1、1預防艾滋病、梅毒、乙肝預防艾滋病、梅毒、乙肝母嬰傳播實驗室檢測母嬰傳播實驗室檢測內蒙古婦幼保健院檢驗科內蒙古婦幼保健院檢驗科楊治理楊治理2015年年4月月2 目目 錄錄第一部分第一部分 艾滋病實驗室檢測艾滋病實驗室檢測第二部分第二部分 梅毒實驗室檢測梅毒實驗室檢測第三部分第三部分 乙肝實驗室檢測乙肝實驗室檢測3第一部分第一部分艾滋病實驗室檢測艾滋病實驗室檢測4艾滋病病原學及分型艾滋病病原學及分型n艾滋病由艾滋病病毒引起n目前已發現艾滋病病毒分HIV-1型和HIV-2型，后者主要流行于西非。n我國目前流行的絕大多數毒株是HIV-1型中的M亞型，而HIV-1型中的O亞型、N亞型和HIV-2型主要

2、在非洲某些局部地區流行。nHIV屬于RNA病毒，是一種變異性很強的病毒，不同的病毒株之間差異很大，甚至同一毒株在同一感染者體內僅數月就可以改變，使原中和抗體失去中和效能，這給疫苗的研制造成很大困難。5發病機理發病機理n艾滋病侵入人體后首先與細胞表面含有CD4受體CD4+T淋巴細胞（原始T細胞）結合，進入細胞進行復制，部分整合于細胞染色體DNA中成為潛伏型。n感染初期由于機體細胞免疫和體液免疫對艾滋病毒的抵抗作用，艾滋病毒低水平復制 。n潛伏的艾滋病毒被激活而大量復制，廣泛侵入人體CD4+T淋巴細胞，使CD4+T淋巴細胞、單核-巨噬細胞、B淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞和NK細胞等功能受損，最后導

3、致整個免疫功能缺陷，最終發生一系列頑固性機會感染和腫瘤的發生。6自然病程自然病程 途徑 HIV感染至AIDS AIDS后存活 性傳播 6-10年（平均8年） 12月 靜脈吸毒 6年左右 8.4月 血源傳播 4-10年（平均6.2年） 10-14月7感染后的臨床類型感染后的臨床類型n典型進展：8-10年內免疫力下降。n快速進展：CD4+T細胞2-5年內迅速下降，HIV病毒一直維持較高病毒栽量。n長期不進展：保持較高細胞計數12-15年以上。8 感染后的自然病史感染后的自然病史時間階段癥狀0初期感染 無1-4周 血清轉化期 皮疹，發熱 0-4年無癥狀期 無1-6年癥狀期 輕微4-10年 艾滋病期

4、中等的-嚴重的9傳播方式傳播方式n性接觸傳播：主要傳播途徑，包括同性及異性之間的性接觸。肛交、口交有著更大的傳染危險。n血液傳播 ：輸入污染了艾滋病病毒的血液或血液制品；與艾滋病病毒感染的吸毒者共用注射器。共用醫療器械消毒不徹底或不消毒以及生活用具（如牙刷、剃刀等） 10傳播方式傳播方式n母嬰傳播：通過胎盤通過分娩時產道 通過哺乳傳染。 * 不會經淺吻、握手、擁抱、共餐、共用辦公用品、共用廁所、游泳池、共用電話、打噴嚏等而感染，甚至照料病毒感染者或艾滋病患者都沒有關系。11實驗室檢測實驗室檢測一、一、HIV實驗室診斷實驗室診斷二、母親為二、母親為HIV陽性所生嬰幼兒陽性所生嬰幼兒HIV實驗室檢

5、測實驗室檢測12 一、一、HIV實驗室診斷實驗室診斷13HIV感染特點感染特點n所有的HIV感染者體內都會產生針對HIV的抗體n這種抗體是針對病毒的特定蛋白而生成的，對HIV而言是獨一無二的。n感染者終生都會帶有這種抗體。 14HIV檢測種類檢測種類nHIV抗體、抗原檢測nHIV病毒栽量檢測nHIV CD4+T淋巴細胞檢測nHIV耐藥性檢測15我國我國HIV抗體檢測程序抗體檢測程序n篩查試驗n重復試驗n確認試驗16 抗體篩查試驗的流程圖抗體篩查試驗的流程圖一陰一陽重復檢測陰性反應篩查試劑原有試劑+另一種篩查試劑陰性報告送確認實驗室進行確認均陽性反應均陰性反應樣 本篩查檢測陽性反應17初篩試驗報

