1、WOR/式一、電鏡練習題及答案一、透射電鏡標本取材的基本要求并簡要說明。答：取材的基本要求如下：組織從生物活體取下以后，如果不立即進行及時固定處理，就有可能由現缺血缺氧后的細 胞超微結構的改變，如細胞由現細胞器變性或溶解等現象，這些都可造成電鏡觀察中的人為假 象，直接影響觀察結果分析，甚至導致實驗失敗。止匕外，由于處理不當造成組織微生物污染， 導致細胞的超微結構結構遭受破壞。因此，為了使細胞結構盡可能保持生前狀態，取材成敗是關鍵，取材成功的關鍵在于操 作者必須要注意把握“快、小、冷、準”四個取材要點。.快：就是指取材動作要迅速，組織從活體取下后應在最短時間(爭取在12分鐘之內)投入前固定液。對

2、于實驗動物，最好在斷血流、斷氣之前就進行取材，以免缺血缺氧后使細胞代謝發生改變而破壞細胞的超微結構。當然，最好是采用灌注固定法。為了使前固定的效果更佳，組織塊要充分和固定液混合，應采用振蕩固定10分鐘以上，有條件的可采用微波固定法固定。.小：由于常用的固定劑滲透能力較弱，組織塊如果太大，塊的內部將不能3得到良好的固定。因此所取組織的體積要小，一般不超過1mm為便于定向包埋，可將組織修成大小約1mm 1mm 2mmi條形。.冷：為了防止酶對自身細胞的酶解作用，取材操作最好在低溫(5 C15C)環境下進行，這樣可以降低酶的活性，防止細胞自溶。所采用的固定劑以及取材器械要預先在冰箱(5 C)中存放一

3、段時間。.準：就是取材部位要準確，這就要求取材者對所取的組織解剖部位要熟悉，必須取到與 實驗要求相關的部位，不同實驗組別間要取相同部位，如需要定向包埋的標本，則要作好定向 取材工作。止匕外，還要求操作動作輕柔，熟練，盡量避免牽拉、挫傷與擠壓對組織造成的 人為損傷。二、什么是瑞利準則？電鏡與光鏡在原理上有何相似和不同之處？答：1、光線通過二個比較靠近的小孔時，這二個小孔的衍射圖會重疊在一起。當一個衍射圖的中央亮斑正好落在另一個衍射圖的第一暗環中心時，這二個點剛可以分辯。這就是顯微鏡分辯本領的瑞利準則。2、相似點：光學顯微鏡是利用玻璃制作的透鏡對光進行折射，將一物點發生不同角度的光線最終會聚成一個

4、像點。電子顯微鏡是以電子束作為光源，利用電磁透鏡產生的電場或磁場折射電子束，并通過電子束轟擊熒光屏激發熒光而達到成像目的。不同點：光鏡的照明源是可見光，而電鏡是用電子束照明。光鏡的透鏡用玻璃制成，而 電鏡的透鏡是軸對稱的電場或磁場。三、簡述透射電鏡及掃描電鏡樣品制作流程答：1-透射電鏡樣品制作流程為取材一一漂洗(生理鹽水)一一前固定(2.5%戊二醛，4oC冰箱2小時以上)一一漂洗(0.1M磷酸緩沖液，3次，45分范文.專業資料整理WOR/式鐘）一一后固定（1%鉞酸1小時左右）一一漂洗（0.1M磷酸緩沖液，3次，45分鐘）一一塊 染（1%醋酸鈾2小時）梯度脫水（50% 70% 80% 90%W酮

5、各15分鐘，100%W酮2次, 各10分鐘）一一浸透（丙酮：包埋液 =1:1, 37oC烘箱2小時；丙酮：包埋液=1: 4, 37oC 烘箱過夜；純包埋液 45oC烘箱2小時）一一包埋聚合（45oC烘箱3小時，65oC烘箱48小 時）。2、掃描電鏡樣品制作流程為取材（做好樣品觀察面的標志）一一漂洗（生理鹽水或緩沖液）一 一固定（2.5%戊二醛2小時以上）一一漂洗（0.1M磷酸緩沖液，3次，45分鐘）一一后固 定（1%鉞酸,2小時）一一脫水（50% 70% 80% 90% 95治15分鐘，換醋酸異戊酯 15 分鐘或叔丁醇15分鐘）一一干燥（零界點干燥或冷凍干燥）一一鍍膜（真空鍍膜儀或離子 濺射儀

6、）四、常用的化學固定方法有哪些？答；常用的化學固定方法有1、浸泡固定法（也稱組織塊固定）：就是將組織塊直接浸泡入固定液當中進行固定。2、游離細胞固定法：適用于培養細胞、周圍血、骨髓、胸腹水或其他滲由液。如為貼壁生長的培養細胞， 應先用橡皮刮子將細胞從培養管壁上輕輕刮下，或用酶消化，使細胞脫離管壁。3、原位固定法：就是在組織未取下之前，在組織器官原來的位置進行預固定的方法。原位固定可分為點滴 固定法和注射固定法兩種。點滴固定法：就是將實驗動物麻醉后暴露由所需的器官表面，小心地剝開包膜，將預冷 的固定液直接滴在組織的表面上，并保持固定液適當濃度不使揮發干燥。注射固定法：就是將實驗動物麻醉后，將固定

