標準解讀

《GB/T 31805-2015 豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法》是一項國家標準，規定了豇豆重花葉病毒（Cowpea severe mosaic virus, CSMV）的檢疫與鑒定方法。該標準適用于進出口及國內調運過程中豇豆及其種子、種苗等植物材料中CSMV的檢測與鑒定。

標準內容主要包括以下幾個方面：

  1. 范圍：明確了本標準適用的對象和領域。
  2. 術語和定義：對標準中使用到的專業術語進行了定義，確保理解的一致性。
  3. 原理：介紹了用于識別CSMV的方法背后的科學依據，包括直接或間接地通過觀察癥狀、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、RT-PCR等技術手段來確認病毒的存在。
  4. 樣品采集：詳細描述了如何正確收集疑似感染CSMV的樣本，包括采樣時間、部位選擇等關鍵點。
  5. 實驗室檢測：
    • 外觀檢查：基于肉眼觀察植株是否有典型病征如葉片變形、黃化斑塊等進行初步判斷。
    • 血清學測試：利用特異性抗體對抗原進行捕捉，通過顏色變化等信號指示反應結果，常用方法有DAS-ELISA（雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗）。
    • 分子生物學檢測：采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)，通過對特定基因片段的擴增來實現對目標病毒核酸序列的定性和定量分析。
  6. 結果判定：根據上述各項檢測所得數據，結合臨床表現給出最終診斷意見。
  7. 報告編寫：要求記錄所有相關實驗信息，并按照一定格式撰寫正式報告。

此標準為從事農業科學研究人員、植物檢疫工作者以及相關部門提供了規范化的操作指南和技術支持，在防控豇豆重花葉病害傳播方面發揮著重要作用。


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....

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  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2015-07-03 頒布
  • 2015-11-27 實施
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文檔簡介

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T31805—2015

豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofCowpeaseveremosaicvirus

2015-07-03發布2015-11-27實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T31805—2015

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利本文件的發布機構不承擔識別這些專利的責任

。。

本標準由全國植物檢疫標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位中華人民共和國廈門出入境檢驗檢疫局中華人民共和國江蘇出入境檢驗檢

:、

疫局

。

本標準主要起草人陳青李彬方志鵬黃峰廖富榮陳紅運林石明

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31805—2015

豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法

1范圍

本標準規定了豇豆重花葉病毒檢疫鑒定的血清學生物學和分子檢測方法

、。

本標準適用于可能攜帶有豇豆重花葉病毒的植物繁殖材料種子植株和產品的檢疫鑒定

(、)。

2儀器設備和主要試劑

21儀器設備

.

儀定量儀滅菌鍋制冰機超低溫冰箱常規冰箱旋渦震蕩器電泳儀凝膠成像系

PCR、PCR、、、、、、、

統微量研磨儀酶標儀洗板機微量天平感量水平電泳槽高速冷凍臺式離心機水浴槽

、、、、(:0.001g)、、、、

計移液器孔酶標板研缽等防蟲溫室

pH、(1000μL、200μL、20μL、2μL)、96、;。

22主要試劑

.

除另有規定外所有試劑均為分析純緩沖液

,。PCR、dNTPs(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、DNA

聚合酶引物和探針瓊脂酶聯檢測試劑見附錄

、、,B。

3檢測樣品的制備

31種子

.

挑取畸形種子播于滅菌土中待長出片片葉后將表現癥狀的植株編號未表現癥狀的植株

,3~4,,

分組株為組并編號采集的葉片分成份根據需要分別用于酶聯測定和分子檢測

(101)。2,。

32植株

.

有癥狀如葉片畸形花葉斑駁等的植株編號單獨檢測沒有癥狀的分組并編號檢測分組方法

(、、)。,

和檢測方法同雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定

3.1。。

4檢測與鑒定

41雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定

.

把制備的樣品上清液加入已包被抗體的酶聯板中進行每個樣品平行加到

CPSMV,DAS-ELISA。

兩個孔中設陰性對照和陽性對照健康的植物組織作陰性對照感染了的植物組織作陽性對

。[,CPSMV

照其中陰性對照種類和材料如種子或葉片應盡量與檢測樣品一致樣品提取緩沖液作空白對照不

,()],,

同的檢測試劑或試劑盒按說明操作具體操作見附錄

。B。

42RT-PCR

.

分別提取樣品和對照的總反轉錄合成后進行擴增健康的植物組織作陰性對

RNA,cDNA,PCR。

照感染的植物組織作陽性對照

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