6、告方式初篩試驗報告方式n 篩查實驗呈陰性反應出具HIV抗體陰性報告n 篩查實驗呈陽性反應，可出具“HIV抗體待復 查”報告，不能出陽性報告。18HIVHIV篩查檢測結果的解釋篩查檢測結果的解釋HIV篩查檢測結果“陰性陰性(-)(-)”：n受檢者沒有受檢者沒有感染HIVn受檢者已經感染了HIV，但處于窗口期窗口期：3個月后再次進行檢測HIV篩查檢測結果“陽性陽性(+)(+)”：n病人可能可能已經感染HIVn但應再次重復檢測，如兩次重復檢測中1次或2次檢測結果為陽性陽性，需要進行確認試驗19在產前檢查服務中開展整合的檢測咨詢所采用的在產前檢查服務中開展整合的檢測咨詢所采用的HIV檢測流程檢測流程2

7、0產時產時HIVHIV抗體檢測流程抗體檢測流程21HIV抗體初篩檢測試驗抗體初篩檢測試驗n酶聯免疫吸附實驗（ELISA 常用方法）n金標快速檢測實驗n化學發光檢測實驗n明膠顆粒凝聚實驗（PA）22酶聯免疫吸附實驗（酶聯免疫吸附實驗（ELISA ）n特點：準確性高、價格低廉、判斷結果有客觀標準、結果便于記錄和保存，適合于大批樣本檢測。n手工操作時應注意點：標本采集試驗準備加樣溫育洗板顯色比色23抗體初篩檢測中出現的問題抗體初篩檢測中出現的問題n假陽性：血液惡化病變自身免疫性疾病多發性膽汁型肝硬化酒精性肝炎疫苗接種（流感、乙肝）多發性骨髓瘤腎移植或慢性腎衰竭瘧疾或絲蟲病其它（如孕婦）24抗體初篩檢

8、測中出現的問題抗體初篩檢測中出現的問題n假陰性：窗口期免疫移植換血輸血惡性腫瘤免疫功能喪失（B細胞功能缺失）其他（試劑或操作原因）25檢測檢測HIV的的ELISA診斷試劑的進展診斷試劑的進展代次代次年份年份 方法方法抗原來源抗原來源 特點特點 窗口期（天）窗口期（天）第一代1985 間接法純化的HIV病毒裂解抗原 對細胞培養蛋白成分發生交叉反應，假陽性較多，血清要高度稀釋，敏感性低，僅含HIV1 。 30-60第二代 1990 間接法 基因重組抗原和合成肽抗原 無細胞培養蛋白導致的假陽性，敏感性特異性均較第一代有所提高，只能測IgG.1992年批準HIV1/2 。28-35第三代1992雙抗原

9、夾心法 基因重組抗原和合成肽抗原 可檢測HIV不同抗體亞類（IgG、IgM、IgA等）敏感性、特異性均較高。1996年出現HIV1/2試劑 。14-25第四代 1998 雙抗原夾心法抗體捕獲重組、合成肽，P24抗原單克隆抗體 檢測HIV1/2抗體和P24抗原，稱HIV抗原/抗體試劑，可進一步降低輸血的殘余危險度。 10-1826HIV抗體確認試驗抗體確認試驗n免疫熒光試驗（IFA）n放射免疫沉淀試驗（RIPA）n免疫印跡（WB）（常用方法）27確認試驗報告方式確認試驗報告方式n陰性n陽性n不確定28HIVHIV確認試驗結果的解釋確認試驗結果的解釋免疫印跡法（WB）確認試驗結果：陽性：陽性：病人

10、確認確認感染HIV陰性：陰性：受檢者沒有受檢者沒有感染HIV不確定：不確定：受檢者必須在4周后再次采血進行確認試驗。29HIV抗體確認試驗流程圖抗體確認試驗流程圖免疫印跡法（HIV1/2混合型)HIV-1陽性反應不確定反應出現HIV-2指示條帶陰性反應陰性報告HIV-1陽性報告免疫印跡法（HIV-2)陽性反應陰性反應陰性報告不確定反應報告HIV-2血清陽性，必要時測核酸 每3個月隨訪一次，共2次，仍屬可疑，則作陰性報告。 如隨訪出現陽性反應，則報告陽性。30HIVHIV抗體檢測類型抗體檢測類型快速檢測快速檢測ELISAELISA免疫印跡（免疫印跡（WBWB）準確性準確性靈敏度靈敏度特異度特異度

