小柴胡湯對功能性消化不良大鼠血管活性腸肽、胃中空及小腸推進(jìn)率的影響

功能消化不良是一種常見的循環(huán)系統(tǒng)疾病，屬于中醫(yī)學(xué)的“胃痛”、“傷證”、“癱瘓”、“噪聲”、“憤怒”等范疇。流行病學(xué)調(diào)查顯示,我國廣東城鎮(zhèn)居民消化不良的患病率為19.8%,國外調(diào)查人群中消化不良發(fā)病率在19%~41%,且呈逐年上升的趨勢,是臨床最常見的內(nèi)科疾病之一。小柴胡湯作為《傷寒論》少陽病之主方,近年來有應(yīng)用于FD的報(bào)道,且有較好的療效。小柴胡湯治療功能性消化不良的現(xiàn)代依據(jù),目前的實(shí)驗(yàn)研究多從退熱、抗炎、抗腫瘤、抗過敏、鎮(zhèn)咳、保肝利膽、鎮(zhèn)靜及抗病毒等方面進(jìn)行解釋,較少從胃腸激素、胃排空及小腸推進(jìn)等方面進(jìn)行研究。本研究通過觀察小柴胡湯對實(shí)驗(yàn)性功能性消化不良大鼠胃腸激素VIP、胃排空及小腸推進(jìn)率的影響,為小柴胡湯治療功能性消化不良提供胃腸動(dòng)力學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1動(dòng)物生長量測定健康SPF級SD大鼠48只,雌雄各半,體重180~220g。由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,動(dòng)物合格證號SCXK(湘)2009-0004,飼養(yǎng)溫度20~25℃,濕度50%~70%。血管活性腸肽(VIP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒(南京建成科技有限公司)。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的造模48只大鼠隨機(jī)分為4組,即:空白組、模型組、小柴胡湯組、多潘立酮組。除空白組外,其他3組均采用慢性束縛應(yīng)激+過度疲勞+飲食失節(jié)的方法造模。實(shí)驗(yàn)前全部動(dòng)物進(jìn)行預(yù)游泳,剔除游泳時(shí)間<10min,>20min的大鼠。于每天上午8:00將大鼠置于束縛盒中限制3h,下午2∶00置于盛有溫水(22±1)℃的大塑料桶中游泳10min,隔日喂食(禁食與足量給食隔天交替進(jìn)行),連續(xù)3周。1.3試劑制備1.3.1加味生姜、生姜參照第7版方劑書確定小柴胡湯的用量:柴胡24g,黃芩9g,法半夏9g,生姜9g,人參9g,甘草9g,大棗12g。上述7味藥材除生姜外,均購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,生姜為市售。按中藥常規(guī)煎法進(jìn)行煎煮,將上述藥物以8倍量水浸泡30min后,加熱保持微沸30min,過濾;殘?jiān)?倍量水,微沸30min,過濾,合并2次濾液,濾液濃縮至折合原藥材質(zhì)量濃度2g·mL-1,置于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.3.2多酚酮溶液將多潘立酮片(西安楊森制藥有限公司,批號H10910003)研成細(xì)粉末,溶于水中,溶液質(zhì)量濃度為0.27g·L-1,用時(shí)充分搖勻。1.3.3半固體糊狀物的制備取10g羧甲基纖維素鈉,溶于250mL蒸餾水中,分別加入16g奶粉,8g糖,8g淀粉和2g活性炭末,攪拌均勻,配制成300mL約300g的黑色半固體糊狀物。冰箱冷藏,用時(shí)恢復(fù)至室溫。1.4大鼠灌胃用藥量按動(dòng)物藥量=成人劑量×0.018(200g大鼠與70kg成人體表面積比),小柴胡湯、多潘立酮溶液大鼠灌胃用藥量均為10mL·kg-1,空白組、模型組則按10mL·kg-1的劑量灌以相應(yīng)體積的生理鹽水,每天上午8:00開始進(jìn)行,連續(xù)14d。1.5實(shí)驗(yàn)步驟1.6觀察指標(biāo)和方法1.6.1酶聯(lián)免疫檢測采用腹主動(dòng)脈采血的方法采血5mL,-4℃低溫離心,3000r·min-1,離心15min,離心后提取上清液置于-20℃冰箱保存,按照VIP酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書提供的方法進(jìn)行檢測。主要包括以下步驟:(1)對照品的稀釋與加樣;(2)加樣;(3)溫育;(4)配液;(5)洗滌;(6)加酶;(7)顯色;(8)終止;(9)測定。