下一代測序技術的內容概覽高通量DNA測序技術（下一代測序技術NGS）在過去的15年里已經有了快速的發展，新的方法也在繼續實現商業化。隨著技術的發展，對基礎和應用科學中的相關應用范圍也在增加。這篇綜述的目的是提供一個對NGS方法論的概述以及相關的應用。每個簡要的討論之后都跟有制造商和基于網頁的可視化。關鍵詞搜索，例如用Google，可能也會提供有幫助的網頁鏈接和信息。方法的建立DNA測序方法的建立是Sanger雙脫氧合成法以及Maxam-Gilbert的化學裂解法。Maxam-Gilbert化學裂解法是基于DNA的化學修飾然后在鄰近修飾過的核苷酸附件的位點進一步裂解DNA骨架。Sanger測序采用了特殊的鏈終止核苷酸（雙脫氧核苷酸）它缺少一個3‘0H連接位點。因此，不能夠在DNA聚合酶的作用下合成磷酸二酯鍵，結果是正在伸長的DNA鏈在該位置終止了。雙脫氧核苷酸是具有放射性的或者具有熒光標記的，便于分別在測序凝膠或者自動測序儀器上識別。盡管原始的Maxam-Gilbert方法的化學特性已經被進行修飾來幫助消除有毒性的反應物，但是Sanger測序通過合成雙脫氧核苷酸的方法已經變成了一種測序的標準。Sanger測序法在1977年被創建，并且在UNIT7.4中被詳盡的描述了。盡管通過當前NGS標準測序相對較慢，但是在Sanger末端終止法的改進，自動化，以及商業化這些方面已經使它能夠在當前的多種應用范圍中成為最適當的測序方法。特別的，超薄的凝膠板電泳已經被多通道毛細血管電泳代替了，逐漸還出現了自動填充可循環的毛細血管以及電動樣品加樣這對提高Sanger測序過程的速度與便利性有很大的貢獻。在Sanger測序中已經出現的最顯著的創新點有：（1）熒光染色的發展，（2）采用末端循環測序降低所要求的輸入DNA的質量并且用耐熱聚合酶高效準確的將終止物染色與正在伸長的DNA鏈結合起來，（3）解釋和分析序列軟件的發展。在自動化的Sanger測序項目中的主導者是AppliedBiosystem（AB）。當前商業化的AB測序儀全部使用的是熒光染色和毛細管電泳（CE）。用于DNA測序或者片段分析協議的機器的容量在發生改變，4組毛細血管（SeqStudioGeneticAnalyzer），8到24組毛細管（3500SeriesGeneticAnalyzer），以及48到96組（3700SeriesGeneticAnalyzer）。所以的這些測序儀產生了600-1000個堿基的正確的序列。盡管多年以來，不同種類基于Sanger測序的測序儀器已經被引進，包括來自Licor，Amersham，MilliGen，PerkinElmer和Dupont，所以的這些除了AB儀器都已經被停產了。Sanger測序技術在一些應用中任然非常有用，而這些應用中高通量測序是不被要求的。一些DNA測序的核心設備和以測序來獲利的公司提供了Sanger測序服務。對于個體測序反應對公共的用法是在一個特殊的模板上用特殊的DNA引物，例如去檢驗質粒的構建和PCR產物。既然來自大量的商家的用于DNA純化的分子生物試劑盒和試劑以及相對較高質量的合成產物都是可用的，這就使得甚至是相對較大的Sanger測序項目都能夠在合理的時間框架和成本范圍內完成。除了檢測DNA的序列AB儀器上的毛細管電泳（CE）還被應用到測量酶對基于熒光標記的DNA底物的選擇活性，列如，可以分析DNA片段的大小。毛細管電泳同樣能夠用來同時分析一個單反應中的多個底物，產物或者反應介質，通過不同的熒光標記。CE被用在DNA聚合酶和DNA連接酶動力學，以及包括岡崎片段和核糖核苷酸的刪除修復的偶聯酶通路的研究中。ABCE在在糖生物學中也是很有用的，可以用來分析熒光標記的多糖。第二代測序方法術語“下一代”隱含著DNA測序技術發展的下一步，同時也表明將會產生一個以下一代命名的新技術。