第5章微生物的生長5.1微生物的生長及其特性5.2微生物的生存因子5.3其他不利環(huán)境因子對微生物的影響15.1.1生長與繁殖的概念何謂生長？同化作用大于異化作用時，細(xì)胞質(zhì)的量增加，表現(xiàn)在細(xì)胞體積或重量的不斷增加，這種現(xiàn)象稱生長何謂繁殖？生長一定程度后細(xì)胞分裂，這就是細(xì)菌的繁殖5.1微生物的生長及其特性21單細(xì)胞微生物生長：細(xì)胞物質(zhì)增加，體積增大繁殖：細(xì)胞數(shù)目的增加生長：細(xì)胞物質(zhì)增加，體積增大，細(xì)胞數(shù)目增加

繁殖：生命個體數(shù)目的增加5.1.1生長與繁殖的概念2多細(xì)胞微生物31、間歇培養(yǎng)（Batchcultivation）

和生長曲線（growthcurve）接種間歇培養(yǎng)：將一定量細(xì)菌接種于封閉的、一定量的液體培養(yǎng)基內(nèi)，在一定條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)過程不投加或取出任何東西。這種培養(yǎng)方式也叫分批培養(yǎng)。生長曲線：細(xì)胞量隨時間的變化曲線稱生長曲線5.1.2細(xì)菌的生長特性5總細(xì)胞數(shù)細(xì)菌的典型生長曲線：以時間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)為縱坐標(biāo)，做出一條菌數(shù)隨時間變化的曲線，即為生長曲線

活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細(xì)胞個數(shù)600時間細(xì)菌數(shù)生長速度緩慢期對數(shù)期穩(wěn)定期衰老期活菌數(shù)總菌數(shù)細(xì)菌生長曲線（按細(xì)菌數(shù)目的對數(shù)繪制）7停滯期、適應(yīng)期（lagphase）影響停滯期長短的因素：

?接種齡：種子(inoculum)處于什么生長期Ⅰ、Ⅳ>Ⅲ>Ⅱ

?接種量：即初期微生物濃度與基質(zhì)濃度的比

?培養(yǎng)基成分：總細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細(xì)胞個數(shù)特點：生長速率常數(shù)近于零，數(shù)目變化不大細(xì)胞形態(tài)變大rRNA含量增高合成代謝較活躍9產(chǎn)生停滯期的原因：

?缺乏分解有關(guān)基質(zhì)的酶

?缺乏充足的代謝中間產(chǎn)物總細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細(xì)胞個數(shù)停滯期、適應(yīng)期（lagphase）102）指數(shù)期（exponentialphase）對數(shù)期（stationaryphase）最短總細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細(xì)胞個數(shù)細(xì)胞數(shù)(量)以指數(shù)形式增加的時間段

特點：

?生長速率最大,世代時間（generationtime）倍加時間（doublingtime）?酶系活躍、代謝旺盛?細(xì)胞進(jìn)行平衡生長，體內(nèi)各成分最為均勻

教學(xué)實驗和發(fā)酵工業(yè)都用對數(shù)期的細(xì)胞做實驗材料,或“種子”11某些微生物的代時細(xì)菌：大腸桿菌40C0.35h枯草芽孢桿菌40C0.43h藻類：蛋白核小球藻25C7.75h原生動物：尾狀核草履蟲26C10.4h真菌:釀酒酵母30C2h133）穩(wěn)定期（stationaryphase）：恒定期、最高生長期、生長下降期特點：凈增長速度為零繁殖與死亡速度相等正生長與負(fù)生長相等出現(xiàn)穩(wěn)定期的原因：

營養(yǎng)物尤其是生長因子耗盡營養(yǎng)物比例失調(diào)代謝物的積累

pH、DO、氧化還原電位的變化144）衰亡期（declinephase,deathphase）內(nèi)源呼吸期（endogenousrespirationphase）內(nèi)源呼吸:體內(nèi)貯藏物質(zhì)酶等一部分細(xì)胞物質(zhì)的氧化特點:細(xì)胞形態(tài)多型化細(xì)胞會發(fā)生自溶現(xiàn)象(autolysis)

