1、分離技術生物制藥工藝學第四章到第十一章第四章 固相析出分離法改變溶液條件，使溶質以固體形式從溶液中分出的操作技術稱為固相析出分離法。析出物為晶體時稱為結晶；析出物為無定形固體稱為沉淀法。固相析出法主要有鹽析法，有機溶劑沉淀法，等電點沉淀法，結晶法等。鹽析法是利用各種生物分子在濃鹽溶液中溶解度的差異，通過向溶液中引入一定數量的中性鹽，使目的物或雜蛋白以沉淀析出，達到純化目的的方法。鹽析的機制：高濃度的中性鹽溶液中存在著大量的帶電荷的鹽離子，它們能夠中和生物分子表面的電荷，使之賴以穩定的雙電層受損，從而破壞分子外圍的水化層；另外，大量鹽離子自身的水合作用降低了自由水的濃度，從另一方面摧毀了水化層，

2、使生物分子相互聚集而沉淀。有機溶劑沉淀法 向水溶液中加入一定量親水性的有機溶劑，降低溶質的溶解度，使其沉淀析出的分離純化方法。主要機理：（1)親水性有機溶劑加入溶液后降低了介質的介電常數，使得溶質分子之間的靜電引力增加，聚集形成沉淀。(2)水溶性有機溶劑本身的水合作用降低了自由水的濃度，壓縮了親水溶質分子表面原有水化層的厚度，降低了它的親水性，導致脫水凝集。等電點沉淀法 兩性電解質，在溶液pH處于等電點（pI）時分子表面凈電荷為零，導致賴以穩定的雙電層及水化膜的削弱或破壞，分子間引力增加，溶解度降低。調節溶解的pH值，使兩性溶質溶解度下降，析出沉淀的操作。結晶法改變溶液的某些條件，使其中的溶質

3、以結晶態析出的過程稱作結晶。（一）鹽析結晶法這是生化制藥中應用最多的結晶方法。其作用是通過向結晶溶液中引入中性鹽，逐漸降低溶質的溶解度使其過飽和，經過一定時間后晶體形成并逐漸長大。（二）透析結晶（三）有機溶劑結晶（四）等電點結晶（五）溫度誘導結晶第五章 吸附法吸附是物質分子在兩相界面上濃度的增加。由于界面上的分子同時受到不相等的兩相分子的作用力，因此界面分子的力場是不飽和的，即存在一種固體的表面力，它能從外界吸附分子、原子或離子，并在吸附劑表面附近形成多分子層或單分子層。我們稱物質從流動性（氣或液相）濃縮到固體表面從而達到分離的過程稱為吸附作用。把在表面上能發生吸附作用的固體稱為吸附劑；將被吸

4、附的物質稱為吸附物。預處理上樣吸附洗雜洗脫再生常用吸附劑：1)活性炭是一種吸附能力很強的非極性吸附劑，其吸附作用在水溶液中最強，在有機溶劑中較弱，吸附能力的順序：水乙醇甲醇乙酸乙酯丙酮氯仿。2)人造沸石人造沸石是一種人工合成的無機陽離子交換劑。用于細胞色素C的分離。3)磷酸鈣凝膠在蛋白質的分離、精制中，較為常用的吸附劑為磷酸鈣凝膠。（羥基磷灰石）活性部位為鈣離子。4)白陶土5)氫氧化鋁凝膠用于蛋白質及酶的分離。6)氧化鋁活性氧化鋁是最常用的一種吸附劑，特別適于親脂性成分的分離，廣泛地用于在醇，酚，生物堿，染料，甾體化合物，苷類，氨基酸，蛋白質以及維生素等物質的分離。7)硅膠最常用8)滑石粉 惰

5、性 助濾劑9)硅藻土 惰性 助濾劑10)皂土11)聚酰胺粉12)大孔網格聚合物吸附樹脂 極性，弱極性，非極性大孔吸附樹脂強酸性，弱酸性，強堿性，弱堿性等第六章 離子交換法離子交換法是利用溶液中各種帶電粒子與離子交換劑之間結合力的差異進行物質分離的操作方法。帶電粒子與離子交換劑間的作用力是靜電力。它們結合是可逆的，在一定條件下能夠結合，條件改變后也能被釋放出來。離子交換劑由惰性的不溶性載體，功能基團和平衡離子組成。XXXXXXYXZXYZZYYYXZXZXZZXXXYZYZXXXXXXXOHnX平衡上樣吸附洗雜洗脫第七章 凝膠層析它是將樣品化合物通過一定孔徑的凝膠固定相，用于流經體積的差異，使不

6、同分子量的組成得以分離的層析。VC大分子小分子ABCV0ViGPC測分子量Y=A+BX第八章 親和層析利用生物大分子特異性親和力而設計的層析技術稱為親核層析。在親和層析中起可逆結合的特異性物質稱為配基（Ligand），與配基結合的層析介質稱為載體（Matrix）親和層析的設計原理和過程：1)配基固定化 選擇合適的配基與不溶性的支撐載體偶聯，或共價結合成具有特異性親和性分離介質。2)吸附樣品 親和層析介質選擇性吸附酶或其它生物活性物質，雜質與層析間沒有親和作用，故不能被吸附而被洗滌去除。3)樣品洗脫 選擇適宜的條件使被吸附的親和介質上的酶或其它生物活性物質洗脫。LSLLSS S雜質SSLLLLL

7、配基樣品配基固定化吸附樣品樣品洗脫第九章 離心技術沉降作用懸浮液靜置時，在重力作用下，密度大于周圍溶液的固體顆粒逐漸下沉，成為沉降作用。離心技術在離心力場作用下，加速懸浮液中固體顆粒沉降速度的方法稱為離心技術。相對離心力通常用離心力與重力的比值表示離心機的離心能力，也稱分離因素，用符號g或g表示。mgrmNRCF3600422第十章 膜分離技術分離范圍分離動力一般過濾1m壓力差微孔過濾0.01 1 m壓力差透析5100分子擴散超級過濾5100壓力差反滲透5壓力差電滲析0.1g）HPLC的分離依據是樣品中各組分之間帶電性，極性，疏水性，分子大小，等電點，親和性，螯合性等理化性質的差異。將樣品導入柱頭，流動相在高壓泵的作用下，其流量被準確地控制通過色譜柱，樣品中各組分在色譜柱中形成查速遷移，按時間先后流出層析柱，然后進行檢測和分部收集。泵色譜柱檢測器色譜數據處理溶劑按固定相對樣品的保留機理，HPLC大致可分為液固色譜，鍵合相色譜，離子交換色譜，離子對色譜，凝膠色譜，疏水色譜，親和色譜，聚焦色譜，金屬螯合親和色譜等。色譜重要參數