細菌的生理生化反應實驗報告【實驗目的】

了解細菌生理生化反應原理，掌握細菌鑒定中常見的生理生化反應方法。

了解生理生化反應在鑒別細菌中的意義。

【實驗原理】

通過測定微生物校內某些酶類的有無、對某些第五的利用能力、代謝產物的類型等來研究微生物帶血的多樣性。某些細菌產生色氨酸酶，能分解培養基蛋白胨中的色氨酸，產生吲哚，吲哚與對二甲基氨基苯甲醛發生反應，形成紅色的玫瑰吲哚，為吲哚反應陽性。

微生物發酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸縮合脫羧成乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在堿性條件下與肌酸類物質反應，生成紅色化合物為V.P.反應陽性。有些細菌發酵糖類產生有機酸較多，使發酵液的pH下降到4.2以下，當加入甲基紅試劑后，時發酵液變紅色，為甲基紅反應陽性。某種微生物能以某種糖類為碳源，產酸產氣，則判斷為發酵這種糖。

【實驗材料和用具】菌種：大腸桿菌、產氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌。培養基：葡萄糖蛋白胨水培養基、蛋白胨水培養基、糖發酵培養基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P試劑、甲基紅試劑、吲哚試劑儀器：酒精燈、接種環、超凈工作臺、恒溫培養箱、高壓滅菌鍋、試管、移液槍、滴管、杜氏小管。【實驗方法】（一）V-P反應1.試管標記取5只裝有葡萄糖蛋白胨水培養基的試管，分別標記大腸桿菌、產氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對照。2.接種培養以無菌操作分別接種少量菌苔至上述相應試管的培養基中?？瞻讓φ詹唤臃N。置37度恒溫培養箱中培養24-48h。3.觀察記錄去除以上培養物，分別取出2ml培養液加入另外5支相應編號的空試管中，加入與培養液等量的V-P試劑，充分震蕩2min。放置37度恒溫培養箱中培養30min觀察記錄結果。（二）甲基紅實驗于V-P實驗留下的培養液中，分別加入2-3滴甲基紅指示劑，立即觀察培養液的顏色變化（三）吲哚實驗1.試管標記取5只裝有蛋白胨水培養基的試管，分別標記大腸桿菌、產氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對照。2.接種培養以無菌操作分別接種少量菌苔至上述相應試管的培養基中?？瞻讓φ詹唤臃N。置37度恒溫培養箱中培養24-48h。3.觀察記錄在培養基中加入乙醚1-2ml，經充分振蕩使吲哚萃取至乙醚中，靜置片刻后乙醚層浮于培養液的上面，此時沿試管壁緩慢加入5-10滴吲哚試劑。觀察記錄結果（四）糖發酵試驗1.試管標記取分別裝有葡萄糖、蔗糖、乳糖發酵培養液試管各4支，分別標記大腸桿菌、產氣腸桿菌、普通變形菌和空白對照。2.接種培養以無菌操作分別接種少量菌苔至上述相應試管的培養基中?？瞻讓φ詹唤臃N。置37度恒溫培養箱中培養24-48h。3.觀察記錄【實驗結果與分析】（一）V-P大腸產氣枯草變形對照結果—+———產氣腸桿菌結果為陽性，其余為陰性。（二）甲基紅大腸產氣枯草變形對照結果+++——大腸桿菌、產氣腸桿菌、枯草芽孢桿菌結果為陽性，變形菌為陰性。（三）糖發酵大腸產氣變形對照葡萄糖顏色+—+—是否產氣+———乳糖顏色+—+—是否產氣+———蔗糖——+—是否產氣——+—大腸桿菌可以利用葡萄糖和乳糖，并且產氣；普通變形菌可以利用葡萄糖、乳糖和蔗糖并且在蔗糖中產氣。（四）吲哚實驗大腸產氣枯草變形對照結果+——+—大腸桿菌和普通變形菌結果為陽性，其余為陰性。（五）抗生素抑菌圈大小氯苯青霉素氯霉素卡那霉素鏈霉素對照金黃2.70.91.20.9-大腸1.11.21.21.3-氯苯青霉素對