出現(xiàn)死亡期的原因：營養(yǎng)物不足（代謝產(chǎn)物的積累）外界條件惡化總細(xì)胞數(shù)活細(xì)胞數(shù)ⅠⅡIIIⅣ培養(yǎng)時間細(xì)胞個數(shù)第一節(jié)細(xì)菌的生長及其特性155.1.3生長研究微生物生長的方法3連續(xù)培養(yǎng)在微生物的整個培養(yǎng)期間，通過一定的方式使微生物能以恒定的比生長速率生長并能持續(xù)生長下去的一種培養(yǎng)方法恒化器：營養(yǎng)物質(zhì)濃度恒定恒濁器：光電系統(tǒng)控制培養(yǎng)中菌體濃度恒定17連續(xù)培養(yǎng)示意裝置圖18連續(xù)培養(yǎng)的稀釋率例:20ml/h的流速連續(xù)培養(yǎng),培養(yǎng)液體積1000ml,求稀釋率:D=20ml/h1000ml=0.02/h稀釋率：D=f/vF——培養(yǎng)基流速（ml/h）V——培養(yǎng)液體積（ml）19

菌種退化、設(shè)備要求高、原料利用略低、回用問題連續(xù)培養(yǎng)優(yōu)點與缺點優(yōu)點:﹡簡化了裝料、滅菌（節(jié)省動力）、清洗等（蒸汽、人力）單元操作；﹡減少非生產(chǎn)時間；提高設(shè)備利用率；﹡便于自動控制﹡產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定缺點：21（活性污泥等的混合微生物群，也有類似的生長曲線)

水處理中如何避免延滯期對數(shù)期或代謝旺盛的污泥增加接種量污泥馴化（以后詳細(xì)講）

微生物維持到對數(shù)期可獲得高的處理能力，即分解速度，但處理效果不一定好菌活力大，不易凝聚和沉淀需要充足的營養(yǎng)物，故得不到好的水質(zhì)第一節(jié)細(xì)菌的生長及其特性5.1.4細(xì)菌的生長曲線與廢水的生物處理22處于穩(wěn)定期污泥雖然生長速度有所下降，但有一定的代謝活性，絮凝沉降性能好。

故傳統(tǒng)的活性污泥法常運行在這個范圍

衰亡期只出現(xiàn)在某些特殊的水處理場合

如延時曝氣及污泥消化第一節(jié)細(xì)菌的生長及其特性23此法通常用來測定樣品中所含細(xì)菌、孢子、酵母菌等單細(xì)胞微生物的數(shù)量。計數(shù)法又分為直接計數(shù)和間接計數(shù)兩類。1、計數(shù)法5.1.5微生物生長量的測定方法25這類方法是利用特定的細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。此法的缺點不能區(qū)分死菌與活菌﹡

直接計數(shù)每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)

＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×l000×稀釋倍數(shù)1、計數(shù)法26此法又稱活菌計數(shù)法，其原理是每個活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落﹡間接計數(shù)每毫升原菌液活菌數(shù)＝同一稀釋度三個以上重復(fù)平皿菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)1、計數(shù)法2930﹡例:稀釋度10-6/ml,形成150個菌落,即1.5x108/ml細(xì)胞凝聚不能有效地分散平板計數(shù)：﹡稀釋樣品,涂于平板表面,通過計算菌落數(shù)即可知道樣品中活菌數(shù).﹡實驗要求稀釋度:30-300個菌落/皿﹡平板計數(shù)得到結(jié)果稱為菌落形成單位CFU(colonyformingunit)﹡下列因素導(dǎo)致計數(shù)偏低不能保證每個菌落來源于一個細(xì)胞31?然后再把膜放到具有培養(yǎng)液的墊上或培養(yǎng)基上濾膜培養(yǎng)：?膜過濾,截流細(xì)菌?培養(yǎng)一定時間計算菌落32實驗過程0.5um33濾膜培養(yǎng)應(yīng)用特定的培養(yǎng)基,可得到選擇的微生物糞便大腸桿菌培養(yǎng)基麥芽汁瓊脂長出酵母和霉菌遠(yuǎn)藤氏瓊脂普通培養(yǎng)基34﹡

DNA含量

此法的原理是根據(jù)每個細(xì)胞有一定的重量而設(shè)計的。它可以用于單細(xì)胞、多細(xì)胞以及絲狀體微生物生長的測定﹡微生物濕重﹡微生物干重﹡蛋白質(zhì)總量2、重量法35蛋白質(zhì)總量＝含氮量×6.25蛋白質(zhì)總量細(xì)胞總量＝蛋白質(zhì)總量÷(50%～80%(或65%))≈蛋白質(zhì)總量×1.54DNA含量

核酸DNA是微生物的重要遺傳物質(zhì)，每個細(xì)菌的DNA含量相當(dāng)恒定，平均為8.4×10-5ng.