我們更喜歡用下一代，第三代等這些術語，因為我們意識到上述的自動化的AB測序技術才是繼采用放射性和凝膠板的Sanger測序技術之后的第二代測序技術。假定這個命名的保守性，對大基因組的高通量測序的低成本要求激發了一些第二代或者下一代測序技術的發展，這些技術除了采用自動化的Sanger測序之外，還用了大量的創新方法。由于自動化Sanger測序技術的商業化的實現，一些技術不再被使用（例如，Solid,Polinator,Helicos）。這些第二代測序技術和相關的方法將在下面進行描述。第二代測序技術能夠被劃分為兩個主要的類別，通過雜交測序以及通過合成測序（SBS）。SBS方法是Sanger測序的進一步發展，沒有雙脫氧末端，結合了重復循環合成，成像以及不斷將核苷酸加入到伸長鏈中的方法。第一映像，這些新的方法可能會非常昂貴，但是這些反應的同時進行都是以納升、微升或者公升的體積在很小的空間內進行的，因此花在每個堿基測序上的成本是微不足道的。持續的精煉和縮小將進一步降低成本。關于成本要注意的一點是：測序完成的成本是多樣化的，一些可能會忽視常規估計的每個“每個堿基的成本”。試劑成本通常取決于規定的容量，并且通常是與商家協商好的。例如，核心機構和測序中心會規定大量的測序會獲得折扣價。成本通常不會包含勞動力和最后過程的生物信息分析。然而，一千美元就能測人類基因組這個目標或者降低每個堿基的成本是測序技術和研究機構要面對的黃金標準。通過雜交測序這個方法首先在1980年被發展起來，將已知序列的DNA的寡核昔酸放在過濾器上，然后與需要測序的DNA的標記片段進行雜交。通過重復雜交然后洗掉不是我們需要的未雜交的DNA,這個步驟可能是要確定雜交標記的片段是否與過濾膜上的DNA探針序列相匹配。基于來自于探針雜交點的重疊信息，因此它可以用來構建更大的連續序列的信息。通過雜交進行的測序被很大程度上投入到技術中，而這些技術主要依靠于采用特殊的探針去審核序列例如在醫療診斷方面的應用一在特殊的基因中識別與疾病相關的SNP（單核昔酸多樣性）或者是識別染色體畸變（染色體重排，缺失，加倍，拷貝數變異（CNV））。通過合成進行的測序（SBS）SBS已經采取了一些不同的方法。第二代測序的方法通常采用一個固體的支持物來容納微管道或者槽穴，在這些微管道（槽穴）中進行測序反應的發生通常，大部分新的SBS方法不會用雙脫氧末端終止法，盡管在一些技術中也用到了可逆的終止末端，它能夠允許在對加入的核苷酸進行成像的時候，核苷酸并入反應能夠正常進行，然后將在標記核苷酸上合成的封鎖基團移除，從而允許下一個堿基能夠加入到序列中當前的SBS方法不同于原始的Sanger測序的方面主要是它們依賴于大量更短的序列（當前的片段大約是300到500bp）進一步，他們相比較于Sange測序來說具有本質上的gao錯誤率，并且，在識別一致序列的基礎上，它們依賴于較高序列覆蓋達到百萬或者百億的短的DNA測序片段（大規模平行的測序）作為獲得正確測序的方式然而，對于一些技術來說，測序背景錯誤的發生不是總能夠通過增加片段的數量來更正的。例如，當DNA包含同一個堿基的連續重復（如AAAAAAAA）時發生的均聚物序列。在這種情況下，測序平臺在正確確認一致堿基的數目的時候就受到了限制每個平臺都會產生它自己獨特的一系列潛在的測序背景錯誤，用戶們需要意識到這些局限性同時采用一些配備了不同技術的平臺通常被用來避免這些問題長序列片段到短序列的轉變的技術現在又朝著產生長原始序列的技術發展，在保持這些技術的大規模平行測序的同時這正在第三代測序技術中發生，尤其是第四代測序技術，將在下面進行描述這一部分是由于每個反應的成本，也有一部原因是我們想要獲得盡可能長的原始序列來避免測序背景錯誤，如重復的DNA原件。大部分的SBS技術采用的方法是將要進行測序的單個DNA分子分散在上百萬個分離的小井或者槽穴中，或者將其固定在固體支持物的特定位置上。