1、醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院吳智兵吳智兵醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用l對醒腦開竅法的認識對醒腦開竅法的認識l醒腦開竅法為什么可廣泛應用于中風醒腦開竅法為什么可廣泛應用于中風l醒腦開竅代表藥的實驗研究醒腦開竅代表藥的實驗研究醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用l對醒腦開竅法的認識對醒腦開竅法的認識l醒腦開竅法為什么可廣泛應用于中風醒腦開竅法為什么可廣泛應用于中風l醒腦開竅代表藥的實驗研究醒腦開竅代表藥的實驗研究醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用關于開竅法：關于開竅法：l是通過開閉

2、通竅以蘇醒神志的治療方法是通過開閉通竅以蘇醒神志的治療方法l分涼開和溫開兩大類分涼開和溫開兩大類醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用具體方法：具體方法：l清熱開竅安宮牛黃丸、紫雪丹、至寶丹清熱開竅安宮牛黃丸、紫雪丹、至寶丹l溫通開竅蘇合香丸溫通開竅蘇合香丸l辟穢開竅行軍散辟穢開竅行軍散l豁痰開竅菖蒲郁金湯豁痰開竅菖蒲郁金湯l通腑開竅大承氣湯通腑開竅大承氣湯l通瘀開竅通竅活血湯通瘀開竅通竅活血湯l直接開竅法直接開竅法芳香開竅芳香開竅安宮牛黃丸安宮牛黃丸蘇合香丸蘇合香丸君君 麝香麝香.冰片冰片芳香開竅醒神芳香開竅醒神君君 麝香麝香.冰片冰片.蘇合蘇合香香.安息香安息香芳香開竅芳香開竅醒

3、神醒神牛黃牛黃清熱、化痰、定驚清熱、化痰、定驚臣臣 犀角犀角.黃連黃連.黃黃芩芩.梔子梔子助牛黃清熱助牛黃清熱臣臣 木香木香.檀香檀香.沉香沉香.乳香乳香.丁香丁香.香附香附行氣解郁行氣解郁辟穢散寒辟穢散寒郁金郁金助麝香開竅助麝香開竅佐佐 朱砂朱砂.珍珠珍珠.金金箔箔安神安神佐佐 蓽茇蓽茇.白術白術溫中補氣溫中補氣雄黃雄黃助牛黃解毒助牛黃解毒朱砂朱砂安神安神使使 蜂蜜蜂蜜和胃調中和胃調中犀角、訶子犀角、訶子反佐反佐醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用麝香（臍香，當門子，麝臍香）始載麝香（臍香，當門子，麝臍香）始載于于神農本草經神農本草經，被列為上品。，被列為上品。本草求真本草求真：

4、“辛溫芳烈，開關利辛溫芳烈，開關利竅。無處不到，如邪氣著人淹閉不起，竅。無處不到，如邪氣著人淹閉不起，則關竅閉塞，登時眼翻手握。僵仆昏則關竅閉塞，登時眼翻手握。僵仆昏地，故必用此辛香自內達外，則毫毛地，故必用此辛香自內達外，則毫毛骨節(jié)俱開，而邪始從外出骨節(jié)俱開，而邪始從外出”本草綱目本草綱目：“蓋麝香走竄，能通蓋麝香走竄，能通諸竅之不利，開經絡壅遏。若諸風、諸竅之不利，開經絡壅遏。若諸風、諸氣、諸血、諸痛、驚癇、癥瘕諸病，諸氣、諸血、諸痛、驚癇、癥瘕諸病，經絡壅閉，孔竅不利者，安得不用為經絡壅閉，孔竅不利者，安得不用為引導以開之、通之耶？引導以開之、通之耶？”麝香麝香冰片（龍腦，梅片，龍腦香，

