1、S-100卵白與Cathepsin D在先本性巨結腸診斷中的應用陳衛堅，周小漁，李梨平，賀新玉，范麗明【摘要】目的不雅察S-100卵白S-100和構造卵白酶DathepsinD，AD在先本性巨結腸Hirshsprungsdisease，HD中的表達。要領應用免疫構造化學染色不雅察25例HD患兒及10例比擬組兒童結腸。效果1在正常比擬組與HD擴張段組腸壁肌間和黏膜下層可見AD只對神經叢中神經節細胞陽性表達，對神經纖維與神經膠質細胞均不表達。S-100染色與AD染色相反，神經纖維與神經膠質細胞均陽性表達，神經節細胞陰性表達，表示為陽性神經叢中細胞狀“空缺區。2在HD局促段組腸壁神經叢中缺乏AD陽性

2、表達。S-100染色神經叢中細胞狀“空缺區未不雅察到；S-100強陽性表達的神經纖維束明顯增生，扭曲呈波浪狀。結論S-100和AD的免疫組化染色對診斷HD具有緊張意義。【關鍵詞】先本性巨結腸構造卵白酶DS-100卵白AppliatinfS-100prtEinandathepsinDindiagnsisfHirshsprungsdisease【Abstrat】bjetiveTbservetheexpressinfS-100prtein(S-100)andathepsinD(AD)inthelnfpatientsithHirshsprungsdisease(HD).ethdslnsfr25hild

3、renithHDand10ntrlserestainedfrS-100andADbyiunhistheistry.Results(1)InthentrlsandthedilatedintestinesegentftheHD，AD-psitivegangliniellserebservedinyenteriandsubusalplexus.S-100psitivenervefibersandgliytestainederenegativetAD.Thegangliniells-likeblankareaintheplexusstainederenegativetS-100.(2)Intheste

4、ntisegentfHD，neitherAD-psitiveneurnsnrell-likeblankareainS-100stainederefundintheplexus.S-100psitivefibersereprliferatedbviuslyandave-likeintheirappearane.nlusinTheexpressinfS-100andADiunhistheistry-staininghasaniprtantsignifianetthenfireddiagnsisfHD.【Keyrds】HirshsprungsdiseaseathepsinDS-100prtein先本

5、性巨結腸Hirshsprungsdisease，HD是小兒外科常見的消化道畸形，重要病理改變是遠端病變段腸管神經節細胞缺如。在HD的病理診斷中，有部門病例，尤其是新生兒病例，由于腸壁神經體系發育不完全，神經節細胞欠成熟，形態不典范，與神經叢中神經膠質細胞難以區分。并且多數患兒并發腸道熏染，腸壁內有較多炎細胞浸潤，使HE切片中神經節細胞難以識別。這些緣故原由均可造成HD不易明白診斷。本研究應用免疫構造化學免疫組化要領，不雅察正常腸壁、HD擴張段和HD局促段腸壁神經構造中S-100卵白S-100和構造卵白酶DathepsinD，AD的表達效果，加以闡發，以明白診斷HD。1資料與要領1.1一樣平常資

6、料回首我院2002年6月2022年6月臨床擬診斷為HD的手術切除標本25例。男22例，女3例，年事1個月4歲，此中3個月10例，3個月15例，均經術后病理查抄證明為HD，23例為常見型，2例為長段型。每例標本別離取近端擴張段切緣腸壁作為HD擴張段組，取遠端局促段腸壁作為HD局促段組。10例橫結腸或乙狀結腸標本取自先本性無肛患兒造瘺術后切除的腸管，經光鏡查抄可見發育成熟的神經節細胞，作為正常比擬組。1.2檢測原理AD是一種天冬氨酸卵白酶，屬于溶酶體酸性卵白酶家屬。在人類腦構造神經元、體內神經節細胞中含量富厚，故可作為腸壁神經節細胞的標識表記標幟。S-100是神經膠質細胞特異性卵白，亦可存在于神經

7、纖維中，可作為腸道神經叢中膠質細胞和神經纖維的標識表記標幟。1.3要領標本經10%福爾馬林結實、白臘包埋，一連切片，切片厚4，行AD和S-100免疫組化染色。染色步調接納非生物素兩步法，用陽性的神經節細胞瘤作為陽性比擬片，用PBS取代一抗作為陰性比擬片，DAB顯色。一抗、二抗及DAB顯色劑均購自上海長島抗體生物診斷試劑。一抗抗AD抗體和抗S-100抗體事情濃度均為160，鼠/兔通用型二抗事情濃度為1100。不雅察正常腸壁、HD擴張段和HD局促段腸壁神經叢中神經節細胞、神經膠質細胞及神經纖維的染色效果。1.4效果斷定棕黃色為陽性信號，AD、S-100的陽性表達部位均位于細胞質。不雅察指標以“+、

8、+、+、-表達染色的深淺。(-)為陰性染色，(+)為弱陽性染色，(+)為陽性染色，(+)為強陽性染色。2效果2.1正常比擬組2.2HD擴張段AD和S-100在HD擴張段腸壁的染色環境與比擬組腸壁根本雷同。2.3HD局促段正常比擬組、HD擴張段組和HD局促段組腸壁神經構造對S-100、AD表達環境見表1。表1正常比擬組、HD擴張段組和HD局促段組腸壁神經構造對S-100及AD表達環境注：n為標本例數3討論HD在小兒胃腸道先本性畸形中發病率居第二位。HD簡直診根據是遠端病變腸壁肌間與黏膜下層神經節細胞缺如。但是在神經嵴細胞的遷徙、增生和發育的歷程中，受多種因素的影響，神經節細胞大概完全沒發育，也大