DNA分子通過PCR擴增或者通過改良的“滾圈”放大的方法進行擴增，然后用標記過的核苷酸進行合成反應，或者進行基于一個特定核苷酸加入的化學反應，這些核苷酸都是可以進行成像或者能被檢測的。大量的創新技術已經被創造出來使得上百萬的DNA測序片段只在一個簡單的測序過程中就行產生。測序的過程根據通量可能會持續數小時或者幾天。454焦磷酸測序盡管已經被淘汰了，我們依然將這個技術當做第一種出現在市場上并且采用新技術的二代測序的方法，名義上，我們叫做焦磷酸檢測，它是一種核苷酸插入的副產物，用來檢測特定的堿基是否被插入到正在伸長的DNA鏈中。單獨的DNA片段，長度為400到700bp,被固定在特定的轉接器上，然后在在一個獨立的乳狀液滴中進行PCR反應。（emPCR）。珠子上的DNA序列與在轉換器上的DNA序列互補，能夠允許DNA片段直接結合到珠子上，理想的情況下，一個珠子上只有一個片段。DNA合成之后緊接著進行DNA合成反應的化學檢測，化學反應發生在以微升計量的小槽穴中，焦磷酸被釋放之后就可以在里面檢測到。通過不斷的用包含有四種核苷酸中的一種的測序試劑流過小槽穴，當正確的核苷酸被插入到合成的鏈中時，通過光發生反應就可以檢測到焦磷酸的釋放。光的強度同樣提供了包含測序過程中出現的均聚物的信息，盡管在遇到大量同一種核苷酸測序會有一些困難。焦磷酸測序是在瑞典由焦磷酸測序AB發展起來的，并且隨后被Qiagen獲得，Qiagen在454生命科學上獲得許可證，而在此之前它是屬于Roche的。454測序儀在2013年停產了，盡管來自于一些供應商的實際還是可以繼續使用的。454測序儀通常被用來進行基因組測序和宏基因組樣本測序，因為它能夠獲得較長的測序片段（600到800bp）并且通量相對較高（2500萬堿基，四小時一個循環，正確率達99%或者更高），促進基因組的組裝。IonTorrent（離子激流測序儀）離子激流測序儀在一個半導體芯片上直接將核苷酸序列轉變為數字信息。在一個DNA合成反應中，在一正在伸長的DNA鏈上，當一個正確的核苷酸被插入到與她互補的堿基的對面時，一個氫離子就會被釋放。這改變了溶液的pH值，而pH值的改變可以被離子感受器記錄為電壓的改變，這更像是pH的測量。如果沒有核苷酸被插入，就不會有電壓峰值產生。使只含有四種核苷酸中的一種的測序試劑持續地流過并小槽穴，然后在洗掉，當合適的核苷酸被插入的時候，電壓就會發生改變。當連個相鄰的核苷酸插入同樣的核苷酸的時候，兩個氫離子會被同時釋放，電壓的改變就加倍。因此，一個種單核苷酸鏈的測序也可以被確定。然而，同一核苷酸組成的較大的均聚物鏈有時是很難被識別到的。離子激流測序反應發生在上百萬個小槽穴里，上面覆蓋有一個包含百萬像素的半導體芯片，它能將化學信號轉變為序列信息。為了使程序開始進行，DNA被打斷成200到1500bp的片段然后結合在介面卡上。通過珠子和介面卡上的序列互補，DNA片段被附著在珠子上，然后通過emPCR進行擴增。這個過程能夠使上百萬個珠子每個都有一個DNA片段的多個復制片段。然后珠子通過包含每個小槽穴只能容納一個珠子的芯片，當當測序試劑流過小槽穴時，如果正確的核苷酸被插入，就會釋放出一個氫離子，信號隨之被記錄下來。這個系統的一個主要優勢是不需要照相機，光源或者掃描器；核苷酸插入之后可以立刻被轉變為能夠進行直接記錄的電壓，極大地加快了測序的進程。離子激流系統由ThermoFisher出售，并且這個平臺的很多版本都是可用的，包括PGM系統，。。。。。，每個的通量特性都不同。一個自動化的文庫和模板準備系統同樣是可用的。很多應用都是被支持的，包括靶向和體外DNA和RNA測序，轉錄組測序，微生物測序，拷貝數量變異檢測，小RNA和MiRNA測序以及CHIp-seq（染色體免疫共沉淀測序）。Illumina技術到目前為止，在二代測序領域中占主導地位的是Illumina,ta采用的技術首先由Solexa和LynxTherape開發出來。