5、梅冰片（龍腦，梅片，龍腦香，梅花腦），為龍腦香料植物龍腦香花腦），為龍腦香料植物龍腦香樹脂的加工品，始載于樹脂的加工品，始載于新修本新修本草草。味辛苦，微寒無毒，性善走竄，味辛苦，微寒無毒，性善走竄，無往不達。無往不達。本草綱目本草綱目：“通諸竅，散郁通諸竅，散郁火?；??！?” 本草衍義本草衍義 “ “獨行則勢弱、獨行則勢弱、佐使則有功佐使則有功”。冰片冰片醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用l醒腦開竅法介紹醒腦開竅法介紹l醒腦開竅法為什么可廣泛應用于中風醒腦開竅法為什么可廣泛應用于中風l醒腦開竅代表藥的實驗研究醒腦開竅代表藥的實驗研究中風病因病機中風病因病機l積損正衰l飲食不節(jié)l

6、情志所傷l外邪入中病因病因風風火火痰痰虛虛瘀瘀病機病機中風中風發(fā)病發(fā)病中經絡中經絡中臟腑中臟腑閉證閉證脫證脫證中風病因病機中風病因病機l水瘀互結水瘀互結l毒損腦絡毒損腦絡l神竅閉阻神竅閉阻中風病機新觀點中風病機新觀點意識產生的機制意識產生的機制l意識水平意識水平開關系統(tǒng)開關系統(tǒng) 特異上行投射系統(tǒng)（影響小）特異上行投射系統(tǒng)（影響?。?非特異上行投射系統(tǒng)（影響大）非特異上行投射系統(tǒng)（影響大） 腦干網狀上行激活系統(tǒng)腦干網狀上行激活系統(tǒng) 腦干網狀上行抑制系統(tǒng)腦干網狀上行抑制系統(tǒng)l意識內容意識內容大腦皮層的高級活動大腦皮層的高級活動 記憶、思維、定向、情感、精神、記憶、思維、定向、情感、精神、視、聽、語

7、言、技巧性運動、復雜視、聽、語言、技巧性運動、復雜反應反應上行投射系統(tǒng)上行投射系統(tǒng)腦干上部網狀腦干上部網狀結構效應區(qū)結構效應區(qū)丘腦非特丘腦非特異性核團異性核團邊緣系統(tǒng)邊緣系統(tǒng)舊皮質舊皮質新大腦皮質新大腦皮質被蓋中央腹側束被蓋中央腹側束被蓋中央背側束被蓋中央背側束腦干網狀結腦干網狀結構聯(lián)絡區(qū)構聯(lián)絡區(qū)特異性上行特異性上行投射系統(tǒng)投射系統(tǒng)下丘腦后區(qū)下丘腦后區(qū)中央灰質中央灰質腦干下部網腦干下部網狀結構狀結構尾狀核尾狀核側支側支紅色：激活通路紅色：激活通路黑色：抑制通路黑色：抑制通路中風病因病機中風病因病機風風閉閉中風之后便無風，風過則凋敝中風之后便無風，風過則凋敝l狹義的閉竅僅指思維、意識、精神狀態(tài)、

8、認知能力等功狹義的閉竅僅指思維、意識、精神狀態(tài)、認知能力等功能障礙。能障礙。l廣義之廣義之“閉竅閉竅”則泛指由腦神受損所導致的一切外在生則泛指由腦神受損所導致的一切外在生命活動的障礙，中風病無論有無神志障礙均可視為命活動的障礙，中風病無論有無神志障礙均可視為“竅竅閉神匿、神不導氣閉神匿、神不導氣”。病因之風、癥狀之風病因之風、癥狀之風病機之風、病名之風病機之風、病名之風中風病因病機中風病因病機l積損正衰l飲食不節(jié)l情志所傷l外邪入中病因病因風風火火痰痰虛虛瘀瘀病機病機中風中風發(fā)病發(fā)病中經中經絡絡中臟中臟腑腑閉證閉證脫證脫證腦竅閉阻腦竅閉阻醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用l為什么

9、古代醫(yī)家認為開竅方藥不宜早用和為什么古代醫(yī)家認為開竅方藥不宜早用和久用？久用？醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用l醒腦開竅法介紹醒腦開竅法介紹l醒腦開竅法為什么可廣泛應用于中風醒腦開竅法為什么可廣泛應用于中風l醒腦開竅代表藥的實驗研究醒腦開竅代表藥的實驗研究醒腦開竅法在中風中的應用醒腦開竅法在中風中的應用麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠影響的實驗研究灌注損傷大鼠影響的實驗研究國家自然科學基金項目（編號：國家自然科學基金項目（編號：300400580300400580） 廣東省科技廳項目（編號：廣東省科技廳項目（編號：2004B330010142