7、液用細注射針直接注射到所需固定的組 織中或空腔臟器的內部。4、灌注固定法就是利用血液循環的途徑將固定液灌注到所需固定的組織中，其特點是灌注快速、均勻， 缺點是固定操作復雜、要求高。灌注固定法可分為全身固定和局部固定兩種。通常采用的固定劑為2%-4誠二醛溶液或者4核聚甲醛溶液。五、普通透射電鏡包括那些結構？請簡要敘述。答：透射式電子顯微鏡（簡稱透射電鏡）由四部分組成，即電子光學系統（印鏡筒）、真 空排氣系統、電源系統和水冷系統。電子光學系統包括：照明系統、樣品室、成像系統和觀察記錄系統。真空排氣系統包括：機械泵、油擴散泵、真空管道、閥門及檢測系統組成。電源系統 包括：主要的電源供給包括高壓電源、

8、電子槍燈絲電源、控制極電源、透鏡電源、真 空系統電源等部分。水冷系統主要靠冷卻水循環裝置來完成或者直接用自來水降溫。六、簡述電鏡在生命科學中的應用范文.專業資料整理WOR/式答：電鏡在生命科學上的應用幾乎包括所有的學科研究領域都已經用到或即將用到電 鏡技術。比如動物或植物細胞的超微結構（包括細胞核、細胞質及其細胞器等內容物、 細胞間的連接等）的形態觀察，通過對比觀察，對動植物形態在超微結構水平上進行 分類、分型，以探討遺傳、變異及病理病因的機理或機制，為生命科學的基礎研究所 不可或缺的研究手段。利用常規電鏡技術和特殊電鏡技術如免疫電鏡技術、電鏡酶細胞化學技術、電 鏡原位雜交技術等可以進行細胞細

9、胞超微結構及超微病理分析，以及細胞內抗原、酶 等的定位、定性甚至定量研究等。七、簡述電鏡的球差和畸變及其形成原因。答：1、球差：由于電子束光源通過透鏡受到偏轉，通過樣品，從物平面向下發射， 形成物點孔徑角。從物點發生的射線，到達下一級透鏡又被聚集。如果透鏡有缺陷或 孔徑角太大，則靠近光軸的射線和遠離光軸的射線，受到電磁場的作用就會不同，這 些射線在光軸上會聚的位置不同，結果遠離光軸的射線就會在像面上形成一個最小模 糊圈。此時可有圖象中央凸起感。球差是目前影響電鏡分辨率的一個主要因素。2、畸變：由于離軸較遠處的徑向磁場的作用力強，使放大倍數隨物點離軸的距離而 變化，進而使圖象發生改變而產生的。畸

10、變常見的有枕形畸變、桶形畸變和S形畸變尺K八、簡述電磁透鏡及其聚焦原理答：由于軸對稱彎曲磁場對電子束有聚焦作用，因而可以得到電子光學像。我們稱這種具有軸對稱彎曲磁場裝置構成的電子透鏡為電磁透鏡（electronmagneticlenses ）。由于電磁透鏡磁場非均勻分布，物、像點在磁場之外，電子在磁場中既受到軸向分量的作用，又受到徑向分量的作用，使平行于軸進入磁場的電子束可獲得聚焦。九、什么是反差？簡述電鏡熒光圖像反差形成的原因。答：1、人的眼睛在區分物體時，主要根據物體不同部位或物體之間的光強度與波長的 差別，這些差別構成了物體的反襯度，又稱為“反差”。電鏡與光鏡一樣也存在反差現 象。2、由

11、于電鏡標本上的不同部位的物質結構不同，經過電子染色后，其疏密度也不同，它們散射電子的能力也各不相同，散射電子能力強的地方，顯現為暗像；相反，散射能力弱的地方，顯現為亮像。因此，在熒光屏上所看到的是由暗像與亮像組成的具有一定反差的熒光圖像。十、游離細胞取材方法有哪些？并簡述其處理方法。答：血漿凝集法：將抗凝全血離心分層（2000轉/每分鐘，1020分鐘），用毛細吸管沿著管壁輕輕的將上清夜吸取（不要破壞白細胞層），接著用吸管吸取固定液，并沿著管壁將2.5%戊二醛固定液慢慢地加入進行固定，然后把它放在4 c冰箱內保存。范文.專業資料整理WOR/式血漿（血清）混合法：如為細菌、病毒、脫落細胞、培養細胞

12、則先將它們制成懸液放置于離心管內（最好是玻璃的），離心成團（10003000轉/分鐘，10分鐘，下同），去上清液后加入2.5%戊二醛固定10分鐘左右，離心，再棄去多余的固定液，然后和少量抗凝血漿或血清混合均勻，離心成團，去上清液（留少許），用吸管吸取2.5%戊二醛固定液沿著離心管壁緩慢滴入，盡量避免團塊分散，靜置于4 c冰箱內保存備用。十一、簡述超薄切片流程并簡要說明。答：超薄切片流程包括以下幾個步驟：1、切片前的準備：銅網清洗（用丙酮和乙醇浸洗）2、支持膜制備：常用 Formvar膜（用聚乙烯醇縮甲醛和氯仿配置，濃度為0.5%）3、玻璃刀制備：專用制刀機制作。4、半薄切片光鏡定位（主要確定超