36§5.2

微生物的生存因子◆

溫度對微生物生長的影響：酶的活性；細(xì)胞膜的流動性；物質(zhì)的溶解度◆微生物對溫度變化很敏感◆高過極限導(dǎo)致死亡：酶、運輸載體被破壞，膜崩解；低溫：功能受到影響，但化學(xué)組分和結(jié)構(gòu)不一定全受到影響5.2.1溫度37◆微生物有各自的最低、最適和最高生長溫度范圍◆

據(jù)微生物對溫度的生長需求，將微生物分四大類，嗜冷菌、嗜中溫菌、嗜熱菌和嗜超熱菌5.2.1溫度基本溫度

cardinaltemperature：最低溫度最適溫度最高溫度38

一種生活在蚊子消化道內(nèi)的原生動物，22-27C在簡單培養(yǎng)基中就可以生長,但在33-34C下,必須向培養(yǎng)基中加金屬、氨基酸、維生素才能生長。一種微生物三個基本溫度并非不變，依賴于其他因素：5.2.1溫度39溫度對生長速度影響最適溫度靠近最高溫度,而非最低溫度40微生物生長溫度范圍舉例微生物

最低溫度

最適溫度

最高溫度嗜冷芽孢桿菌-1023-2428-30

大腸桿菌103744嗜酸熱硫化葉菌608085卓越聚球藍(lán)細(xì)菌707984假絲酵母04-1515釀酒酵母1-32840犁型四膜蟲6-720-2533

41五種類型微生物生長溫度和最適溫度42嗜冷菌

psychrophile﹡來源：海洋近年來在南極洲發(fā)現(xiàn)古生菌產(chǎn)甲烷菌基本特征：﹡

0oC可生長﹡最適生長溫度等于、低于15C﹡最高生長溫度20C﹡細(xì)胞膜含有大量的不飽和脂肪酸43兼性嗜冷菌

pschrotroph﹡

0-7C生長﹡最適生長溫度20-30C﹡最高生長溫度35C﹡污染冷凍食品基本特征：44嗜溫菌

mesophile﹡最低生長溫度15-20C生長﹡最適生長溫度20-45C﹡最高生長溫度約45C基本特征：大多數(shù)微生物屬于這個范圍，人類致病菌都是嗜溫菌，宿主環(huán)境37C45嗜熱菌

thermophile具有高溫下發(fā)揮功能的熱穩(wěn)定酶和蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，細(xì)胞膜脂類物質(zhì)飽和度高（相比嗜溫菌）基本特征：﹡最低生長溫度約45C生長﹡最適生長溫度55-65C﹡最高生長溫度70C﹡堆肥、自我升溫的干草堆、熱水管道、溫泉等處生長46超嗜熱菌

hyperthermophile﹡低于55C通常不能生長﹡少數(shù)能在90C以上溫度生長；﹡80-113C下生長的原始生物成為超嗜熱菌基本特征：47100C以上溫度條件下的微生物有證據(jù)表明，113C下生長繁殖；很可能在更高的溫度下生長繁殖；265p/460C海水不沸騰超嗜熱菌研究科學(xué)和應(yīng)用價值極大48細(xì)菌：中性或偏堿性pH6.5-7.5放線菌：中性偏堿性pH7.0-8.0酵母菌霉菌：酸性pH5.0-6.0污水凈化處理：瀑氣池pH

6.5—8.5有機(jī)固體廢物：

pH

5—8

嗜酸菌acidophilepH0-5.5嗜中性菌neutrophilepH5.5-8.0嗜堿菌alkalophilepH8.5-11.5每種微生物都有其生長pH范圍和最適pH5.2.2pH49一般好氧微生物：0.3—0.4伏，〉0.1伏兼性厭氧：〉0.1伏，好氧；〈0.1伏，厭氧專性厭氧：-0.2—-0.25伏，產(chǎn)甲烷菌：-0.3—-0.4伏影響因素：氧分壓環(huán)境中的pH可用一些還原劑控制5.2.3氧化還原電位501專性好氧微生物:氧分壓為0.2個大氣壓2微量好氧微生物:氧分壓為0.003-0.2個大氣壓3耐氧厭氧微生物：4兼性厭氧微生物：5厭氧微生物：氧分壓小于0.005個大氣壓5.2.4溶解氧5.2.5太陽輻射5.2.6水的活度與滲透壓5.2.7表面張力51§5.3其它不利因素對微生物影響（2）電離輻射：能使被照射的物質(zhì)產(chǎn)生電離作用1紫外輻射和電離輻射（1）紫外輻射●