10、004B33001014）一一: :麝香配伍冰片抗大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷麝香配伍冰片抗大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的療效觀察的療效觀察大鼠神經功能障礙、腦梗死體積大鼠神經功能障礙、腦梗死體積; ;腦組織含水量、腦組織含水量、BBBBBB通透性通透性; ;神經元超微結構的改變。神經元超微結構的改變。實驗研究實驗研究二二: :麝香配伍冰片抗大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷麝香配伍冰片抗大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的分子機制研究的分子機制研究 麝香配伍冰片對腦缺血再灌注后腦水腫相關因子麝香配伍冰片對腦缺血再灌注后腦水腫相關因子AQP-4 AQP-4 mRNAmRNA定量表達的影響定量表達的影響 。麝香配伍

11、冰片對腦缺血再灌注后炎癥反應相關因子麝香配伍冰片對腦缺血再灌注后炎癥反應相關因子ICAM-ICAM-1 mRNA1 mRNA定量表達的影響定量表達的影響 。藥物藥物 麝香、冰片懸濁液（每毫升含人工麝香麝香、冰片懸濁液（每毫升含人工麝香0.1mg，冰片，冰片0.3mg），）， 用用1%吐溫吐溫80液配成；液配成；麝香懸濁液（每毫升含人工麝香麝香懸濁液（每毫升含人工麝香0.1mg），用），用1%吐溫吐溫80液配成；液配成； 冰片懸濁液（每毫升含冰片冰片懸濁液（每毫升含冰片0.3mg）；用）；用1%吐溫吐溫80液配成；液配成；動物分組動物分組給藥方法給藥方法在造模前在造模前3天開始灌胃給藥天開始灌胃

12、給藥(10ml/kg/d)，每天兩次，再于缺血前，每天兩次，再于缺血前30min給藥一次，缺血后給藥一次，缺血后12h與與24h各給藥一次各給藥一次一、神經功能缺損評分一、神經功能缺損評分 Bederson氏氏6級評分標準級評分標準, 主要通過觀察動物的行為變主要通過觀察動物的行為變化進行評分?；M行評分。 0分分: 沒有可見的神經功能缺失；沒有可見的神經功能缺失； 1分分: 左側前爪不能伸直；左側前爪不能伸直； 2分分: 行走時斷續(xù)向左側傾斜劃圈；行走時斷續(xù)向左側傾斜劃圈； 3分：向左側持續(xù)轉圈；分：向左側持續(xù)轉圈； 4分分: 向左側傾倒；向左側傾倒； 5分：不能行走。分：不能行走。觀察指標

13、觀察指標二、腦梗死體積測定二、腦梗死體積測定(TTC(TTC染色法染色法) )大鼠腦缺血大鼠腦缺血2h再灌注再灌注24h后，麻醉后斷頭處死，迅速取出大鼠后，麻醉后斷頭處死，迅速取出大鼠大腦大腦;將大腦置將大腦置0生理鹽水中生理鹽水中15min，再取出從額極間隔，再取出從額極間隔2mm連續(xù)連續(xù)做做6個腦組織冠狀切片個腦組織冠狀切片;置置2TTC溶液中，溶液中，37水浴箱恒溫孵育水浴箱恒溫孵育30min;置置10%甲醛中固定甲醛中固定24后，數碼相機拍照，病理圖像分析軟件測后，數碼相機拍照，病理圖像分析軟件測量梗死灶面積，以梗死灶體積占全腦體積的百分率進行統(tǒng)計分量梗死灶面積，以梗死灶體積占全腦體積

14、的百分率進行統(tǒng)計分析。析。觀察指標觀察指標 假手術組假手術組 模型組模型組 麝冰組麝冰組結果結果: :組別組別n n神經功能缺損評分神經功能缺損評分相對腦梗死體積相對腦梗死體積假手術組假手術組6 60 00 0模型組模型組7 73.713.710.49 0.49 18.0818.086.51 6.51 麝冰組麝冰組7 72.142.140.69 0.69 8.968.964.85 4.85 麝香組麝香組6 62.832.830.750.75 12.1912.196.76.7冰片組冰片組6 63.173.170.75 0.75 15.3815.386.996.99 與模型組比較與模型組比較P0.