1.6.2胃內(nèi)殘留物質(zhì)量測定大鼠取材前給予半固體糊10mL·kg-1灌胃處理,30min后,用20%烏拉坦10mL·kg-1腹腔麻醉。開腹,結(jié)扎胃賁門和幽門,取胃,用濾紙吸干后稱全重,然后沿胃大彎剪開胃體,洗去胃內(nèi)容物后擦干,稱凈重。胃全重與胃凈重之差即為胃內(nèi)殘留物質(zhì)量,以胃內(nèi)殘留物與所灌半固體米糊質(zhì)量的百分比為胃內(nèi)殘留率。同時(shí)迅速取出小腸,輕輕剝離后直鋪于白紙上,測量幽門至回盲腸部全長及幽門至黑色半固體糊前沿的距離。以幽門至黑色半固體糊前沿的距離與幽門至回盲部全長的百分比為小腸推進(jìn)率。1.7正交試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以表示。首先進(jìn)行正態(tài)性、方差齊性檢驗(yàn)。滿足正態(tài)性者,不同組間比較采用單因素方差分析,方差齊時(shí)選擇LSD法,方差不齊時(shí)選擇DunnettT3法;不滿足正態(tài)性時(shí)用秩和檢驗(yàn)。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P<0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果與分析2.1血清hpv含量的測定由表1可以看出,與空白組相比,模型組實(shí)驗(yàn)大鼠的血清VIP含量明顯升高,且有顯著性差異(P<0.01);與模型組相比,小柴胡湯組與多潘立酮組實(shí)驗(yàn)大鼠的血清VIP含量明顯降低,且均有顯著性差異(P<0.05)。說明小柴胡湯與多潘立酮均可降低功能性消化不良實(shí)驗(yàn)大鼠血清中VIP的含量,從而改善其對胃腸蠕動(dòng)的抑制作用。2.2顯著性差異分析由表2可以看出,與空白組相比,模型組大鼠的胃內(nèi)殘留率明顯升高,小腸推進(jìn)率明顯下降,且均有顯著性差異(P<0.05);與模型組相比,小柴胡湯組與多潘立酮組實(shí)驗(yàn)大鼠胃內(nèi)殘留率明顯降低,小腸推進(jìn)率明顯升高,且均有顯著性差異(P<0.01)。說明小柴胡湯與多潘立酮均具有促進(jìn)功能性消化不良實(shí)驗(yàn)大鼠胃腸蠕動(dòng),加速胃排空及小腸推進(jìn)的作用。3和胃降逆和和胃小柴胡湯作為《傷寒論》治療少陽病的主方,具有有調(diào)理氣機(jī)、疏肝解郁、健脾和胃之功,可促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)的恢復(fù)。方中柴胡為君,不僅能外散少陽經(jīng)中之邪熱,亦可疏肝解郁,行肝經(jīng)郁結(jié)之氣,止胸脅之痛。黃芩為臣,清泄少陽膽腑之邪熱。二藥合用,則臟腑并治,清熱解郁,復(fù)少陽疏泄調(diào)達(dá)之性。且柴胡味辛能升,黃芩味苦能降,二者一升一降亦可調(diào)理氣機(jī)。半夏、生姜為佐,其中半夏燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結(jié),為止嘔要藥;生姜辛散溫通,能溫胃散寒,和中降逆,其止嘔功良,素有“嘔家圣藥”之稱,二者合用和胃降逆之功卓著。另一方面半夏、生姜之辛散與柴胡、黃芩之苦降相合,辛開苦降亦可有助于少陽樞機(jī)的恢復(fù),達(dá)到調(diào)理氣機(jī)之功。人參、大棗、甘草,三藥合用,健脾益氣、培補(bǔ)中州,以助柴芩疏邪扶正。本方寒熱并用、攻補(bǔ)兼施、升降協(xié)調(diào),實(shí)有調(diào)達(dá)氣機(jī)、運(yùn)轉(zhuǎn)樞機(jī)、疏肝健脾、和胃降逆之效。現(xiàn)代藥理學(xué)也認(rèn)為,柴胡、黃芩均可促進(jìn)小腸推進(jìn)功能,半夏對小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)呈顯著促進(jìn)作用,大棗可有效地減少腸道蠕動(dòng)時(shí)間,甘草對于小腸推進(jìn)和胃排空有雙向調(diào)節(jié)的作用。VIP是由28個(gè)氨基酸組成的一種重要的胃腸激素,對胃腸運(yùn)動(dòng)有抑制作用。孫曉寧等發(fā)現(xiàn),FD患者血漿中VIP高于正常水平,江家贊等的研究也表明,FD肝郁脾虛證患者VIP含量與健康對照者比較明顯升高,均提示VIP是FD發(fā)病的因素之一。本研究結(jié)果顯示:與空白組相比,模型組實(shí)驗(yàn)大鼠的VIP含量明顯升高,且有顯著性