外源性化學刺激物誘導的balbc小鼠炎癥性腸病模型的比較研究

0外源性化學刺激物balb/c小鼠izact的制備炎癥性腸?。╥bd）是一種非特異性胃腸道疾病，包括克羅恩病（cd）和潰瘍性胃炎（iu）。這種疾病是全球的，也是嚴重危害中國人民健康的疾病。近年來，它的發病率逐年上升。到目前為止，我不知道為什么imd的病因是如此。在這種疾病中，有免疫因素和各種炎癥因素的參與。目前，臨床上主要用于水楊酸制劑、皮質素酸鹽和免疫抑制劑，但效果不令人滿意，長期使用導致許多副作用。因此，建立理想的動物模型對澄清病因、發病機制和觀察藥物的有效性具有重要意義。由于imd的病因和發病機制復雜，因此很難建立理想的動物模型。外部化學試劑的誘導老鼠腸粘膜產生免疫反應，建立批判的動物模型是一種常見的方法。為了本研究中使用最小三硝基苯磺酸（2、4、6-環己二醇磺酸（tnbs）、葡萄糖硫酸鈉（sds）和惡唑酮（oxazolon）的外源性化學激物。建立了三個balb模式的模型balb。對于c個人化學，我們需要對該方法進行全面的探討，并選擇相應的cd和lc動物模型。1材料和方法1.1動物、實驗和模型動物選用6-8wkSPF級BALB/C早小鼠,體質量約20-25g,由中國醫科大學附屬第二臨床學院動物實驗中心提供.惡唑酮、TNBS、DSS(Mr5000)均由Sigma公司提供.1.2小鼠的術后處理及統計學處理取50只小鼠隨機分為5組,分別為惡唑酮組、TNBS組、DSS組、A對照組、B對照組,每組10只.實驗前5d30g/L惡唑酮無水乙醇溶液0.15mL涂抹惡唑酮組小鼠腹部皮膚暴露部位,范圍2cm×2cm.實驗前24h,惡唑酮組、TNBS組、A對照組小鼠禁食(不禁水),先用50g/L水合氯醛0.15mL腹腔注射使小鼠輕度麻醉,約25min以后用套接了小號導尿管的1mL注射器抽吸藥液,從肛門將導尿管緩慢插入約3.5cm,然后將藥液緩慢注入,停20s后抽出導尿管,再將小鼠倒懸約30s后放入盒中.惡唑酮組灌注10g/L惡唑酮500mL/L乙醇溶液0.15mL,TNBS組灌注20g/LTNBS500mL/L乙醇溶液0.1mL,A對照組灌注500mL/L乙醇溶液0.15mL.DSS組、B對照組小鼠實驗當天早晨開始自由飲液,DSS組小鼠飲用液體為5g/LDSS蒸餾水溶液,B對照組小鼠飲用液體為蒸餾水,連續7d.實驗第8d處死全部小鼠,大體觀察腸壁,分離結腸,沿腸系膜緣剪開腸腔,生理鹽水沖洗糞便,留取結腸標本,40g/L甲醛固定,行病理切片,蘇木精-伊紅染色檢查.觀察指標為疾病活動指數(DAI)、病理組織學計分,評分標準見表1、2.統計學處理所有計算均用SPSS10.0統計軟件來完成,數據用mean±SD表述,各組數據之間的比較采用t檢驗.2結果2.1小鼠血便特征結果惡唑酮組、TNBS組、DSS組小鼠分別于第2、3d開始全部出現稀便及明顯體質量下降,其中惡唑酮組4只小鼠出現血便,4只小鼠便潛血陽性;TNBS組7只小鼠出現血便,3只小鼠便潛血陽性;DSS組3只小鼠出現血便,5只小鼠便潛血陽性.A對照組小鼠第1d便開始出現松散便或稀便,但第7d大便已基本正常,其中5只小鼠體質量稍下降.B對照組小鼠僅有2只出現體質量稍下降.