2022/11/17李宏業(yè)136011192401分析方法驗證

主講人：李宏業(yè)歐美GMP認(rèn)證高級咨詢師北京宏匯萊科技有限公司總經(jīng)理天津大學(xué)制藥工程碩士班GMP課程專職講師國家食品藥品監(jiān)督管理局高級研修學(xué)院培訓(xùn)講師

重點(diǎn)議題法規(guī)要求驗證目的檢驗項目和驗證內(nèi)容分析方法確認(rèn)分析方法再驗證2022/11/17李宏業(yè)136011192402分析方法的法規(guī)要求第十二條質(zhì)量控制的基本要求：（四）檢驗方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗證或確認(rèn)；2022/11/17李宏業(yè)136011192403分析方法的法規(guī)要求（三）對不需要進(jìn)行驗證的檢驗方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對檢驗方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠；2022/11/17李宏業(yè)1360111924052022/11/176分析方法的法規(guī)要求藥典或官方標(biāo)準(zhǔn)收載的方法－不需完整驗證－需驗證方法的適用性（確認(rèn)）自研方法或?qū)俜綐?biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了大幅調(diào)整－需完整驗證驗證的目的證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測要求。2022/11/17李宏業(yè)1360111924072022/11/17lihongye8檢驗項目和驗證內(nèi)容

注：—表示通常不需論證的項目；+表示通常需論證的項目；

①

假如已論證重現(xiàn)性，可不需再論證中間精密度；

②缺乏專屬性的分析方法，應(yīng)由其他分析方法來作補(bǔ)充；

③有些情況不需要。

2022/11/17lihongye10術(shù)語（2）專屬性－－是指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物，輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。如方法不夠?qū)伲瑧?yīng)采用多個方法補(bǔ)充。檢測限－－是指試樣中被測物能被檢測出的最低量。定量限－－是指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測量結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。2022/11/1712分析方法的驗證項目典型分析方法驗證的項目：－專屬性specificity

－精密度precision－準(zhǔn)確度accuracy－檢測限detectionlimit

－定量限quantitationlimit－線性linearity－范圍range－耐用性robustness

2022/11/1714分析方法的驗證-專屬性專屬性－方法定性分析（鑒別）：樣品陽性結(jié)果＋空白陰性結(jié)果＋結(jié)構(gòu)相似物質(zhì)的陰性結(jié)果；雜質(zhì)檢查（對照品可得）：將可能的雜質(zhì)對照品加入樣品中；雜質(zhì)檢查（對照品不可得）：－用另外一種官方的標(biāo)準(zhǔn)或經(jīng)驗證的方法對樣品和經(jīng)降解的樣品分析，比較兩種方法得到的雜質(zhì)概況2022/11/1715分析方法的驗證-專屬性雜質(zhì)檢查（對照品不可得）－使用其他技術(shù)對峰純度進(jìn)行檢查，如二極管陣列檢測器、MS等含量測定：

被分析物與其他干擾峰完成分離。向樣品中加入一定量的干擾物，含量測定的結(jié)果不受干擾；檢查主峰的純度分析方法的驗證-專屬性鑒別試驗：本品的紅外吸收圖譜應(yīng)與對照品的圖譜一致。采用與被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物以及被測物分別進(jìn)行紅外測試。被測物為正反應(yīng)。被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物為負(fù)反應(yīng)。被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物可選用中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。2022/11/17李宏業(yè)1360111924016分析方法的驗證-專屬性鑒別：化學(xué)滴定的顏色反應(yīng)；采用與被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物以及被測物分別進(jìn)行鑒別試驗。被測物為正反應(yīng)。被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物為負(fù)反應(yīng)。被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物可選用中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。2022/11/17李宏業(yè)13601119240172022/11/1718分析方法的驗證-精密度精密度precision－定義：對均一樣品重復(fù)取樣檢測每個檢測結(jié)果間的接近程度，RSD%,CV%

－重復(fù)性repeatability：短時間內(nèi)同一分析人員使用同一儀器－中間精密度intermediateprecision:在同一實驗室內(nèi)的變化，如不同分析時間、不同分析人員、不同分析儀器－重現(xiàn)性reproducibility:在不同實驗室內(nèi)重復(fù)

2022/11/1720分析方法的驗證-準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度－定義：方法的檢測結(jié)果與真實值的接近程度。－方法：

－原料藥：分析已知含量的對照品；第二種確定的方法分析，結(jié)果比較－制劑：加樣回收；第二種確定的方法分析，結(jié)果比較－應(yīng)在方法的范圍內(nèi)－計算回收率：3濃度×3次

