定性測定的性能驗證李金明衛生部臨床檢驗中心2023/7/281臨床定性檢驗的報告方式有反應、無反應、陽性、陰性是、不是（或有、沒有）2023/7/282“性能驗證”？ISO15189實驗室認可的要求？（任務？）實驗室檢測臨床應用的必需？2023/7/283高速列車性能驗證空氣動力學速度車體轉向架運行固定、懸掛的零部件強度穩定性舒適感故障率……2023/7/284定性測定系統/試劑性能驗證特異性敏感性測定下限重復性（包括CUT－OFF值的重復性）準確性抗干擾能力2023/7/285性能驗證的合格標準從何而來？試劑盒說明書國際和／或國際標準2023/7/2862023/7/2872023/7/2882023/7/2892023/7/28102023/7/28112023/7/28122023/7/28132023/7/28142023/7/28152023/7/28162023/7/28172023/7/28182023/7/2819什么時候進行性能驗證使用新的檢測試劑或系統時更換檢測試劑或系統時2023/7/2820臨床實驗室為什么更新檢測試劑或系統？新的試劑或系統更易于操作更高的檢測性能更經濟更能滿足實驗室測定要求2023/7/2821性能驗證前的準備應熟悉待驗證的試劑或系統進行必要的培訓，包括樣本的處理和儲存、試劑的處理和儲存、合理的檢測方案、對結果合理的解釋以及系統的質量控制等。制定質量保證計劃確定患者樣本的數量及強弱（評價重復性）確定比較的方法CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2822編制性能驗證的SOP2023/7/2823定義篩查試驗：臨床上，篩查方法通常用于檢測整個人群（或者人群中的特定部分）中特定指標的情況。例如對樣本做糞便隱血檢測或者性病研究實驗室（VDRL）梅毒血清學試驗。一般來說，這些用于篩查的定性試驗必須具有高敏感性以確保真陽性結果的檢出。因此通常篩查試驗比診斷試驗或確認試驗會產生更多的假陽性結果。如果篩查試驗的假陽性結果所造成的社會及經濟后果不是非常嚴重，這種低特異性可通過特異性較好的確認試驗加以彌補。

盡管陽性篩查試驗結果需要確認試驗來進一步證實，但是這依然要優于假陰性篩查試驗結果的出現。因為假陰性結果會造成更嚴重的后果，例如疾病通過已感染的血液傳播或者延誤了對于可治愈的嚴重疾病的治療。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2824定義診斷試驗：通常用于臨床懷疑某種特定疾病或狀況是否存在的診斷性定性試驗。例如各種微生物培養就是用于檢查感染情況的診斷試驗。因臨床上對治療的及時的要求，診斷試驗應具有很好的敏感性和特異性。如果診斷試驗后還進行確認試驗，那么診斷試驗的特異性要求可以稍微降低。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2825定義確認試驗：確認試驗用于驗證篩查試驗或者診斷試驗結果。如果確診試驗證實了之前的檢測結果，臨床醫生即可作出診斷。確認試驗通過設計使其具有較高的特異性（有時甚至以犧牲敏感性為代價）以及高陽性預測值。螺旋體抗體熒光吸附（FTA-ABS）梅毒血清學試驗就是一種用于VDRL梅毒血清學試驗等篩查試驗之后的確認試驗。2023/7/2826定義臨床敏感性：在患有明確臨床疾病的患者中，其檢測結果呈陽性或者超過正常值范圍的比率（即出現陽性結果和確定患者患病）；注：該臨床疾病必須由不依賴于被評價試驗的標準確定。臨床特異性：在沒有特定臨床疾病的患者中，其檢測結果呈陰性或者在正常值范圍內的比率。2023/7/2827定義陽性測定能力指數（DI（＋））：可定義為一實驗對陽性標本測定后給出陽性結果的能力（通常稱為“敏感性”）；DI（＋）=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%陰性測定能力指數（DI（－））：則為對陰性樣本測定給出陰性結果的能力（通常稱為“特異性”）；DI（－）=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%2023/7/2828定義陽性結果的可靠性（‘預示值’）：即測定為陽性的標本實際上為陽性的可能性。