各組小鼠DAI評分見表3.2.2tnbs對小鼠病變的影響DSS組小鼠黏膜病變從肛門側自下向上連續性發展,逐漸減輕,直腸最為嚴重,近端結腸幾乎正常,病變部黏膜呈中、重度充血水腫,散在糜爛、淺潰瘍.TNBS組小鼠病變以結腸末端為主,但可達近端結腸,2只小鼠病變達末端小腸,病變部黏膜呈充血水腫,糜爛、壞死,多發潰瘍,潰瘍深大,壞死嚴重,腸腔狹窄.A、B對照組小鼠結腸黏膜基本正常.2.3小鼠黏膜、黏膜染色惡唑酮組、DSS組小鼠黏膜均見中、重度充血水腫,淺潰瘍,僅1例惡唑酮組小鼠潰瘍達肌層,惡唑酮組小鼠黏膜、黏膜下層以淋巴細胞浸潤為主,而DSS組小鼠黏膜、黏膜下層以中性粒細胞浸潤為主.TNBS組小鼠黏膜充血水腫,上皮脫落、壞死,潰瘍形成,部分潰瘍達漿膜層,黏膜、黏膜下層以中性粒細胞浸潤為主.A對照組4例出現黏膜、黏膜下層輕度細胞浸潤.B對照組僅2例小鼠出現黏膜、黏膜下層輕度細胞侵浸潤.各組小鼠病理計分見表4.3實驗模型的活性成分IBD的許多研究成果來源于IBD動物模型,因而構建合適的IBD動物模型對IBD的研究非常重要.目前,建立IBD動物模型的方法主要有4種:第1種是某些動物可自然發生腸道黏膜炎癥,此類模型的存在提示炎癥性腸病的發生可能與某些基因特征有關;第2種是通過基因敲除及轉基因技術誘導的模型,此模型可從基因水平闡明腸道炎癥的免疫發病機制;第3種是用異體結腸黏膜等作為抗原刺激造成慢性免疫性炎癥;第4種是通過外源性化學刺激物而誘發的模型,其中第4種方式應用的較為普遍,而近年來應用較多的用來誘導IBD動物模型的化學刺激物是惡唑酮、TNBS及DSS.惡唑酮是一種半抗原,應用其誘導IBD動物模型時,通過皮膚先致敏再灌腸給藥,較直接灌腸給藥能更好地模擬出IBD動物模型,本實驗即先予30g/L惡唑酮無水乙醇溶液0.15mL涂抹小鼠皮膚暴露部位,再予10g/L惡唑酮500mL/L乙醇溶液0.15mL灌腸,小鼠第2d迅速發病,臨床及病理表現均與UC相似.DSS是由蔗糖合成的一種硫酸多糖體,具有和肝素一樣的抗止血和抗凝血作用,其誘導的動物模型被廣泛應用于實驗性IBD研究.本實驗應用50g/LDSS蒸餾水溶液,給小鼠自由飲用,連續7d,出現遠端結腸急性炎癥表現,病理及臨床表現與UC相似,說明DSS誘導的動物模型適合UC的研究.TNBS誘導的IBD動物模型具有CD的特點,本實驗TNBS組小鼠結腸病理可見黏膜充血水腫,糜爛、壞死,多發潰瘍,潰瘍深大,部分潰瘍達漿膜層,壞死嚴重,腸腔狹窄,病變可達小腸末端.惡唑酮、DSS及TNBS誘導IBD動物模型的機制未完全闡明.大量證據顯示Thl細胞和Th2細胞的平衡失調可能與IBD的發病相關.Th1細胞主要分泌干擾素-γ(IFN-γ)、白介素-2(1L-2);Th2細胞主要分泌白介素-4(IL-4)、白介素-5(1L-5).Th1細胞、Th2細胞通過分泌細胞因子相互調節對方的生長分化,從而維持Th1細胞、Th2細胞之間的平衡,