11、非常高非常高幾乎幾乎100%100%99%99%非常高非常高幾乎幾乎100%100%99%99%因為特異度極高，因為特異度極高，用于檢測結果不確用于檢測結果不確定樣本的確認試驗定樣本的確認試驗成本成本+ +結果報告時間結果報告時間11小時小時33天天1010天天需要專門實驗室需要專門實驗室設備設備否否是是是是對檢驗人員技術對檢驗人員技術要求高要求高否否是是是是31二、母親為二、母親為HIV陽性所生嬰幼兒陽性所生嬰幼兒HIV實驗室檢測實驗室檢測32感染特點感染特點n母親HIV抗體經胎盤進入胎兒，出生時新生兒和嬰兒早期抗體陽性，不一定是感染。n出生時嬰兒體內的母親HIV抗體，80-90%在生后9-

12、12月消失，出生后18個月基本上全部消失。n18個月后兒童體內HIV仍然陽性，視為自身感染產生的抗體。n18個月以下HIV暴露嬰兒早期診斷推薦檢測HIV DNA，原因是HIV前病毒DNA，以細胞內前病毒感染狀態存在，所以它不受母親圍產期抗病毒治療和嬰幼兒預防性抗病毒治療的影響。33應用應用DNA-PCRDNA-PCR方法進行方法進行嬰兒感染早期診斷（嬰兒感染早期診斷（EIDEID）（）（1 1）采集干血斑（DBS）在嬰兒6 6周齡周齡時進行檢測。如果PCR檢測結果陽性，陽性，盡快再次采血再次進行DNA-PCR檢測，如果第二次PCR檢測結果陽陽性性，嬰兒確定感染HIV如果PCR檢測結果陰性，陰性

13、，嬰兒出生后3個月再次進行PCR檢測。34應用應用DNA-PCRDNA-PCR方法進行方法進行嬰兒感染早期診斷（嬰兒感染早期診斷（EIDEID）（）（2 2）出生后出生后3 3個月個月再次進行HIV DNA-PCR檢測如果PCR檢測結果陽性，陽性，盡快再次采血再次進行DNA-PCR檢測，如果第二次PCR檢測結果陽陽性性，嬰兒確定感染HIV。如果PCR檢測結果陰性，陰性，嬰兒視為未感染HIV，但在嬰兒滿12月齡時進行HIV抗體檢測（如有必要，在18月齡時再次進行檢測）。 檢測結果陰性的嬰兒接受母乳喂養，必須在停止母乳喂養后6周再次進行PCR檢測，以確保嬰兒沒有在母乳喂養期間感染HIV。35嬰兒嬰

14、兒HIVHIV感染早期診斷流程感染早期診斷流程36HIVHIV暴露嬰兒暴露嬰兒/ /兒童的兒童的HIVHIV抗體檢測抗體檢測n所有HIV感染母親所生兒童，在出生后6周或3個月未接受EID檢測者，應進行HIV抗體檢測。檢測時間：n滿12月齡 和n滿18月齡（必要時，見HIV抗體檢測流程）n出生后3個月EID檢測結果為陰性的兒童也應接受HIV抗體檢測 滿18月齡HIV抗體檢測陽性，可確認兒童HIV感染。37HIVHIV暴露兒童暴露兒童HIVHIV抗體檢測流程抗體檢測流程38收集、制備干血斑（收集、制備干血斑（DBSDBS）n什么是干血斑（什么是干血斑（DBSDBS）？）？n干血斑是n直接用濾紙收集

15、一滴全血進行干燥n用于血樣本的長時間儲存nDBS是用HIV DNA-PCR方法進行嬰兒HIV感染早期診斷檢測的最佳采血方法nHIV DNA和HIV抗體可穩定地保存在干血斑中n轉運方便：無需冷藏39如何采集干血斑血樣本（如何采集干血斑血樣本（1 1）n時刻遵循“普遍防護原則”采集足跟血n選擇合適的采血部位，皮膚消毒（圖片中陰影部位）n必要時保暖足跟n使用一次性消毒采血針n足跟置于心臟水平位或之下n不要“擠”足跟40如何采集干血斑血樣本（如何采集干血斑血樣本（2 2）1. 用消毒紗布擦掉第一滴血2. 收集此后滴出的大滴血液3. 快速、輕柔地用濾紙片的一面接觸血滴4. 讓血液滴到采血圈中 重復步驟1