=[真陽性/（真陽性+假陽性）]×100%陰性結果的可靠性:則為一份給出陰性結果的樣本實際上為陰性的可靠性。

=[真陰性/（真陰性+假陰性）]×100%2023/7/2829“預示值”對臨床檢驗結果影響預示值對一個有95%敏感性和95%特異性的試劑檢測結果的影響（100,000人）

結果10%感染率1%感染率

檢出(+)未檢出(－)

檢出(+)未檢出(－)+9,50050095050

－4,50085,5004,95094,050敏感性(TP/[TP+FN])95%95%特異性(TN/[TN+FP])95%95%陽性預示值TP/[TP+FP]9500/[9500+4500]=67.9%950/[950+4950]=16%陽性預示值TN/[TN+FN]85500/[85500+500]=99.4%94050/[94050+50]=99.9%2023/7/2830樣本的準備質控品：使用商品化質控物進行，包括陰性和陽性。樣本的采集和保存：采集時間、保存方式等必須保證一致性。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2831重復性驗證CUT-OFF的重復性（同時包含測定下限的驗證）批內變異的驗證批間變異的驗證2023/7/2832重復性驗證的質量控制質控品：如方法學比較在10天內完成，則每一批次都要對每份質控樣本進行檢測，共提供20次重復檢測結果。如果方法比較研究超過20天，則每一批次都要對每份對照樣本進行單次檢測，總計也提供20次重復結果。如出現失控，則當次檢測結果無效。在當天或第二天安排新批次的檢測以替換不合格的批次。實驗室要分析失控的原因。不合格批次在10天內不應超過1次或20天內不超過兩次。如若超出，所在實驗室應中止檢測工作并咨詢試劑制造商以確定原因并采取糾正措施。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2833重復性驗證：樣本濃度CUT-OFF重復性驗證：樣本濃度應接近臨界值。不宜用陰性或強陽性樣本。批內和批間變異驗證：高、中和低三個濃度（與試劑盒說明書中所述相適應）2023/7/2834CUT-OFF重復性和測定下限驗證2023/7/2835臨界點的定義同樣一份樣本，在多次重復實驗中各有50%的幾率獲得陽性或陰性的結果時該分析物的濃度。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2836臨界點（CUT-OFF)與試劑盒陽性反應判斷值（CUT-OFF值）的區別這里的臨界點指的是一個處于試劑檢測臨界點的樣本濃度，其一旦確定，是不變的。試劑盒CUT-OFF值指的是一個判斷某一次測定結果的由陰性和陽性對照信號值按一定公式計算出來的信號值，每次測定都會有所差異。2023/7/2837如何獲得系統或試劑的“臨界點”檢測試劑或系統的說明書可能會注明分析物的臨界濃度。如果臨界濃度未知，則可以將陽性樣本進行一系列稀釋，然后將他們進行重復檢測以確定能夠獲得50%陽性和50%陰性結果的那個稀釋度。這一稀釋度的分析物濃度即為臨界點。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2838臨界點（CUT-OFF）的(精密度）重復性指的是什么？是為正在評價的檢測試劑或系統建立分析物的臨界濃度(C50)，并且確保臨界濃度±20%的范圍處于95%區間內(C95)。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/28392023/7/2840不精密度曲線2023/7/2841兩種不同方法的不精密度曲線比較2023/7/2842驗證步驟制備足夠40次重復檢測的3份樣本：分別為處于臨界濃度、高于臨界濃度20%和低于臨界濃度20%的樣本。重復檢測樣本40次，確定每一份樣本結果為陽性和陰性的百分比。評價臨界濃度是否準確？評價+20至-20%的濃度范圍是否包含于、位于或者超出這種方法的95%區間？CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2843C50是否準確？40次測試C501陽性結果=<13/40(32.5%)不正確>=27/40(67.5%)2陽性結果（14-26）/40（35%-65%）正確2023/7/2844陽性結果重復性檢測總次數次數百分比真正百分比樣本的實際濃度201050%30%-70%C30-C70402050%35%-65%1005050%40%-60%不同C50重復檢測次數與檢出陽性數的關系2023/7/2845候選方法的-20%～+20%濃度范圍是否包含了C5-C95區間？