010續表各接種量陽性份數MPN/10095%置信限各接種量陽性份數MPN/100ml95%置信限10ml1ml0.1ml下限上限10ml1ml0.1ml下限上限1131041331114124143611514415421206＜0.515420227671218119421269781221022342232119112312423381241542444125174255013081194302798013110223431331193132124323913110133154334513417434521351943559140112254403412931411344140141101421544247143174435414419444621452244569150134504116120151154514815217452561531945364154224547215524455812005＜0.5135002377020171175013111892029221502431511020312328503581914020414504762418020516505952107117510331193211922151146161201111續表各接種量陽性份數MPN/100ml95%置信限各接種量陽性份數MPN/10095%置信限10ml1ml0.1ml下限上限10ml1ml0.1ml下限上限2121232851263211502131451384262002141751411021519515130220922152049171302211232852170231702221443452294282202231752312033280224195241503837022522525180445202301232853079251902311443453111031250232175321403734023320533180445002342253421053670235255352507779024015437540130353002411754117043490242205422205770024323543280908502442554435012010002452854543015012002501755024068750251205513501201000252235525401801400253265539203003200254295541600640580025532555≥2400800注1：接種5份10ml樣品、5份1ml樣品、5份0.1ml樣品。MPN5(小于它的稀釋度也全部為陽性試管)MPN值。1212附錄B（資料性附錄）糞大腸菌群檢驗記錄及報告推薦格式表B.1 大菌測檢驗錄項目名稱： 檢驗日期： 年 月 日檢驗方法方法依據滅菌鍋型號出廠編號培養