Illumina測序是基于橋式擴增技術發展起來的，橋式擴增技術就是將DNA分子的每個末端固定在介質面上，然后使擴增反應在包含有與連接配適器互補的寡核苷酸序列的固體支持物上進行（玻璃支持物）。劃片上的寡核苷酸之間嵌入了這樣的DNA,然后接下來進行數輪的擴增，每個寡核苷酸片段形成大約1000個克隆的克隆簇。每個玻璃載片能夠承受上百萬個平行的簇反應。在合成反應的過程中，所以修飾過的核苷酸都與四種核苷酸中的每一個一致，每個都帶有一個不同的熒光標記，這些被修飾過的核苷酸一旦被插入到合成鏈中，就能把檢測到。這種核苷酸同樣也能作為每個合成反應的終止物，但是在檢測完之后能被解除終止進而進行下一輪的反應。反應要進行300次或者更多的循環。使用熒光檢測增加了檢測的速率，因為可以直接進行成像，與需要照相機進行成像的過程完全相反。Illumina測序支持不同的測序協議，包括基因組測序，外顯子組測序和靶向測序，宏基因組測序，染色體共免疫沉淀測序，以及甲基化組檢測。不同的Illumina測序機制提供的通量水平是不同的，包括。。。。。。。。。。每種儀器的詳細介紹以及對特殊測序項目的容量可以從網站上尋找。Illumina測序引起的一個問題是，在所有克隆簇之間的合成反應缺乏同步性，使得不能產生正確的一致序列，降低測序的循環次數可以克服這個問題。我們同樣要注意不要在支持物上產生過多的克隆簇，因為我們需要將正確數量的DNA模板正確排列。因為產生的數據量很大，要分析從測序過程中產生的測序錯誤是要能夠被檢測的，以幫助我們正確區分真正的序列突變體和測序方案導致的人為錯誤。第三代測序（大段分子片段測序）與第二代測序方法不同，第三代測序方法的目的是為長的DNA分子進行測序。當前在這個行業中商業化的技術先驅是PacificBioscience，它已經將兩個測序系統實現商業化，即原始的RSII模型和最近的Sequel。PacBio測序同樣被當成單分子實時測序，它使很長的DNA分子片段都能夠被測序，長度為30到50kb，或者更長。SMRT（單分子實時測序）方法包括建造一個設計的DNA聚合酶，能夠與被測序的DNA結合，放置在小槽穴的底部（零模導波，或者ZMW,在一個SMRT的流通池里）。一個ZWM是一個小室，它能夠指引光進入到一個相對于光照波長來說范圍很小的區域。由于所用光的ZMW設計和波長，成像僅僅會發生在ZMW的底部，在那里DNA聚合酶結合到DNA上，然后插入每一個堿基到正在伸長的鏈上。四種核苷酸都被標記上不同的連接由磷酸基團的熒光標記，以便用來進行不同的檢測。如果一個核苷酸被插入到正在合成的鏈中，當正確的熒光標記的核苷酸被結合時成像以毫秒尺度發生。核苷酸嵌入完成之后，帶有磷酸基團的熒光部分被釋放，然后從ZMW的底部流走，并再也不能檢測到。下一個核苷酸可以被繼續加入。成像與核苷酸嵌入的比例是同時的，這樣每個堿基就能被識別，當它被嵌入到正在合成的核苷酸鏈中時。這同時發生在上百萬公式的ZMW中，展示在SMRT細胞中的一個單芯片上。在PacBio過程中模板準備是獨一無二的，因為它涉及到一個SMRT的所以產物，一個環狀的雙鏈DNA分子帶有一個已知的配適序列能夠與引物互補，用來在模板上起始DNA的合成。這使得聚合酶通過歷遍每個ZMW中的環狀分子，次通讀整個大的模板知道聚合酶停止，這樣能夠形成一致的序列（環狀一致序列CCS）。當配適序列連接到插入的每一側帶有每個DNA合成起始位點的時候，測序酶能夠在另一條DNA鏈上，從5‘端到3‘端歷遍環狀的SMRTbell，從dsSMRTbell的兩條鏈中都能獲得互補信息。PacBio實時測序的一個重要優勢就是成像和檢測過程就是在DNA合成過程中能檢測到的每個核苷酸添加的速率，稱為插入空格持續時間（PD）。大量（不是全部）帶有堿基修飾的核苷酸，列如一些腺嘌呤和胞嘧啶的甲基化，改變了IPD因此能夠被當成修飾過的堿基識別。