免疫濁度測定微生物與免疫教研室免疫濁度測定微生物與免疫教研室1沉淀反應(yīng)（precipitation）可溶性抗原與相應(yīng)抗體在適當(dāng)條件下發(fā)生特異性結(jié)合所出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。沉淀反應(yīng)（precipitation）可溶性抗原2分類液體內(nèi)沉淀試驗絮狀沉淀試驗環(huán)狀沉淀試驗免疫濁度測定凝膠內(nèi)沉淀試驗免疫擴(kuò)散免疫電泳單向免疫擴(kuò)散試驗雙向免疫擴(kuò)散試驗火箭免疫電泳對流免疫電泳沉淀反應(yīng)分類液體內(nèi)沉淀試驗絮狀沉淀試驗環(huán)狀沉淀試驗免疫濁度測定凝膠內(nèi)3免疫濁度測定概念：將現(xiàn)代光學(xué)測量儀器與自動化分析檢測系統(tǒng)相結(jié)合應(yīng)用于沉淀反應(yīng)，可以對各種液體介質(zhì)中的微量抗原、抗體和藥物及其他小分子半抗原物質(zhì)進(jìn)行定量測定。免疫濁度測定概念：將現(xiàn)代光學(xué)測量儀器與自動化分析檢測系統(tǒng)4（一）免疫濁度分析的基本原理：抗原、抗體在特定的電解質(zhì)溶液中反應(yīng)，形成小分子免疫復(fù)合物(<19S)，在增濁劑(如聚乙二醇(

PEG)、NaF等)的作用下，迅速形成免疫復(fù)合物微粒(>19S)，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。在抗體稍微過量且固定的情況下，形成的免疫復(fù)合物量隨抗原量增加而增加，反應(yīng)液的濁度亦隨之增大，即待測抗原量與反應(yīng)溶液的濁度呈正相關(guān)。用一系列已知濃度的抗原標(biāo)準(zhǔn)品同時進(jìn)行試驗，制備劑量反應(yīng)曲線，即可計算出標(biāo)本中抗原的含量（一）免疫濁度分析的基本原理：抗原、抗體在特定的電解質(zhì)溶液中5（二）類型透射免疫比濁法

通過檢測光被吸收、衍射、反射和折射后光線減弱的變化來衡量抗原抗體的復(fù)合物。2、散射免疫比濁法

通過檢測光折射和衍射而形成的散射光強度來定量抗原抗體的復(fù)合物。3、免疫膠乳比濁法

以膠乳作為載體對小分子免疫復(fù)合物進(jìn)行微量測定，進(jìn)一步提高了免疫濁度測定的靈敏度。

（二）類型透射免疫比濁法6免疫沉淀類試驗——免疫比濁課件71透射免疫比濁法原理：可溶性抗原抗體在一定緩沖液中發(fā)生反應(yīng)后形成的免疫復(fù)合物，使介質(zhì)濁度發(fā)生改變，光線通過抗原抗體反應(yīng)的溶液時，被其中的免疫復(fù)合物微粒吸收，在保持抗體過量的情況下，免疫復(fù)合物量越多，透射光越少，光線被吸收越多，用吸光度來表示。即吸光度與免疫復(fù)合物量呈正相關(guān)?？捎每乖瓨?biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，測出待檢抗原含量。1透射免疫比濁法原理：8由于免疫復(fù)合物顆粒大小再35-100nm，對近紫外的光線可見最大吸收峰，故選擇290-410nm波長測定最佳，目前多用340nm由于免疫復(fù)合物顆粒大小再35-100nm，對近紫外的光線可見9方法評價：優(yōu)點：①靈敏度比單擴(kuò)法高5—10倍；②操作簡便快速，1h可報告結(jié)果；③結(jié)果準(zhǔn)確，且能用全自動化或半全自動化儀器進(jìn)行分析，尤其隨著膠乳粒子增強濁度測定法的出現(xiàn)，使敏感度提高，其應(yīng)用更加廣泛。缺點：抗體用量較大；檢測需抗原抗體反應(yīng)達(dá)到平衡，耗時較長；溶液中存在的抗原抗體復(fù)合物分子應(yīng)足夠大。靈敏度較散射比濁法低。方法評價：優(yōu)點：缺點：102散射免疫比濁法原理：

散射光系指一定波長的光沿水平軸照射，碰到溶液中的免疫復(fù)合物，對光線產(chǎn)生反射和折射而形成的。散射濁度法是在入射光的一定角度檢測粒子發(fā)出的散射光，散射光的強度與復(fù)合物的含量呈正比，即待測抗原越多，形成復(fù)合物越多，散射光強度越強。又可分為速率散射比濁法(ratenephelometry)和終點散射比濁法(endpointnephelometry)。2散射免疫比濁法原理：113免疫膠乳比濁法原理是一種帶載體的免疫比濁法，用抗體致敏的大小適中，均勻一致的膠乳顆粒（一般是0.2μm），在遇到相應(yīng)抗原時，膠乳顆粒上抗體與抗原特異性結(jié)合，引起膠乳顆粒凝集。分散的單個膠乳顆粒直徑位于入射光波長之內(nèi)，光線可透過，當(dāng)2個或2個以上膠乳凝集時，則使透過光減弱或散射光增強。這種減少或增強的程度與膠乳凝集成正比，與抗原濃度呈正相關(guān)。3免疫膠乳比濁法原理12（a）帶抗體的膠乳在波長之內(nèi)可透過光線；（b）結(jié)合后，則形成光線衰減（a）帶抗體的膠乳在波長之內(nèi)可透過光線；13方法評價1、敏感度高，可達(dá)到ng/L水平2、操作簡單，容易自動化3、結(jié)果穩(wěn)定、可靠，特異性好；不需特殊儀器設(shè)備，一般分光光度計、自動化生化分析儀或散射比濁儀均可使用。

方法評價1、敏感度高，可達(dá)到ng/L水平14(三)、主要影響因素抗原抗體比例抗體的質(zhì)量抗原抗體反應(yīng)的溶液增濁劑的使用(三)、主要影響因素抗原抗體比例151抗原抗體比例高劑量鉤狀效應(yīng)（highdosehookeffect)海德堡（heidelberger）曲線理論

1抗原抗體比例高劑量鉤狀效應(yīng)（highdosehook16免疫沉淀類試驗——免疫比濁課件17免疫沉淀類試驗——免疫比濁課件182抗體的質(zhì)量（1）特異性高（2）效價高（3）親和力高（4）抗血清來源2抗體的質(zhì)量（1）特異性高193抗原抗體反應(yīng)的溶液pH6.5~8.5電解質(zhì)離子強度、種類（磷酸鹽緩沖液）3抗原抗體反應(yīng)的溶液pH204增濁劑的使用PEG、tween-20等非離子型親水劑作用：消除蛋白質(zhì)分子周圍的電子云和水化層，促進(jìn)抗原、抗體分子靠近，結(jié)合形成大分子復(fù)合物。4增濁劑的使用PEG、tween-20等非離子型親水劑21本次實驗內(nèi)容免疫濁度測定——