16、-4，直到整個采血圈全部充滿血液。在卡片上標注患者的編號。每個兒童用一張新紙片。收集2-4個血斑。n不要：不要：n用濾紙片按壓出血部位n不要多次在同一個采血圈中涂抹血滴n在濾紙片兩面均滴入血滴41如何采集干血斑血樣本（如何采集干血斑血樣本（3 3）n采血圈充滿后：n避免碰觸或涂抹血滴n水平放置濾紙片，室溫下自然晾干（至少4小時）。n避免陽光直射，不要加熱。n不要將多張濾紙片疊放在一起，避免血滴接觸其他表面。n一旦血樣本完全干燥：n放入可封閉的塑料袋中n加入干燥劑和濕度指示卡n干燥、陰涼保存干血斑濾紙片包裝袋，直到轉送到相關實驗室42采集樣本所需要的設備采集樣本所需要的設備n血樣本采集卡血樣本采

17、集卡 片片( (濾紙片濾紙片) )；n可密封的塑料袋；可密封的塑料袋；n濕度指示卡；濕度指示卡；n干燥劑（干燥劑（1-2g/1-2g/袋）；袋）；43怎樣采集抗凝靜脈血怎樣采集抗凝靜脈血DBSDBSn靜脈血充分與靜脈血充分與EDTAEDTA混合；混合；n足跟血采集到帶有足跟血采集到帶有EDTAEDTA 抗凝劑子彈頭內；抗凝劑子彈頭內；n最好采集后立即制備干血斑；最好采集后立即制備干血斑；n血漿與血細胞分層的全血在血漿與血細胞分層的全血在 制備干血斑前，應輕柔地上下制備干血斑前，應輕柔地上下 顛倒采血管（避免血細胞破裂），顛倒采血管（避免血細胞破裂）， 使血液混勻后制備；使血液混勻后制備；44n

18、用移液槍加代濾芯槍頭用移液槍加代濾芯槍頭 移取移取50-80ul血液；血液；n槍頭對準印圈的中心緩槍頭對準印圈的中心緩 慢將血液滴于濾紙上；慢將血液滴于濾紙上；n避免有氣泡；避免有氣泡；45在包裝前在包裝前DBSDBS充分干燥充分干燥46怎樣包裝DBS易于保存最好一個樣本一個包裝，多個樣本一個包裝最好一個樣本一個包裝，多個樣本一個包裝時，樣本間用稱量紙隔開；時，樣本間用稱量紙隔開；放入可密封塑料袋中；放入可密封塑料袋中；加干燥劑；加干燥劑；加濕度指示卡；加濕度指示卡；標記包裝中的內容物并密封；標記包裝中的內容物并密封；47484950怎樣保存怎樣保存DBSDBSn將干燥后的將干燥后的DBSDB

19、S冷藏干燥冷藏干燥-20-20度保存；度保存；n避免陽光暴曬和加熱；避免陽光暴曬和加熱；51怎樣為運輸樣本包裝怎樣為運輸樣本包裝第一層包裝好的第一層包裝好的DBSDBS 放入結實的紙袋中，放入結實的紙袋中，放入相應的文件（采樣單），放入相應的文件（采樣單）， 將上述兩樣放入郵寄信封將上述兩樣放入郵寄信封 中并密封，中并密封，52n有效的樣本有效的樣本血液充分吸收透過濾紙，填滿印圈，血液充分吸收透過濾紙，填滿印圈，不要在一個圈上重復采血，避免觸摸或涂抹血斑。不要在一個圈上重復采血，避免觸摸或涂抹血斑。535455n樣本在干燥小于樣本在干燥小于4小時前即寄出小時前即寄出1、吸附血液過多；、吸附血液