大量不同的修飾都能夠被檢測并且根據后續的研究進行分類。在這一點上，不是所有的修飾都能夠被識別到，包括m5C，因為它造成的IPD的修飾很小。然而，通過化學識別也能夠實現這類核苷酸的檢測。PacBioSMRT測序本身就自帶有較高的錯誤率，但是通常是可以避免的，由于在每個SMRTbell模板的ZMW中獲得的片段通量的深度。因為錯誤是隨機的而不是系統的，因此多次對模板進行測序并且與將個體序列片段進行比對能夠獲得高精確度的CCS片段。進一步的,多個模板的相似序列提供了額外的一致性。PacBioSMRT測序比之前的方法多了一些優點。它除了能夠提供大的測序片段以便DNA組裝之外，還能夠快速的識別甲基化位點以便進行后續的研究。列如，采用PacBio技術能夠相對簡單的組裝一個完整的細菌基因組序列，僅僅用一些SMRT小室，而且還能夠確定里面的甲基化模式。通常，PacBio組裝是與其他技術聯合使用的，例如Illumina測序，以獲得更高的精確度。就通量而言，PacBioRSII用的是有150000個ZMW的芯片，當經最佳使用時，每個SMRT小室能夠產生多達350百萬堿基的序列。采用泊松分布能實現最優化，以至于每個小室中只有一個聚合酶結合在DNA分子上。最近的PacBio儀器，Sequel，有一百萬個ZMW并且能夠產生約365000個片段，平均長度為10――15kb。隨著化學和技術的不斷更新(例如磁力珠載體)，以及使用SAGEPippin來分離大的DNA片段，PacBio測序被設計提供更多更長以及更精確的測序片段。第四代尖端技術它可以使長DNA分子穿過小直徑的孔，并且測量不同的通量，當每個核苷酸通過一個連接的檢測器的時候。在理論上，超過100kb的DNA分子能夠穿過納米孔，并且有很多通道時，數十到數百Gb的序列能夠以相對較低的成本獲得。兩種類型的納米孔系統正在被發展用以DNA測序，即生物膜系統和固態感受器技術。生物納米孔測序主要依賴于使用跨膜蛋白嵌入到一個脂膜中，從而產生孔洞。兩個蛋白質被用來產生孔洞，而且已經被深入的研究過：a-溶血素和分枝桿菌陰莖垢孔蛋白A(MspA)。DNA從孔中穿過的速率由添加的馬達蛋白規定，例如一種高度前景的DNA聚合酶(phi29),在加入核苷酸之后，會使DNA不斷變化。其他配件蛋白，例如一個DNA解旋酶，核酸外切酶I,或者鏈接到DNA鏈上的寡核苷酸，使解旋和鏈接的DNA核苷酸通過納米孔已進行檢測。DNA能夠以成百上千個核苷酸的連續速率移動穿過小孔。固態感受器技術采用的是不同的材料或者金屬合金支持物，帶有納米級的小孔，使得DNA或者RNA能夠通過。以納米孔為基礎的DNA序列首先在20世紀90年代提出，然后由帶有一個便攜式MinION的ONT在最近實現商業化,，，，，，，，，，，，，，，這些測序儀用的蛋白質納米孔是在一一個耐電的高分子膜上，當每個核苷酸通過檢測器的時候，高分子膜的特性就會發生改變。長的雙鏈DNA分子首先被結合在一個前進的酶上，例如phi29聚合酶。當復合體通過納米孔的時候，一個DNA鏈進入納米孔以及通過孔的遷移率被DNA聚合酶的合成以及轉移牽制。前進的酶能夠使DNA持續并快速地輕松地穿過它。當一個核苷酸通過小孔，它就打斷了一個已經使用到納米孔的電流。每種核苷酸提供了一種特性的電子信號，能夠被記錄成一個電流干擾事件。記錄是實時的，并且當10kb的片段也是合理通過的,在理論上，100kb的DNA能夠通過納米孔并且被檢測到。一旦DNA離開一個納米孔，這個小洞對其他不同的DNA分子就是可用的。因為MinINO小巧便攜的尺寸，它有可能應用到許多領域中，這些應用對容量或者空間要求都是非常高的。當前的錯誤率相對較高，但是由于也使用到其他高通量測序方法，這可以被用大量要被測序的分子來糾正。納米孔技術已經被用到測序環境和宏基因組取樣中，它當前可以在太空站使用，并且已經被用來鑒定菌株。