1、摘 要通過本實驗學(xué)習(xí)沙門氏菌的檢測方法和技術(shù)，了解沙門氏菌的一些生化特性；本實 驗是檢測雞腸的沙門氏菌，先用顯色培養(yǎng)基找出可疑菌落，再做生化試驗找出可疑的典 型性的沙門氏菌，再通過血清學(xué)試驗最終確定；實驗檢測結(jié)果與典型性沙門氏菌又很大 出入，但是血清學(xué)鑒定是陽性；最后只判斷出是沙門氏菌。關(guān)鍵詞：沙門氏菌 接種 生化試驗血清學(xué)鑒定前言沙門氏菌病是指由各種類型沙門氏菌所引起的對人類、家畜以及野生禽獸不同形式 的總稱。感染沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染食品，可使人發(fā)生食物中毒。據(jù)統(tǒng)計在 世界各國的種類細(xì)菌性食物中毒中，沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。我國內(nèi)陸地區(qū) 也以沙門氏菌為首位。沙門氏菌病的病原

2、體。屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌。已 發(fā)現(xiàn)的近一千種（或菌株）。按其抗原成分，可分為甲、乙、丙、丁、戊等基本菌組。 其中與人體疾病有關(guān)的主要有甲組的副傷寒甲桿菌，乙組的副傷寒乙桿菌和鼠傷寒 桿菌，丙組的副傷寒丙桿菌和豬霍亂桿菌，丁組的傷寒桿菌和腸炎桿菌等。除傷寒 桿菌、副傷寒甲桿菌和副傷寒乙桿菌引起人類的疾病外，大多數(shù)僅能目引起家畜、 鼠類和禽類等動物的疾病，但有時也可污染人類的食物而引起食物中毒。實驗材料2.1材料雞腸、BPW培養(yǎng)基、TTB培養(yǎng)基、SC培養(yǎng)基、BS培養(yǎng)基、HE培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂、 三糖鐵（TSI）瓊脂、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、尿素瓊脂（pH 7.2）、氤化鉀（KCN）培養(yǎng) 基及

3、其對照培養(yǎng)基、賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基及其對照培養(yǎng)基、甘露醇、山梨醇、鄰硝 基酚0-D半乳糖苷（ONPG）、沙門氏菌O和H診斷血清、生化鑒定試劑盒。2.2實驗器材250mL三角瓶，100mL量筒，培養(yǎng)皿、移液槍，注射器，酒精燈，接種環(huán)，接種針、 載玻片、牛皮紙、橡皮筋、報紙，手提式高壓滅菌鍋，電磁爐，恒溫箱，均質(zhì)器、不銹 鋼杯等。實驗方法3.1培養(yǎng)基的配制分組配制BPW培養(yǎng)基、TTB培養(yǎng)基（碘液、煌綠在培養(yǎng)基滅菌冷卻后加入）、SC培養(yǎng)基、BS培養(yǎng)基、BS培養(yǎng)基、HE培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。3.2增菌稱取25g（mL）樣品放入盛有25 mL BPW的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 m

4、in。輕輕搖動培養(yǎng)過的樣品混合物，移取5mL，轉(zhuǎn)種于50mL TTB內(nèi)，于42 C 1 C培養(yǎng)18 h24h。同時，另取5 mL，轉(zhuǎn)種于50 mL SC內(nèi)，于36 C1 C培養(yǎng)18 h 24 h。3.3分離每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一 個BS瓊脂平板和一個HE瓊脂平板。于36 C1 C分別培養(yǎng)18 h24 h （HE瓊 脂平板）或40 h48 h （BS瓊脂平板），觀察各個平板上生長的菌落,各個平板上的菌 落特征。3.4生化試驗自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜 面劃線，再于底層穿刺；繼續(xù)接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)

5、基、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、 尿素瓊脂（pH 7.2）、氤化鉀（KCN）培養(yǎng)基、鄰硝基酚0-D半乳糖苷（ONPG）培養(yǎng) 基、甘露醇、山梨醇和在營養(yǎng)瓊脂平板劃線，于36C1 C培養(yǎng)18 h24 h，必要時可 延長至48 h。然后對照國標(biāo)上面的表判斷是否是沙門氏菌、是哪種類型的沙門氏菌。3.5血清學(xué)鑒定在載玻片上滴一滴血清，然后用接種環(huán)挑取一小塊菌落沾到血清中央攪勻，靜置2min， 觀察細(xì)菌的凝集狀況。4結(jié)果與分析檢測的結(jié)果表：檢測項目產(chǎn)氣硫化氫賴氨酸脫羧酶蛋白胨尿素氤化鉀甘露醇山梨醇ONPG結(jié)果 +本次實驗的全部的檢測項目都是顯陽性，與典型性沙門氏菌有很大差別。但是做血 清學(xué)實驗的時候，有發(fā)生凝集

6、現(xiàn)象。經(jīng)過小組討論，認(rèn)為最大原因是因為接種的時候取 的不是單一分離的菌落，而且接種量都比較大，可能同時取了不同種類的沙門氏菌，以 致每一個都是陽性，但是血清學(xué)實驗是陽性，所以最后還是判斷該細(xì)菌為沙門氏菌，但 是細(xì)致的類型還是無法判斷的出來。5 討論本次實驗在生化試驗的檢測項目上與典型性沙門氏菌的顯色反應(yīng)有很大出入，但是 在血清學(xué)實驗是陽性，根據(jù)分析，原因如下：接種的時候，取的菌不是同一個菌落（由于制備的培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的單菌落比較小，取 了附近的幾個菌落）。KCN瓶口打開太久，揮發(fā)過多，效力遠(yuǎn)遠(yuǎn)不及。劃線的時候，取樣過多或是過少，導(dǎo)致菌落大面積聚集在一起或是只有很小的一點，不 能很好地取樣。其中又以原因1為主要原因。參考文獻(xiàn)沙門氏菌檢驗GB 4