20、過多；2、雙面貼、雙面貼56干血斑送檢 1、填寫送樣表2、單位：北京海淀區婦幼保健院檢驗科 地址：北京海淀區蘇州街53號 聯系人：盧新（主任） 楊海珊、王孟濱 電話9614 郵編：100080 郵箱：hdfyH57三、三、HIVHIV感染的實驗室監測感染的實驗室監測58HIVHIV感染的實驗室監測感染的實驗室監測實驗室監測主要用于：決定開始抗病毒治療還是預防性應用抗病毒藥物；效果監測:抗病毒治療效果；毒性監測:抗病毒藥物引起的毒副作用。59孕產婦抗病毒治療的相關檢測n用藥前，進行CD4+T淋巴細胞計數、病毒載量檢測及其他相關檢測（包括血常規、尿常規、肝功能、腎功能、

21、血脂、血糖等）。 n用藥過程中，每三個月進行1次CD4+T淋巴細胞計數及其他相關檢測（同前）。 n孕晚期，進行1次病毒載量檢測，并在分娩前獲得檢測結果。 60HIVHIV感染孕產婦常規實驗室檢測感染孕產婦常規實驗室檢測檢測檢測檢測檢測對象對象原因原因臨床指導臨床指導CD4+ T淋巴細胞計數所有HIV感染孕產婦基線評估是否需要抗病毒治療孕產婦：抗病毒治療：CD4 350個細胞/mm3預防應用抗病毒藥物：CD4 350個細胞/mm3全血細胞計數（CBC）所有HIV感染孕產婦AZT可引起貧血或白細胞計數降低如果Hb2年雖性傳播危險性較低，但妊娠時仍可傳染給胎兒。 n血液傳播：輸血、吸毒、紋身、醫源性

22、傳播等。68梅毒實驗室檢測方法梅毒實驗室檢測方法 暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡病原學檢測病原學檢測 鍍銀染色鏡檢鍍銀染色鏡檢 非特異性抗體：即抗心磷脂抗體等（反應素）非特異性抗體：即抗心磷脂抗體等（反應素） 血清學檢測血清學檢測 特異性梅毒螺旋體抗體特異性梅毒螺旋體抗體：69暗視野顯微鏡70鍍銀染色鏡檢 71病原學檢測特點病原學檢測特點n直接鏡檢找梅毒螺旋體，可確診梅毒。n具有快速、方便易操作的特點。 n早期診斷、及時治療預后和盡早切斷傳染源都具有十分重要的意義。 n如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。72梅毒血清學檢測梅毒血清學檢測1.1.非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測非特異性抗體）

23、非梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測非特異性抗體）nRPR（快速血漿反應素環狀卡片試驗）nTRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗）nVDRL（性病研究實驗室試驗）2.2.梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測特異性梅毒螺旋體梅毒螺旋體抗原血清學試驗（檢測特異性梅毒螺旋體抗體）抗體）nTPPA（梅毒螺旋體顆粒凝集試驗）:WHO公認的“金標準”nELISA（酶聯免疫吸附試驗） nPOC（快速檢測、一站式檢測）73梅毒血清學試驗基本實驗室設備梅毒血清學試驗基本實驗室設備檢方法檢方法檢測樣本類型檢測樣本類型必要設備必要設備血清血清血漿血漿全血全血RPR/TRUSTRPR/TRUST水平旋轉儀TPPATPPA震蕩儀EL

24、ISAELISA酶標儀、洗板機POCPOC檢測檢測無需特殊設備74非梅毒螺旋體抗體試驗（一）非梅毒螺旋體抗體試驗（一）n梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅速對螺旋體表面脂質作出免疫應答，在3-4 周產生抗類脂質抗原的抗體（反應素），并且在不斷升高。抗體主要是IgM和IgG。n除梅毒外，其他醫學情況如結核、瘧疾、妊娠和風濕關節炎、狼瘡及硬皮病等自體免疫學疾病也可導致假陽性結果。假陽性結果。n未經治療的病人，其血清內的反應素可長期存在。經正規治療后，反應素可以逐漸減少至轉為陰性。 75非梅毒螺旋體抗體試驗（二）非梅毒螺旋體抗體試驗（二）抗體滴度通常與疾病活動度有關。治療后（可能幾個月）非梅毒螺旋體抗原

25、血清學試驗通常轉變為不反應；如果用同一種實驗，相同試驗滴度4倍變化（如從1:16下降到1:4或從1:8上升到1:32）為臨床顯著變化；有些病人，抗體滴度可始終處于較低水平，有時可持續終生（血清固定）。注意：注意：病人血清學監測應在同一個實驗室使用同一種檢測方法（RPR、TRUST）進行連續多次檢測；RPR和TRUST方法均有效，但檢測的滴度結果不能直接進行比較。76非梅毒螺旋體抗體試驗特點非梅毒螺旋體抗體試驗特點快速、簡便、便宜、敏感性和特異性較高快速、簡便、便宜、敏感性和特異性較高；早期梅毒感染后早期梅毒感染后1-21-2周內可呈陰性；周內可呈陰性；出現硬下疳后出現硬下疳后1-21-2周變為

