1、離子色譜法檢測化妝品中L羥脯氨酸方法研究離子色譜法檢測化妝品中L羥脯氨酸方法討論 摘 要：建立了一種離子色譜法測定含膠原蛋白類化妝品中L-羥脯氨酸的方法。接受Dionex? AminoPac? PA10 2×250mm分析柱，電化學檢測器，流淌相為水- NaOH溶液-NaAc溶液，梯度洗脫，流速為0.25mL/min，柱溫為30。結果說明，在5 g/mL100 g/mL范圍內，L-羥脯氨酸濃度與峰面積呈良好線性關系，相關系數R為0.9998，檢測限和定量限分別為0.15g/mL和0.5 g/mL。平均加標回收率為95.8%，RSD為3.4% n=6。此方法簡便、精確，可用于檢測膠原蛋

2、白類化妝品的L-羥脯氨酸含量，為化妝品的常規檢測提供技術參考。 關鍵詞：L-羥脯氨酸；化妝品；離子色譜膠原蛋白是膠原的水解產物，是動物結締組織中主要成分，也是哺乳動物體內含量最多、分布最廣的自然功能性蛋白，占蛋白質總量的25%30%1-2。膠原蛋白具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物功能活性，因此，在食品、醫藥、組織工程、化妝品等領域獲得廣泛應用3-4。膠原蛋白在化妝品中添加量較低，樣品基質冗雜，前處理繁瑣，因此其定量檢測始終是化妝品成效評價及質量監控的難點。L-羥脯氨酸L-hydroxyproline，L-Hyp是一種非必需氨基酸，是膠原組織的主要成分之一，且為膠原中特有的氨基酸，約占

3、膠原氨基酸總量的10%，膠原蛋白含量可以依據L-Hyp含量乘以相應系數得到，因此，檢測L-Hyp可反映膠原蛋白指標狀況，例如，目前食品中膠原蛋白檢測主要以L-Hyp作為有效指標5-6。目前L-Hyp的測定方法主要為氨基酸自動分析儀、液相色譜/質譜聯用法，但是該類設備相對昂貴。此外還有比色法、高效液相色譜法等，然而前者樣品處理相對較為繁瑣，且易出現假陽性現象，后者則需要對L-Hyp進行柱前衍生化，同樣繁瑣。因此，本文建立了一種離子色譜法IC檢測化妝品中L-Hyp的方法，幸免了昂貴儀器的使用，同時也簡化了檢測流程，為化妝品中膠原蛋白類含量確實定提供了技術支持，進而為化妝品生產過程中的質量操縱以及后

4、期的成效評價服務。1 試驗部分1.1 主要儀器及試劑Dionex ICS3000離子色譜儀配電化學檢測器；AminoPac PA10色譜柱帶愛護柱Thermo Fisher；Millipore超純水儀；氮吹儀。L-羥脯氨酸標準品純度>99%；NaOHAlfa Aesar 50%氫氧化鈉；醋酸鈉sigma-aldrich；濃鹽酸12 mol/L，德國Merck公司。1.2 試驗方法1.2.1 樣品前處理稱取樣品0.5 g精確值0.1 mg至安瓿瓶中，加入10 mL 6mol/L鹽酸，氮吹3min后快速熱封；將安瓿瓶置于110 恒溫烘箱中水解22 h，水解產物轉移至50 mL容量瓶，用超純水

5、定容至刻度。取1 mL定容后的水解液于40 氮吹至干，加入12 mL超純水繼續氮吹至干，最終用1 mL 0.1mol/L鹽酸復溶，0.22 m濾膜過濾后上機。1.2.2 標準曲線制備周密稱取L-羥脯氨酸標準品50 mg于50mL容量瓶中，用0.1mol/L鹽酸定容至刻度得標準品儲備液。分別取50L，100L，200L，500L，1000L標準儲備液于10mL容量瓶中，用0.1mol/L鹽酸定容，制得系列濃度為5g/mL，10g/mL，20g/mL，50g/mL，100g/mL的標準溶液。1.2.3 色譜條件色譜柱：AminoPacPA10氨基酸專用分析柱2×250 mm，愛護柱2&#

6、215;50mm；流淌相：A：超純水；B：250mmol/LNaOH溶液；C：1mol/L醋酸鈉溶液；流速：0.25mL/min；進樣量：25L；柱溫：30；洗脫程序見表1。2 結果與商量2.1 方法考察2.1.1標準曲線、檢出限和定量限按1.2.2制備標準曲線，上機檢測。以標準品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，線性回來方程為：y=4.7226x+79.891，R2=0.9998。結果說明，L-羥脯氨酸在5g/mL100g/mL范圍內呈良好線性關系，見圖1。2.1.2 重復性取20 g/mL標準品溶液6份，按1.2.1方法處理后上機檢測，結果見表3，測得結果的相對標準偏差RSD為2.

7、62%，說明該方法重復性良好。2.1.3 樣品加標回收率選取已知L-羥脯氨酸含量的某市售化妝品，周密稱取6份，分別加入20?g/mL標準品溶液1mL，充分混合后按1.2.1方法處理后上機檢測，記錄峰面積，依據線性方程計算樣品中L-羥脯氨酸含量，得出相應回收率。結果說明，L-羥脯氨酸回收率在91.3%98.9%，平均回收率為95.8%，相應的測定結果的RSD為3.4%n=6。該方法精確度良好。2.2 樣品測試選取8個市售含膠原蛋白類化妝品樣品，按本方法進行檢測，結果見表4。羥脯氨酸作為膠原和膠原蛋白中的特殊蛋白質，其含量一般約為膠原氨基酸總量的10%，其含量是目前食品、保健品及動物組織中膠原和膠原蛋白定量的常用換算方法。因此，本方法以10為折算系數，計算化妝品中膠原蛋白含量見表5。從表中觀察，這些聲稱含有膠原蛋白的樣品中所含膠原蛋白含量參差不齊，甚至有的含量為0，因此，消費者選購時需