病毒基因組，環境監測以及單倍型監測已經可以通過MinION實現。內米孔技術同樣能夠用來識別堿基修飾，與PacBio技術一樣，能夠使后生事件被準確地識別出來。納米孔測序同樣提供了直接的DNA測序方法，以及不需要PCR的cDNA測序。因此，納米孔測序有潛力提供相對低成本的DNAheadRNA測序，環境監測以及基因組性分析。用于高通量測序和完成大興基因組計劃的輔助方法光學映像盡管最近高通量單分子長閱讀片段測序方法遙遙領先，但是，在基因組中，其他的方法也能用來完善或者證明不同DNA片段重疊群的順序。這些方法中最流行的是光學映射，使用基于序列的核苷酸位置沿長DNA分子分布的標記方法。這些方法為將已知的基因定位到基因組圖譜上提供了大量的支架。通過沿著DNA大分子（與限制性酶切位點圖譜的原理一樣）創造一個可見的物理圖譜，這是一個可以將DNA序列和物理定位連接起來的方法。這個方法首先由DavidC創造出來，但是其他的方法學同樣被用來創造光學圖譜。納米流體方法，是一種新的方法來使DNA分子中特定位點可視化并識別出DNA分子中的特定位點的方法，并且片段的生物信息學成像捕獲和分析已經在技術中逐漸得到提升。光學映像對于完善大的基因組項目（染色體組尺寸重疊簇）以及其他應用是非常有用的，例如基因組中的重排現象的識別。它同樣能被用來輔助基因組組裝，基因組結構對比，以及校正基因組組裝的錯誤。它也能被用來比較菌株差異性，例如在醫學微生物學中的應用。這個方法的一個主要優點是它避免了克隆或者PCR的手動過程，并且可以同時對一個單分子進行分析。然而，人工操作也可以被引入，因此復雜的片段可以被用來構建一個連續的圖譜。這個方法的優點超越了脈沖場凝膠電泳的行業標準，對于創造較大的DNA分子片段染色體圖譜。光學映像是非常節約時間的，并且除了提供片段的大小信息，還提供了路線圖位置能夠被用來構建一致的染色體圖譜。通常，光學映像由將基因組DNA剪切呈大小為100mb到1gb片段大小開始。關鍵是將這些大的DNA片段在特定的內置位點進行標記，這樣可以使得標記的分子能夠被成像并且與所提供的重疊圖譜在一條線上。一些方法能夠被用來標記特殊的基因組位置，包括用限制性單末端或者較少切點的限制性酶消化過的DNA位點，或在特定消化位點消化的一系列酶消化過的DNA位點。標記能夠在一個自由末端上進行，可以采用特殊染色的方法，或者采用單鏈裂解酶和高分子染色劑的插入來進行酶的填充反應。與DNA在特殊位點結合的酶同樣能夠被采用（例如DNA甲基轉移酶），在該位置，一個標記在結合之后能夠從酶轉移到DNA上。標記過的A+T或者C+G富集的DNA位點同樣能夠被使用。結果片段能夠被連接到玻璃載體的表面或者結合到細長的線性管子，采用合適的顯微鏡用來成像。一旦被固定在固體介質上，這個分子就被物理性的進行延長。然后它們能夠被按大小進行分類，然后對位點進行標記，成像，然后記錄，創造一個分子的光學圖譜：通過結合來自于多個DNA分子的成像，一個重疊的大的一致的光學圖譜能夠被制造出來，這個在之后可以用來當做固定其他物理材料，序列或者重疊片段的支架。在這個領域的商業領導者是生物納米基因組。。輔助技術DNA剪切所有DNA測序方法的關鍵步驟就是將DNA片段打斷呈特定的尺寸。一些剪切和擴增片段DNA的設備都可以用來分離不同尺寸的DNA，從而用以構建文庫。CovarisInc.ShearingC.I提供了一些聲學的剪切技術和耗材可以將DNA和RNA打斷成合適的片段大小，用以DNA和片段文庫的準備（150bp到5kb）并且同樣為染色體和RNA剪切提供了方案。為了將更大的片段分離，他們提供了G-TUBE，主要是致力于將DNA剪切成大片段，平均尺寸在6kb到20kb，這要求在室溫條件下進行。g-TUBE與一連串頂端的連續重疊片段一起發揮作用，最終DNA片段的尺寸大小是由加速度變化率和離心機的速率