26、陽性。周變為陽性。二期梅毒時也可出現陰性反應。前帶現象二期梅毒時也可出現陰性反應。前帶現象 ：血清中存：血清中存在在高濃度的抗體時出現的弱陽性、不典型或陰性反應的高濃度的抗體時出現的弱陽性、不典型或陰性反應的結果結果，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進，而臨床上又象二期梅毒，此時將血清稀釋后再進行試驗，出現了陽性結果。行試驗，出現了陽性結果。可用于：篩查樣本；評估對治療的反應；鑒別復發還是可用于：篩查樣本；評估對治療的反應；鑒別復發還是再次感染。再次感染。77治療后非梅毒螺旋體抗體試驗治療后非梅毒螺旋體抗體試驗 抗體滴度變化的臨床意義抗體滴度變化的臨床意義一期梅毒和二期梅毒：成功治療，

27、抗體滴度應n3個月后下降2倍n6個月后下降4倍一期梅毒：1年后抗體滴度轉陰二期梅毒：2年后抗體滴度轉陰晚期梅毒：治療后抗體滴度緩慢下降50%的病人2年后抗體滴度仍為陽性78RPR(加速血漿反應素環狀卡片試驗加速血漿反應素環狀卡片試驗) 基本原理：在心磷脂、卵磷脂和膽固醇等組成的抗原中加入活性碳顆粒活性碳顆粒，與待檢血清中的反應素結合，形成肉眼可見的黑色黑色絮狀物絮狀物TRUSTTRUST（甲苯胺紅試驗（甲苯胺紅試驗) )特點：特點： 其原理和成分與其原理和成分與RPRRPR試驗相同試驗相同 用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒 其余的特點均與其余的特點均與RPRRPR相同相

28、同79n定性試驗 (1)加樣：吸取50微升血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈中均勻地涂布在整個圈中。 (2)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原。 (3)反應：將卡片置水平旋轉儀旋轉置水平旋轉儀旋轉8分鐘分鐘(1005)轉/分鐘，立即在亮光下觀察結果80n凝集反應強度分級：3+4+：圓圈內出現中到大的黑色絮狀物，液體清亮。2+：圓圈內出現小到大的黑色絮狀物，液體較清亮。1+：圓圈內出現小的黑色絮狀物，液體渾濁。：圓圈內僅見黑色集中于中央一點或均勻分散。81操作操作步驟步驟孔孔 號號 1 2 3 4 5 6 7 81 2 3 4 5 6 7 8稀釋倍數稀釋倍數 原倍原倍 1:2

29、 1:4 1:8 1:16 1:32 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 陽性陽性K K 陰性陰性K K生理鹽水生理鹽水(ul) (ul) - - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 - -樣樣 品品(ul) (ul) 50.050.0 50.050.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 棄棄50.0 - 50.0 - - -陽性血清陽性血清(ul) - - - - - - (ul) - - - - - - 50.050.0 - -陰性血清陰性血清(ul) - - - -

30、 - - - (ul) - - - - - - - 50.050.0抗原懸液抗原懸液(ul) (ul) 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.716.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7828384確保非梅毒螺旋體抗原血清學試確保非梅毒螺旋體抗原血清學試驗質量的關鍵點驗質量的關鍵點1.按照標準操作程序（SOPs）進行操作2.推薦使用評價特性較好的試劑*3.按照統一的標準報告結果4.開展實驗室質控（QC）和參加室間能力驗證（PT）* 由中國疾病預防控制中心性病中心國家參比實驗室提供85梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原

31、血清學試驗檢測梅毒螺旋體抗原特異性抗體可用于確認非梅毒螺旋體抗原血清學試驗的陽性結果，排除其假陽性。陽性結果可持續存在，即使治療后仍可為陽性。* 梅毒螺旋體抗原血清學試驗與疾病的活動度無關，不能用于鑒別現癥感染還是既往感染，也不能用于判斷療效。* 一期梅毒治療病人中，15%-25%可在2-3年后轉為血清學陰性86TPPAn基本原理：用超聲裂解梅毒螺旋體制備抗原，致敏明膠顆粒，其致敏粒子與待檢血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體結合，產生肉眼可見的凝集。87操作步驟1. 試劑準備：試驗前將試劑和待檢標本恢復到室溫。 2. 加稀釋液：每份樣本做4孔，加標本稀釋液加至微量反應板孔內，第1孔100微升，第2