2022/11/1721分析方法的驗證-檢測限檢測限detectionlimit－定義：在聲明的實驗條件下所能檢測到的被分析物的最小量。限度檢查的指標(biāo)；表示為在樣品中的濃度％,ppm－方法：－檢測已知濃度的樣品(對照品)－雜質(zhì)的DL<0.05%－信噪比2:1/3:12022/11/1723分析方法的驗證-線性與范圍線性和范圍linearityandrange－定義：－線性：在給定的范圍內(nèi)使檢測結(jié)果直接或通過數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換后與被分析物在樣品中的濃度成比例的能力－范圍：在適當(dāng)?shù)木芏取?zhǔn)確度和線性基礎(chǔ)上檢測到的被分析物的最低水平到最高水平區(qū)間2022/11/1724分析方法的驗證-線性與范圍－方法：一定范圍內(nèi)的不同濃度點(diǎn)進(jìn)樣，繪制響應(yīng)值（y）與濃度(x)之間的回歸線，計算回歸方程，相關(guān)系數(shù)（r,r2）

－主成分含量測定：80％－120％檢測濃度－雜質(zhì)含量測定：定量限（50％）－120％標(biāo)準(zhǔn)－裝量差異：70％－130％檢測值－溶出實驗：±20％規(guī)定范圍2022/11/1726分析方法的驗證-耐用性耐用性robustness－定義：分析方法的某些參數(shù)發(fā)生微小變化時方法抗干擾的能力，表示在正常使用時的可靠性－方法：刻意改變參數(shù)，考察結(jié)果的變化流動相的pH值、流動相的組成（極性的變化）、不同供應(yīng)商柱子、柱溫、流速等分析方法的驗證-耐用性液相：評估柱溫、流速、色譜柱、緩沖鹽pH、有機(jī)相比例、流動相比例、溶液放置時間對檢測結(jié)果的影響氣相：評估柱溫、流速、色譜柱、溶液放置時間對檢測結(jié)果的影響2022/11/17李宏業(yè)13601119240272022/11/1728分析方法的驗證-系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性systemsuitability－耐用性驗證的結(jié)果－影響參數(shù)在方法中列出－在日常樣品分析前、過程中進(jìn)行考察－色譜方法中尤為重要2022/11/1730分析方法的驗證USP對不同方法驗證項目的要求*根據(jù)不同的方法特點(diǎn)也可能需要

“＋”需要“－”不需要驗證項目I類II類III類IV類定量限度檢查準(zhǔn)確度++**-精密度++-+-專屬性+++*+檢測限--+*-定量限-+-*-線性++-*-范圍++**-2022/11/1731分析方法的驗證I類方法：制劑中原料藥或活性成分（包括防腐劑）的定量分析方法；II類方法：原料藥中雜質(zhì)或制劑中降解化合物的分析方法；包括定量方法和限度檢查；III類方法：藥物性能特征分析方法：溶出，藥物釋放IV類方法：鑒別實驗分析方法確認(rèn)適用于藥典方法和其他已驗證的法定標(biāo)準(zhǔn)。因為藥典方法和其他法定標(biāo)準(zhǔn)被認(rèn)為是驗證過的分析方法，不需要驗證，但需要通過方法確認(rèn)來證明方法在該實驗室條件下的適應(yīng)性。2022/11/17李宏業(yè)1360111924032分析方法確認(rèn)對于方法確認(rèn)，通常采用兩種方式：一、由兩名檢驗人員分別獨(dú)立對同一批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗（如可能使用不同的儀器）比較兩人的檢測結(jié)果來證明方法在本實驗室（人員，分析儀器，試劑）的適用性；二、根據(jù)驗證目的和評估結(jié)果選擇相關(guān)項目進(jìn)行確認(rèn)：（具體見下表）2022/11/17李宏業(yè)1360111924033分析方法確認(rèn)2022/11/17李宏業(yè)1360111924034分析方法再驗證在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對分析方法再次進(jìn)行部分或完整的再驗證，以保證分析方法可靠。2022/11/17李宏業(yè)1360111924035分析方法再驗證當(dāng)原料藥合成工藝發(fā)生改變時，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進(jìn)行驗證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對主成份的含量測定應(yīng)無干擾。2022/11/17李宏業(yè)1360111924036分析方法再驗證當(dāng)制劑的處方組成改變、輔料變更時，可能會影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測定的準(zhǔn)確度，因此需要對鑒別、含量測定方法再驗證。當(dāng)原料藥產(chǎn)地來源發(fā)生變更時，可能會影響雜質(zhì)檢查和含量測定的專屬性和準(zhǔn)確度，因此需要對雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法進(jìn)行再驗證。2022/11/17李宏業(yè)1360111924037分析方法再驗證再驗證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗證。當(dāng)這種改變到達(dá)一定程度時，則需要完整的驗證。如分析方法完全改變時，則應(yīng)視為新方法并需要完整的驗證。方法再驗證是對分析方法的完善過程，應(yīng)根據(jù)實際改變情況進(jìn)行再驗證，從而保證所采用的分析方法能夠控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。20