15、01P0.01，與模型組比較與模型組比較P0.05 P0.05 實驗三實驗三 麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦含水麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦含水量及血腦屏障通透性影響量及血腦屏障通透性影響 腦含水量腦含水量 干濕重法測定干濕重法測定BBBBBB通透性（通透性（Evans-blue檢測檢測法）法）1、伊文思藍、伊文思藍甲酰胺標準曲線制備甲酰胺標準曲線制備 將伊文思藍將伊文思藍5mg溶于溶于10ml的甲酰的甲酰 胺中胺中,然后梯度稀釋成不同濃度然后梯度稀釋成不同濃度; 在紫外分光光度計上測定其吸光度，在紫外分光光度計上測定其吸光度， 測定波長為測定波長為620nm，以濃度，以濃度

16、(C)為為 橫坐標，以吸光度橫坐標，以吸光度(A)為縱坐標，為縱坐標， 求得回歸方程求得回歸方程: Y=0.0423X+0.0447 (Y為吸光度，為吸光度， X為濃度為濃度)2 2、BBBBBB通透性實驗方法：通透性實驗方法：腦缺血腦缺血2h 2h 再灌注再灌注23h23h（處死前（處死前1 1小時），從大鼠股靜脈注入小時），從大鼠股靜脈注入2%Evansblue2%Evansblue生理鹽水液生理鹽水液(3ml/kg);(3ml/kg);1 1小時后打開胸腔，用生理鹽水經左心室灌注，將血管中小時后打開胸腔，用生理鹽水經左心室灌注，將血管中的伊文思藍沖洗干凈，斷頭取腦。的伊文思藍沖洗干凈，斷

17、頭取腦。取缺血側大腦皮質，用濾紙吸干表面水分取缺血側大腦皮質，用濾紙吸干表面水分 ，精密稱重，精密稱重，并置于含并置于含4ml二甲基甲酰胺的試管中，二甲基甲酰胺的試管中，50孵育孵育48h，再，再離心離心15min (3000r/min), 取上清液用取上清液用Hitachi U2001分光分光光度計測定其吸光度光度計測定其吸光度 ，并由標準曲線方程得出伊文思藍，并由標準曲線方程得出伊文思藍的濃度（的濃度（ug/g）。）。 結果結果組別組別腦含水量（）腦含水量（）EBEB含量（含量（ g/gg/g腦組織）腦組織）n nn n假手術組假手術組 6 6 78.4278.420.190.196 60

18、.520.520.730.73模型組模型組6 6 81.5181.510.530.537 710.6510.653.993.99麝冰組麝冰組8 8 80.4780.470.670.67* *7 73.963.962.072.07* *麝香組麝香組7 7 80.9580.950.620.626 67.277.275.625.62冰片組冰片組5 5 80.7980.790.930.936 64.874.871.831.83* * *與模型組比較與模型組比較P0.05P0.05實驗四實驗四 麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠神經元超微結構影響神經元超微結構影響

19、觀察指標：觀察指標：神經元超微結構變化神經元超微結構變化神經元突觸超微結構變化神經元突觸超微結構變化 假手術組假手術組 模型組模型組 麝香配伍冰片組麝香配伍冰片組 1 1、神經元超微結構變化、神經元超微結構變化 麝香組麝香組 冰片組冰片組假手術組假手術組：神經細胞的軸突、樹突：神經細胞的軸突、樹突與膠質細胞旁突相互交織，連結形成與膠質細胞旁突相互交織，連結形成神經氈，神經氈中突觸數目眾多，神經氈，神經氈中突觸數目眾多，突觸前、后膜致密物質厚度對稱，突觸前、后膜致密物質厚度對稱，前后界膜分界清楚，輪廓完整，前后界膜分界清楚，輪廓完整，突觸小泡為圓形清亮小泡，大小均等，突觸小泡為圓形清亮小泡，大小