32、4孔各25微升。3. 樣本稀釋：取血清25微升加至第1孔，混勻后取25微升至第2孔，混勻后取25微升至第3孔，混勻后取25微升至第4孔，混勻后棄去25微升。4. 加對照液：第3孔加未致敏顆粒25微升，第4孔加致敏顆粒25微升。5. 混合：將反應板置振蕩器振蕩30秒。6.反應：置有蓋濕盒，孵育2 h，或放4冰箱過夜觀察結果。88結果判斷1.觀察加未致敏顆粒的第3孔，不出現凝集為有效試驗。2. 觀察凝集反應強度：分級如下。 4+： 顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊。 3+： 顆粒光滑覆蓋大部分孔底。 2+： 顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環。 1+： 顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒

33、環。 ： 顆粒沉集孔底，中央形成一小點。 一： 顆粒緊密沉積孔底中央。8990RPR與TPPA的關系nRPR(初篩） TPPA(確證試驗）關系RPR是為TPPA排除是既往感染還是現癥感染；TPPA是為RPR排除是試驗假陽性還是現癥感染；兩者互為現癥梅毒的確認試驗。91妊娠期梅毒檢測妊娠期梅毒檢測n所有孕產婦應進行梅毒篩查檢測：n孕期盡早（如果可能，在孕早期時）以及 n如果在分娩前/臨產時沒有篩查檢測結果，在分娩時檢測。n所有篩查檢測結果陽性的孕產婦都應用另外一類檢測方法進行復檢確認是否為現癥梅毒n所有產婦及所生嬰兒出院前，產婦梅毒檢測結果都應記錄在病歷中，以確保需要時給予治療92 孕產婦梅毒檢

34、測流程孕產婦梅毒檢測流程非梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗孕產婦治療后，隨訪監測非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗每3個月進行非梅毒螺旋體抗原血清學試驗如果需要進行治療報告：非梅毒螺旋體抗原血清學試驗陰性陰性報告：兩種檢測均陽性兩種檢測均陽性治療病人治療病人報告： 梅毒螺旋體抗原血清學試驗陰性陰性報告：非梅毒螺旋體抗原血清學試驗陽性陽性梅毒螺旋體抗原血清學試驗陰性陰性報告：梅毒螺旋體抗原血清學試驗陽性陽性非梅毒螺旋體抗原血清學試驗陰性陰性陽性反應陰性反應陰性反應陽性反應陽性反應或9394HIVHIV感染病人的梅毒血清學試驗感染病人的梅毒

35、血清學試驗一些HIV感染病人，其梅毒血清學試驗結果不典型，包括：滴度超常高或超常低；滴度不斷變動。如果臨床表現提示早期梅毒，而血清學試驗結果與此不一致，考慮：病灶活檢 或暗視野顯微鏡檢查注意：注意：對于大多數HIV感染病人而言，梅毒血清學試驗是診斷梅毒感染、隨訪觀察療效準確、可靠的檢測方法95梅毒血清學試驗報告方式梅毒血清學試驗報告方式n如果RPR陽性，要做稀釋滴度。 報告：RPR為陽性（如滴度1：32） n如TPPA陽性：報告TPPA陽性n如ELISA陰性: 報告ELISA陽性96梅毒血清學檢測結果的解釋梅毒血清學檢測結果的解釋非梅毒螺非梅毒螺旋體試驗旋體試驗梅毒螺旋梅毒螺旋體試驗體試驗臨床

36、參考意義臨床參考意義+ -RPRRPR假陽性假陽性 考慮其他醫學狀況考慮其他醫學狀況* *+ +可能為現癥梅毒可能為現癥梅毒- +既往感染既往感染 極早期梅毒極早期梅毒部分晚期梅毒部分晚期梅毒- -排除梅毒感染排除梅毒感染 窗口期窗口期 由于免疫缺陷，也可發生于艾滋病晚期由于免疫缺陷，也可發生于艾滋病晚期備注：* 包括結核、瘧疾、風濕性關節炎或妊娠。 以上診斷標準不適宜診斷胎傳梅毒和神經梅毒 檢驗結果要結合病史、臨床癥狀，才能作出正確診斷檢驗結果要結合病史、臨床癥狀，才能作出正確診斷97梅毒實驗室檢測的特點梅毒實驗室檢測的特點 臨床表現臨床表現 取材部位取材部位 檢查方法檢查方法一期梅毒一期梅