9、概是發育不成熟。尤其在新生兒期這種發育不成熟的神經節細胞更常見，其在光鏡下的形態與神經叢中的膠質細胞不易區分，加上炎癥細胞的影響，大概造成誤診。借助酶構造化學和免疫組化染色要領可以幫助診斷。但酶構造化學要領染色效果不不變，輕易出現假陽性，必要有履歷的病理醫師對染色效果做出準確的斷定。接納免疫組化染色標識表記標幟神經節細胞，對HD明白診斷有較好的幫助。S-100是一組可溶性、相對低分子質量、高酸性卵白，屬神經膠質細胞特異性卵白，亦可存在于神經纖維中。在研究腸神經體系的形態特性及布局特性中，S-100有精良的表達成效1。本研究中10例正常比擬者腸壁與25例HD患兒擴張段腸壁肌間和黏膜下層均可見S-

10、100陽性染色的神經纖維叢中有細胞狀“空缺區，與HE切片比力后創造，細胞狀“空缺區總是出如今神經節細胞所處的位置。在25例HD患兒局促段腸壁的肌間和黏膜下層中，S-100染色細胞狀“空缺區均未不雅察到。因此筆者以為，S-100染色中出現的細胞狀“空缺區是神經節細胞的特性性表示2。S-100可作為不雅察神經節細胞的指標之一。AD是一種天冬氨酸酶，屬于溶酶體酸性卵白酶家屬，其在細胞內卵白質的剖析代謝中起著關鍵作用，可催化很多神經肽的落解，如P物質、生長抑素、B脂卵白和血管告急素原。由于AD在人類腦構造神經元、體內神經節細胞中含量富厚，故可作為腸壁神經節細胞的標識表記標幟3。本研究的效果與其他學者3

11、，4報道的同等。即在結腸壁中，AD的免疫反響性僅范圍于神經節細胞，神經纖維和神經膠質細胞均無陽性染色。本組25例HD患兒局促段腸壁全部缺乏AD陽性表達，而10例比擬組和25例HD患兒擴張段腸壁均可見AD染色陽性的神經節細胞。這與通例病理查抄效果一樣等。說明AD對神經節細胞具有較高的特異性表達。在新生兒的病例中，AD的陽性表達同樣輕易看到。構造學研究已經證明，正凡人的腸內神經節細胞數量出生后已結實，但有一個成熟歷程，即隨著年事增長，大而成熟的神經節細胞數量漸漸增多，不成熟的神經節細胞比例淘汰5。在本研究的效果中不雅察到，固然神經節細胞對AD均為陽性表達，但差異部位的陽性染色程度不同等，表示為神經

12、節細胞胞質中棕黃色顆粒物數量與顏色深度均存在差異。肌間神經叢內神經節細胞染色一樣平常強于黏膜下神經叢。比力HE切片與AD染色切片還創造，在HE切片中不雅察到的細胞核大、細胞質富厚的神經節細胞表達AD較強，而細胞核孝細胞質較少或不顯著的神經節細胞對AD的表達相對較弱。這大概與神經元發育不成熟或發育不良有關4。也可以說明染色深淺差異的神經節細胞其成熟程度差異，成熟的神經節細胞染色較深。因此，筆者以為AD不但可以作為神經節細胞的特異性標識表記標幟物，還可以檢測腸道神經體系中神經節細胞的成熟程度，作為對臨床預后環境評估的指標。對付手術擴張段近端切緣中無AD表達或神經節細胞AD陽性表達程度較低的病例，應

13、該嚴密不雅察，以免術后并發腸神經發育不良癥引起腸梗阻。在全部標本的黏膜層和黏膜下層可看到少數AD弱陽性表達的細胞散在漫衍。經D68染色證明為構造細胞。固然構造細胞對AD也為陽性表達，但構造細胞與神經節細胞不難區分：(1)構造細胞常有長而扭曲的細胞核，缺乏顯著的核仁；神經節細胞核大而圓似“梟眼狀，核仁清楚。(2)構造細胞常單個存在或與淋巴細胞同時出現，闊別神經叢和神經纖維3，4。研究效果中神經纖維束非常增生的緣故原由如今還不完全清楚，有學者以為非常增生的神經纖維束大概來自腸壁外的神經構造2。固然這些非常增生的神經纖維束對HD不具診斷性意義，但是假設在病變腸壁的肌間或黏膜下層都尋不到這種扭曲粗大的神經纖維束，那么診斷HD應該慎重。綜上所述，AD是腸神經節細胞特異性較高的標識表記標幟物，對差異成熟程度的神經節細胞表達強度差異，不但可以特異性標識表記標幟神經節細胞，并且可以斷定神經節細胞的成熟程度，用于評估預后。S-100對神經節細胞陰性表達可以形成具有特性性的細胞狀“空缺區，與AD的陽性表達比擬不雅察，同時應用，對HD的診斷有較大的幫助。這兩種抗體的免疫組化染色均能用于通例