20、均等，密集均勻分布于突觸前終末內密集均勻分布于突觸前終末內；模型組模型組：神經氈內突觸減少，結構模糊，前后：神經氈內突觸減少，結構模糊，前后界膜不清，突觸小泡數量減少甚至消失，典型界膜不清，突觸小泡數量減少甚至消失，典型的突觸結構已遭破壞。神經氈中軸漿電子密度的突觸結構已遭破壞。神經氈中軸漿電子密度降低，呈空化透明病變；降低，呈空化透明病變；麝香配伍冰片組麝香配伍冰片組：突觸數量較模型組：突觸數量較模型組明顯增多，但仍少于正常組，突觸形態(tài)明顯增多，但仍少于正常組，突觸形態(tài)大部分接近正常，線粒體數量增多，大部分接近正常，線粒體數量增多，仍有少數線粒體呈現腫脹病變，無仍有少數線粒體呈現腫脹病變，無

21、軸漿空化表現；軸漿空化表現；2 2、神經元突觸變化、神經元突觸變化麝香組麝香組：與模型組相近似，軸：與模型組相近似，軸漿空化明顯，突觸數量少，形漿空化明顯，突觸數量少，形態(tài)未恢復正常，線粒體數目稍態(tài)未恢復正常，線粒體數目稍有增多，部分線粒體形態(tài)接有增多，部分線粒體形態(tài)接近；近；冰片組冰片組：正常突觸數量較模型組稍：正常突觸數量較模型組稍有增多，形態(tài)尚未恢復正常，線粒有增多，形態(tài)尚未恢復正常，線粒體數目增多，但腫脹仍存，軸漿空體數目增多，但腫脹仍存，軸漿空化病變基本消失；化病變基本消失；突觸數密度比較突觸數密度比較突觸數密度比較突觸數密度比較組別組別n n突觸數密度突觸數密度假手術組假手術組5

22、526.2526.252.42.4模型組模型組5 59.309.303.55 3.55 麝冰組麝冰組5 516.2616.262.18 2.18 麝香組麝香組5 511.5411.542.622.62冰片組冰片組5 512.6412.642.68 2.68 與假手術組比較與假手術組比較P0.01P0.01，與模型組比較與模型組比較P0.05 P0.05 實驗五實驗五 麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠水通道蛋白水通道蛋白4(AQP-4)mRNA4(AQP-4)mRNA表達影響表達影響 運用實時熒光定量運用實時熒光定量PCRPCR技術（技術（TaqmanTa

23、qman探針法）定量檢測探針法）定量檢測 AQP-4 mRNAAQP-4 mRNA的表達的表達 1、Taqman探針、引物設計與合成探針、引物設計與合成 2、大鼠腦組織總、大鼠腦組織總RNA抽提抽提 3、RT-PCR反應反應 4、PCR擴增擴增 5、AQP-4 pMD 18-T載體的構建及標準品的制備載體的構建及標準品的制備 6、標準曲線的建立、標準曲線的建立 7、Real Time PCR反應反應 TaqmanTaqman探針、引物設計與合成探針、引物設計與合成l標準曲線標準曲線 l各組樣本熒光各組樣本熒光 擴增曲線擴增曲線 結果結果 結果：結果：組別組別n n拷貝數拷貝數/g/g總總RNA

24、RNA假手術組假手術組6 62.452.4510106 65.495.4910105 5模型組模型組6 66.376.3710106 61.631.6310106 6 麝冰組麝冰組6 64.184.1810106 61.451.4510106 6 麝香組麝香組6 64.684.6810106 61.491.4910106 6冰片組冰片組6 64.244.2410106 61.681.6810106 6 與假手術組比較與假手術組比較P0.01P0.01，與模型組比較與模型組比較P0.05 P0.05 實驗六實驗六 麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠細麝香配伍冰片對局灶性腦缺血再灌注大鼠細胞間黏附分子胞間黏附分子1 1（ICAM-1ICAM-1）mRNAm