37、毒 潰瘍潰瘍 淋巴結淋巴結 病原學檢查病原學檢查 血液血液 血清學檢查血清學檢查 二期梅毒二期梅毒 皮損皮損 淋巴結淋巴結 病原學檢查病原學檢查 血液血液 血清學檢查血清學檢查 潛伏梅毒潛伏梅毒 血液血液 血清學檢查血清學檢查 三期梅毒三期梅毒 血液血液 血清學檢查血清學檢查 神經梅毒神經梅毒 血液血液 血清學檢查血清學檢查 腦脊液腦脊液 細胞、蛋白量檢查、細胞、蛋白量檢查、VDRL等等98二、暴露嬰兒的梅毒檢測二、暴露嬰兒的梅毒檢測99梅毒暴露嬰兒先天梅毒檢測梅毒暴露嬰兒先天梅毒檢測 因母體非梅毒螺旋體和梅毒螺旋體IgG抗體可通過胎盤，所以應謹慎地對嬰兒梅毒血清學試驗結果進行解釋。嬰兒需要接

38、受預防性治療還是規范的抗梅毒治療應根據：母親確診梅毒感染母親治療情況嬰兒梅毒感染的臨床表現、實驗室檢查或x線檢查結果母親及嬰兒非梅毒螺旋體抗原血清學試驗滴度水平的比較（盡可能在同一個實驗室使用相同的試驗方法）100先天梅毒的診斷標準先天梅毒的診斷標準梅毒暴露嬰兒具有以下條件之一： 任何先天梅毒臨床表現；暗視野顯微鏡檢梅毒螺旋體陽性（+）；梅毒螺旋體IgM抗體陽性；RPR/TRUST檢測陽性，滴度比母親分娩前最近一次滴度高4倍及以上；RPR/TRUST監測隨訪中，任何一次滴度不下降或反而上升；滿18月齡后，TPPA檢測陽性。*嬰兒RPR檢測不能使用臍帶血不能使用臍帶血，因其易被母體血液污染，從而

39、出現假陽性結果。101第三部分第三部分 乙肝實驗室檢測乙肝實驗室檢測102乙肝病原學乙肝病原學n乙型肝炎病毒結構是由一個不完全雙鏈DNA組成，約3200個氨基酸。乙型肝炎病毒基因結構可分為四組可編碼蛋白基因。即： S基因：編碼外膜蛋白。 C基因：編碼核心抗原和e抗原。 P基因：編碼DNA聚合酶。 X基因：編碼X蛋白。 103乙肝病原學乙肝病原學 S基因區可分為三段：前S1區、前S2區、和S區。乙型肝炎病毒為嗜肝DNA 病毒，感染對象為肝細胞。nHBV的抵抗力較強，但65 10小時、煮沸10分鐘或高壓蒸氣均可滅活。環氧乙烷、戊二醛、過氧乙酸和碘伏也有較好的滅活效果。 對干燥、紫外線均有耐受性。1

40、04乙肝傳播途徑乙肝傳播途徑n血液、體液（唾液、精液、陰 道分泌物、乳汁、淚液、尿液） n母嬰 n輸血及血制品 n性傳播 n皮膚、粘膜 *HBV不經呼吸道和消化道傳播 ，流行病學和實驗研究亦未發現HBV能經吸血昆蟲（蚊、臭蟲等）傳播。105 HBV的母嬰阻斷的母嬰阻斷n對乙肝表面抗原陽性孕產婦所生新生兒，在出生后24小時內注射： 乙肝免疫球蛋白 + 乙肝疫苗n阻斷率能達到85%以上。106 乙肝實驗室檢測方法乙肝實驗室檢測方法n電化學發光免疫分析法ECLIA法n酶聯免疫吸附試驗法ELISA法n金標法n放免法nPCR等。 * ECLIA法測定靈敏度為008ngml；ELISA法測HBsAg靈敏度為07ngml，金標法靈敏度1ngml。107臨床上診斷