以260nm左右紫外線的殺菌力最強(qiáng)●

殺菌機(jī)理是作用核酸●

穿透力差●

光復(fù)活現(xiàn)象輻射機(jī)理引起水分子的分解5.3.1物理因素52

極端高度：殺死微生物極端低溫：抑制微生物生長應(yīng)用：高溫殺菌2超聲波：頻率大于20,000赫茲，人耳聽不見●具有強(qiáng)烈的生物學(xué)作用，幾乎所有的細(xì)菌都能被超聲波破壞●

殺菌機(jī)理●應(yīng)用3極端溫度:超高溫、超低溫,主指超高溫的影響4干燥531重金屬2極端pH3若干有機(jī)物

醇、醛和表面活性劑4抗生素對微生物的影響5.3.2化學(xué)因素對微生物的影響54微生物的分離和純培養(yǎng)(供實驗課)無菌技術(shù)用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)單細(xì)胞(單孢子)分離選擇培養(yǎng)分離二元培養(yǎng)物微生物的保藏技術(shù)

55無菌技術(shù)

微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且無處不在。因此，在微生物的研究及應(yīng)用中，不僅需要通過分離純化技術(shù)從混雜的天然微生物群中分離出特定的微生物，而且還必須隨時注意保持微生物純培養(yǎng)物的“純潔”，防止其他微生物的混入。在分離、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純培養(yǎng)物時防止其被其他微生物污染的技術(shù)被稱為無菌技術(shù)(aseptictechnique)，它是保證微生物學(xué)研究正常進(jìn)行的關(guān)鍵。

56微生物培養(yǎng)的常用器具及其滅菌①試管、玻璃燒瓶、平皿(culturedish，petridish)等是最為常用的培養(yǎng)微生物的器具，在使用前必須先行滅菌，使容器中不含任何生物。②培養(yǎng)微生物的營養(yǎng)物質(zhì)[稱為培養(yǎng)基(culturemedium)]可以加到器皿中后一起滅菌，也可在單獨滅菌后加到無菌的器具中。57③最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。④有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌58⑤為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。⑥平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。59接種操作用接種環(huán)或接種針分離微生物，或在無菌條件下把微生物由一個培養(yǎng)器皿轉(zhuǎn)接到另一個培養(yǎng)容器進(jìn)行培養(yǎng)，是微生物學(xué)研究中最常用的基本操作。由于打開器皿就可能引起器皿內(nèi)部被環(huán)境中的其他微生物污染，因此微生物實驗的所有操作均應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行，其要點是在火焰附近進(jìn)行熟練的無菌操作，或在無菌箱或操作室內(nèi)無菌的環(huán)境下進(jìn)行操作60用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)

不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征，可以成為對該微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)。大多數(shù)細(xì)菌、酵母菌，以及許多真菌和單細(xì)胞藻類能在固體培養(yǎng)基上形成孤立的菌落，采用適宜的平板分離法很容易得到純培養(yǎng)61所謂平板，即培養(yǎng)平板(cultureplate)的簡稱，它是指熔化的固體培養(yǎng)基倒入無菌平皿，冷卻凝固后，盛有固體培養(yǎng)基的平皿。固體培養(yǎng)方法可將單個微生物分離和固定在固體培養(yǎng)基表面或里面。62固體培養(yǎng)基(用瓊脂或其他凝膠物質(zhì)固化的培養(yǎng)基)，可使每個孤立的活微生物體生長、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分離、培養(yǎng)微生物的固體培養(yǎng)基是瓊脂固體培養(yǎng)基平板。Koch建立的平板分離微生物純培養(yǎng)的技術(shù)簡便易行，100多年來一直是各種菌種分離的最常用手段。63稀釋倒平板法(pourplatemethod)

涂布平板法(spreadplatemethod)

