本文格式為Word版，下載可任意編輯——體驗制備細(xì)胞膜的方法教學(xué)設(shè)計體驗制備細(xì)胞膜的方法教學(xué)設(shè)計

背景資料

生物膜的研究發(fā)展迅速。要研究生物膜的組成、結(jié)構(gòu)及功能，首先必需分開出純凈的細(xì)胞膜。分開得到的哺乳動物的紅細(xì)胞膜，一般稱為“血影〞。哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中沒有一般真核細(xì)胞所具有的細(xì)胞核和細(xì)胞器，簡單用它制備純凈的細(xì)胞膜。此外，哺乳動物的血液也比較簡單獲得，因而是研究細(xì)胞膜的理想材料。

從哺乳動物的紅細(xì)胞中分開細(xì)胞膜，第一步是將血液收集在加有抗凝劑的容器內(nèi)，用低速離心的方法從血液中分開出紅細(xì)胞，然后用等滲緩沖液反復(fù)洗滌，經(jīng)屢屢離心，去除血漿。其次步是在紅細(xì)胞中參與低滲緩沖液，由于低滲溶液的作用，大量水分進入細(xì)胞，使紅細(xì)胞脹破而溶血。第三步是將溶血的紅細(xì)胞反復(fù)而充分地高速離心、洗滌，去除血紅蛋白和其他的細(xì)胞內(nèi)含物，最終獲得比較純凈的紅細(xì)胞膜。

1．材料新鮮的哺乳動物血液

2．用具離心機，離心管，滴管，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，吸水紙，小燒杯。3．試劑檸檬酸鈉或肝素（抗凝劑），生理鹽水（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0．9%的NaCl溶液），蒸餾水或清水。

4．操作要點

教師在試驗前做以下準(zhǔn)備工作。

準(zhǔn)備一定量的新鮮的哺乳動物血液，如羊血或豬血，在冰箱中靜置一晝夜。用滴管將上清液吸去。再吸取1mL的沉淀物，放入離心管中，參與生理鹽水2mL，在2000r/min條件下離心5min。去除上清液，在沉淀中再參與生理鹽水2mL，再離心一次，去除上清液，留沉淀備用。以上操作的目的是洗去血漿成分，避免血漿對血細(xì)胞的緩沖作用，從而使紅細(xì)胞的溶血現(xiàn)象更加明顯。

學(xué)生的試驗操作如下。

（1）取一個5mL的小燒杯，參與生理鹽水2～3mL。

（2）用滴管在沉淀的下層吸取一小滴血細(xì)胞，滴入小燒杯的生理鹽水中，以達到稀釋紅細(xì)胞的目的，以免觀測時，由于細(xì)胞密度太大，影響觀測效果。

（3）取另一個滴管，在小燒杯中輕輕攪拌，然后吸取少量的血細(xì)胞稀釋液，在載玻片的中央滴很小的一滴，加蓋玻片。

（4）先在低倍鏡下觀測紅細(xì)胞的正常形態(tài)，可見其邊緣完整發(fā)亮。

（5）在蓋玻片的一側(cè)加一滴蒸餾水或清水，在另一側(cè)十分防備地用吸水紙漸漸地吸引，防止把紅細(xì)胞全部吸入吸水紙中而影響觀測。邊加水邊觀測，注意紅細(xì)胞的形態(tài)變化。紅細(xì)胞會隨著水流向一側(cè)漂移，觀測時注意移動玻片。紅細(xì)胞體積逐漸變大，變得十分鼓脹，在視野中可以找到少數(shù)脹破的紅細(xì)胞，它們已失去完整發(fā)亮的邊緣，變成彌散狀。

5．需要注意的幾個問題

（1）制作臨時裝片時，紅細(xì)胞必需稀釋，而且取紅細(xì)胞的量要少。

（2）在高倍鏡下觀測，待觀測明了時，在蓋玻片的一側(cè)滴加蒸餾水，同時在另一側(cè)用吸水紙吸引。上述操作均在載物臺上進行，并隨時調(diào)整鏡筒高度，持續(xù)觀測細(xì)胞的變化。在蓋玻片一側(cè)滴加蒸餾水的量要少，不能讓蓋玻片處于漂泊狀態(tài)；同時在另一側(cè)用吸水紙吸引時要防備，不要將血細(xì)胞吸走。

（3）要想取得好的觀測效果，所用顯微鏡的放大倍數(shù)應(yīng)在400倍以上。（4）操作中要認(rèn)真觀測才能看到連續(xù)的變化過程。

具體教學(xué)步驟

1．分析試驗原理

科學(xué)家要研究細(xì)胞膜，首先要解決的問題，是獲得相應(yīng)的試驗材料，即細(xì)胞膜。用哪種細(xì)胞來制備細(xì)胞膜比較適合呢？為什么？

。

根據(jù)學(xué)生回復(fù)的狀況，加以歸納總結(jié)。科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，哺乳動物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，而且細(xì)胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)也比其他真核細(xì)胞簡單得多，是制備細(xì)胞膜的理想材料。

怎樣才能獲得純凈的細(xì)胞膜呢？直接剝離可以嗎？有沒有間接的方法？

根據(jù)學(xué)生的回復(fù)，確定溶血的方法。再進一步提問，如何將細(xì)胞膜與細(xì)胞其他成分分開開？引導(dǎo)學(xué)生了解離心技術(shù)的應(yīng)用。由于細(xì)胞膜十分薄，尋常要在5000r/min及9000r/min條件下反復(fù)離心屢屢，才能得到純凈的細(xì)胞膜。由于時間和條件的限制，我們在課上只用顯微鏡來觀測紅細(xì)胞溶血前后細(xì)胞邊界的變化，以此來體驗細(xì)胞膜的存在，并對細(xì)胞膜的制備方法有一個初步的體驗。

2．明晰試驗步驟

讓學(xué)生探討，設(shè)計具體的實施步驟。

教師對學(xué)生設(shè)計的步驟進行補充完善。具體實施步驟參見“操作指南〞。

關(guān)于操作要點和難點，可以提出以下問題引發(fā)學(xué)生思考。例如，在載玻片上滴加的血細(xì)胞多些好還是少些好？在蓋玻片另一側(cè)用吸水紙吸引時，要注意什么？如何把握觀測溶血后的紅細(xì)胞的最好時機？教師針對問題，指出操作要點并講明原因。

3．分組試驗

學(xué)生進行分組試驗，教師給予具體的指導(dǎo)和評價。4．展示和探討試驗結(jié)果

可以把教材中紅細(xì)胞溶血前后的照片在投影上展示。根據(jù)學(xué)生分組試驗的狀況，教師作講解。試驗反思

1．本試驗中可以考察學(xué)生的基本試驗技能有：臨時裝片的制作，顯微鏡的使用等。2．關(guān)于試驗結(jié)果的評價。假使試驗成功，可以看到近水部分的部分紅細(xì)胞體積增大，很快會看到紅細(xì)胞的邊緣變得不明了，呈彌散狀。

3．影響試驗結(jié)果的因素可能有以下幾個方面。（1）紅細(xì)胞發(fā)生溶血的比例與操作是否得當(dāng)有關(guān)。（2）顯微鏡使用是否熟練。（3）是否認(rèn)真、連續(xù)地觀測。

教學(xué)反思

（1）教師在進行試驗原理分析時是否需要對凝血原理進行拓展教學(xué)。

（2）教師引導(dǎo)