1+20%陽性結果=<35/40(87.5%)-20%～+20%濃度范圍在C5-C95區間之內用該方法檢測濃度超過C50+20%的樣本檢測結果不一致-20%陰性結果=<35/40(87.5%)2+20%陽性結果>=36/40(90%)-20%～+20%濃度范圍包含了C5-C95區間用該方法檢測，C50+20%的樣本檢測結果一致-20%陰性結果>=36/40(90%)3+20%陽性結果>=36/40(90%)-20%～+20%濃度范圍只是部分地在C5-C95區間內。（+20%包含了C5-C95區間，但-20%濃度的樣本在C5-C95區間內。）用該方法檢測，C50+20%的樣本檢測結果一致。濃度-20%的樣本用該方法卻不一定能得到一致結果。-20%陰性結果=<35/40(87.5%)4+20%陽性結果=<35/40(87.5%)-20%～+20%濃度范圍只是部分在C5-C95區間內。（+20%在C5-C95區間內，但-20%包含了C5-C95區間。）用該方法檢測，C50-20%的樣本檢測結果一致。-20%陰性結果>=36/40(90%)2023/7/2846批內重復性的驗證高、中、低三個濃度的樣本，在一批檢測內，重復檢測20次（孔），計算所得S/CO值的均值和SD，計算批內CV%。判斷結論：應≤試劑說明書所標明的批內變異。ELISA的批內變異CV%應≤10%。2023/7/2847批間重復性的驗證高、中、低三個濃度的樣本，在10天以上時間內單次（孔或管）重復進行20批檢測，計算所得S/CO值的均值和SD，計算批間CV%。判斷結論：應≤試劑說明書所標明的批間變異。ELISA的批間變異CV%應≤15%。2023/7/2848測定下限的驗證處于測定下限濃度（如臨界點濃度+20%）的樣本，重復檢測20次，應至少有18次以上為陽性反應。2023/7/2849特異性驗證特定病原體以外感染性疾病患者的樣本。含有干擾性物質的樣本：類風濕因子（RF）陽性、含異嗜性抗體、溶血、脂血、高膽紅素樣本。結果判斷：非特定病原體感染患者樣本均應為陰性。含一定濃度干擾物質的樣本檢測應為陰性。2023/7/2850準確性驗證：方法比較另一種定性方法（如使用者目前正在使用的方法）“金標準”方法某種定量方法或臨床診斷。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2851準確性驗證用樣本的要求量要足夠大注意在一次獲得多組樣本時可能存在的偏差穩定兩種方法同時進行檢測CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2852方法比較用樣本數量取決于評價者的目的。作為最低要求，檢測要持續到至少用比較方法獲得50個陽性樣本。并且至少用比較方法獲得50例陰性樣本以確定此種檢測方法的特異性。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2853方法比較持續時間10~20天。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2854數據收集的檢查每次實驗，應立即記錄所有原始檢測數據并復核，以早期發現分析系統及人為誤差的來源。一旦發現某些結果是由可解釋的誤差引起的，則應將其記錄下來，同時，這些結果不能用于數據分析。如不能確定誤差產生的原因，則保留原始結果。2023/7/2855不一致結果的處理如果比較方法不是100%準確，可以用“金標準”“參考方法”來檢測在檢測和比較方法間產生差異的樣本。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2856參考血清盤曾經被檢測過的、或者被成熟方法檢測的，或臨床診斷中有意義的臨床樣本對于評價定性方法來說很有價值。陽性樣本濃度高低不等，具有代表性。可占整個血清盤樣本數的50%。陰性樣本可含有干擾物質。可占整個血清盤樣本數的50%。CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2857方法學比較的結果計算比較用方法結果陽性陰性總數待評價方法結果陽性

A

B

A

+

B陰性

C

D

C+D總數A+CB+DA+B+C+D敏感性=[A/（A+C）]×100%特異性=[D/（D+B）]×100%符合率=[（A+D）/（A+B+C+D）]]×100%CLSI

EP12-A2

UserProtocolforEvaluationofQualitativeTestPerformance;Approved

Guideline2023/7/2858準確性驗證的其他方面與臨床的“對話”。這也是一個新的試劑或方法或系統替代舊的試劑或方法或系統成功應用于臨床的前提。2023/7/2859定性測定手工操