平板劃線分離法(streakplatemethod)稀釋搖管法(dilutionshakeculturemethod)64稀釋倒平板法

待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋，取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時間，可能出現(xiàn)在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。隨后挑取該單個菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。65涂布平板法在微生物學(xué)研究中更常用的純種分離方法是涂布平板法。其做法是先將已熔化的培養(yǎng)基倒人無菌平皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將一定量的某一稀釋度的樣品懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個菌落。

666768平板劃線分離法

用接種環(huán)以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。6970717273稀釋搖管法

對于那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養(yǎng)的分離則可采用稀釋搖管培養(yǎng)法進(jìn)行。將一系列盛無菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱使瓊脂熔化后，冷卻并保持在50℃左右，用這些試管進(jìn)行梯度稀釋待分離材料，試管均勻，冷凝，傾注一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養(yǎng)基和空氣隔開。培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱的中間，挑取和移植單菌落。7475用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)

接種物在液體培養(yǎng)基中依序稀釋，以達(dá)高度稀釋的效果，使一支試管中分配不到一個微生物。如果稀釋后的多數(shù)試管中沒有微生物生長，則有微生物生長的試管得到的培養(yǎng)物可能就是純培養(yǎng)物。采用稀釋法進(jìn)行液體分離，必須在同一個稀釋度的許多平行試管中，大多數(shù)(一般應(yīng)超過95%)表現(xiàn)為不生長。76單細(xì)胞(單孢子)分離

采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細(xì)胞或單個個體進(jìn)行培養(yǎng)以獲得純培養(yǎng)，稱為單細(xì)胞(單孢子)分離法。單細(xì)胞分離法的難度與細(xì)胞或個體的大小成反比，較大的微生物如藻類、原生動物較容易，個體很小的細(xì)菌則較難。單細(xì)胞分離法對操作技術(shù)有比較高的要求，多限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究中采用。

77選擇培養(yǎng)分離如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設(shè)計一套特定環(huán)境使之特別適合這種微生物的生長，因而能夠從自然界混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養(yǎng)出來，即使在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數(shù)。這種通過選擇培養(yǎng)進(jìn)行微生物純培養(yǎng)分離的技術(shù)稱為選擇培養(yǎng)分離。可利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離或富集培養(yǎng)。

78利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行直接分離主要根據(jù)待分離微生物的特點選擇不同的培養(yǎng)條件,得到純培養(yǎng)物。富集培養(yǎng)主要是指利用不同微生物間生命活動特點的不同，制定特定的環(huán)境條件，使僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。富集條件可據(jù)分離的微生物的特點從物理、化學(xué)、生物及綜合多個方面進(jìn)行選擇，如溫度、pH、紫外線、高壓、光照、氧氣、營養(yǎng)等等許多方面。

79二元培養(yǎng)物

只有一種微生物的培養(yǎng)物稱為純培養(yǎng)物，含有二種以上微生物的培養(yǎng)物稱為混合培養(yǎng)物，而如果培養(yǎng)物中只含有二種微生物，而且是有意識地保持二者之間的特定關(guān)系的培養(yǎng)物稱為二元培養(yǎng)物。例如二元培養(yǎng)物是保存病毒的最有效途徑。對于這些生物，二元培養(yǎng)物是在實驗室控制條件下可能達(dá)到的最接近于純培養(yǎng)的培養(yǎng)方法。80微生物的保藏技術(shù)

傳代培養(yǎng)保藏冷凍保藏干燥保藏法 81通過分離純化得到的微生物純培養(yǎng)物，必須通過各種保藏技術(shù)使其在一定時間內(nèi)不死亡，不會被其他微生物污染，不會因發(fā)生變異而丟失重要的生物學(xué)性狀，否則就無法真正保證微生物研究和應(yīng)用工作的順利進(jìn)行。菌種或培養(yǎng)物保藏是一項最重要的微生物學(xué)基礎(chǔ)工作，微生物菌種是珍貴的自然資源，具有重要意義。82菌種保藏就是根據(jù)菌種特性及保藏目的的不同，給微生物菌株以特定的條件，使其存活而得以延續(xù)。菌種保藏機(jī)構(gòu)：中國微生物菌種保藏委員會(CCCCM)，中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，美國典型菌種保藏中心(ATCC)，世界菌種保藏聯(lián)合會(WFGC)。83傳代培養(yǎng)保藏常用的有瓊脂斜面、半固體瓊脂柱及液體培養(yǎng)等。選擇使用適宜的培養(yǎng)基，并在規(guī)定的時間內(nèi)進(jìn)行移