13、薄切片的位置）。5、修塊（表面修成梯形或長方形）。6、超薄切片：專用超薄切片機切片，厚度在50100nm之間較為合適。7、撈片：將超薄切片撈在載網上。8、染色：鉛-鈾雙重染色法，如已有過塊染，則只需鉛染色30分鐘即可。十二、簡述負染技術及其應用。答：負染技術是利用重金屬鹽（常用磷鴇酸鹽或醋酸鈾溶液）沉積到樣品四周，樣品四周散射 電子的能力就較強，因而表現為暗區；樣品本身散射電子的能力較弱，則表現為亮區，這樣便 能把樣品的外形與表面結構清楚地襯托由來。是觀察微小顆粒狀生物材料的外部形狀常用的染 色方法。主要應用于病毒、支原體、細菌等微生物外部形態的觀察以及納米級生物材料的形態 觀察。十三、簡述石

14、蠟塊做超薄切片的樣品制作流程 答、石蠟塊做超薄切片的樣品制作流程如下:1、取材：從石蠟塊上相應部位切下約2、溶蠟：將取下的標本放在一張濾紙上，甲苯溶液中40 c烘箱內繼續浸泡1mm3勺小塊。40c烘箱內烘1小時，然后轉放入二812ho3、水化：純丙酮 30分鐘、90% 80% 70炳酮各15分鐘4、漂洗：用緩沖液漂洗（0.1M磷酸緩沖液PBS）3次，每次15分鐘。5、固定：2.5%戊二醛固定2小時，PBS漂洗3次，而后1%戢酸后固定1 2小時 6、漂洗、塊染、脫水、浸泡、包埋聚合同常規透射電鏡標本制作方法。二、選擇題及答案1、人眼的平均分辨率為（B）以m E0.4 以m E0.4 以m范文.專

15、業資料整理WOR/式2、電子槍產生的電子是（ A ）E俄歇電子反射電子A 入射電子B透射電子C彈性散射電子E俄歇電子反射電子3、用來顯示組織和細胞的內部超微結構像的電子為（B）透射電A 入射電子B 子 C 彈性散射電子D 二次電子E4、下面哪項不屬于透射電鏡樣品制備技術（ A ）負染技A鍍膜B術C電鏡細胞化學技術D超薄切片技術 E半薄切片技術5、下面哪項不屬于掃描電鏡樣品制備技術（B）A表面干燥法B浸透包埋C冷凍復型D冷凍割斷法E 組織導電法6、下面哪種電鏡可以在觀察結構的同時，對組織細胞內的元素成分進行分 析（A 透射電鏡B掃描電鏡C 分析電鏡超高壓透射電D鏡E 原子力顯微鏡7、觀察組織細胞

16、內部超微結構應選用哪種電 TOC o 1-5 h z 鏡（B）A 原子力顯微鏡 B透射電鏡C 掃描電鏡D 磁力顯微鏡E 側向力顯微鏡8、下面哪項不是超高壓電子顯微鏡的優點（E）可提高圖像質A 可用于觀察厚切片B可以提高分辨率 C 量D可觀察復雜的結構E減少輻射損傷范圍9、下面對掃描電鏡的描述錯誤的是（B）A 利用反射電子和二次電子成像B用于觀察組織細胞表面形貌C 樣品室大，可用于觀察塊狀樣品D景深長，立體感強E樣品可被升降和傾斜10、電子槍由（D）組成陽極、柵A 陰極、陽極 B 陰極、柵極 C 極D 陰極、陽極、柵極 E 正極、負極、柵極11、二次電子監測系統不包括 TOC o 1-5 h z

17、 （E）閃爍A 檢測器 B陰極射線管 C器D光電倍增器E 視頻放大器12、固定液中戊二醛的常用濃度為（C）A 0.5% B 2.0% C 2.5% D 4%E10%13、下面對透射電鏡描述不正確的是（D）A利用透射電子成像B觀察細胞內部超微結構C可觀察負染標本D景深長、立體感強E分辨率高，性能最完善14、透射電鏡的反差取決于樣品對（B）的散射能力A二次電子B入射電子C 透射電子D散射電子E反射電子15、觀察生物樣品時，透射電鏡的加速電壓一般為（C）A20-50KVB50-80KVC80-100KVD100-120KV E120KV16、超薄切片是指厚度小于（D）的切片A 200nmB 300nmC400nmD 100nm E500nm17、超薄切片技術的步驟為（B）專業資料整理WOR/式A 取材、固定、脫水、包埋、切片、染色B 取材、固定、脫水、浸透、包埋、切片、染色C 取材、脫水、固定、包埋、切片、染色D 取材、固定、脫水、浸透、包埋、切片范文.