1、1 了解培育基的種類(lèi)、掌握培育基的配制、了解培育基的種類(lèi)、掌握培育基的配制、分裝方法和滅菌前的預(yù)備任務(wù)；高壓滅菌分裝方法和滅菌前的預(yù)備任務(wù)；高壓滅菌的原理、運(yùn)用范圍和本卷須知。的原理、運(yùn)用范圍和本卷須知。2 明確培育基的配制原理。明確培育基的配制原理。3 經(jīng)過(guò)對(duì)經(jīng)過(guò)對(duì)LB培育基的配制，掌握配制培育基培育基的配制，掌握配制培育基的普通方法和步驟。的普通方法和步驟。 培育基是人工地將多種物質(zhì)按各種微培育基是人工地將多種物質(zhì)按各種微生物生長(zhǎng)的需求配制而成的一種混合生物生長(zhǎng)的需求配制而成的一種混合營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，用以培育或分別各種微生營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，用以培育或分別各種微生物。因此，營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)該當(dāng)有微生物所物。因此，

2、營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)該當(dāng)有微生物所能利用的營(yíng)養(yǎng)成分包括碳源、氮源、能利用的營(yíng)養(yǎng)成分包括碳源、氮源、能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)要素和水。根能源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)要素和水。根據(jù)微生物的種類(lèi)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，培?jù)微生物的種類(lèi)和實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌?，培育基也有不同的種類(lèi)和配制方法。育基也有不同的種類(lèi)和配制方法。1天然培育基天然培育基:主要成分是復(fù)雜的天然有機(jī)物質(zhì)，主要成分是復(fù)雜的天然有機(jī)物質(zhì)，如馬鈴薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。如馬鈴薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。這些復(fù)雜天然有機(jī)物質(zhì)的成分不完全了解，每次這些復(fù)雜天然有機(jī)物質(zhì)的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的數(shù)量也不恒定。這類(lèi)所用的原料，其中各成分的數(shù)量也不恒定

3、。這類(lèi)培育基是實(shí)驗(yàn)室常用的培育基，例如牛肉膏蛋白培育基是實(shí)驗(yàn)室常用的培育基，例如牛肉膏蛋白胨培育基、馬鈴薯培育基等。胨培育基、馬鈴薯培育基等。2合成培育基合成培育基:用化學(xué)成分完全了解的純?cè)噭┡渲朴没瘜W(xué)成分完全了解的純?cè)噭┡渲贫傻呐嘤绺呤隙傻呐嘤?，如高?號(hào)培育基，查氏培育基號(hào)培育基，查氏培育基等。普通用于營(yíng)養(yǎng)代謝、分類(lèi)鑒定、菌種選育、等。普通用于營(yíng)養(yǎng)代謝、分類(lèi)鑒定、菌種選育、遺傳分析等。遺傳分析等。 1固體培育基固體培育基:在液體培育基中參與凝固劑即為在液體培育基中參與凝固劑即為固體培育基。實(shí)驗(yàn)用的凝固劑有瓊脂、明膠和硅固體培育基。實(shí)驗(yàn)用的凝固劑有瓊脂、明膠和硅膠，后者用于配制自

4、養(yǎng)微生物的固體培育基。對(duì)膠，后者用于配制自養(yǎng)微生物的固體培育基。對(duì)其他多數(shù)微生物來(lái)講，以瓊脂最為適宜，普通參其他多數(shù)微生物來(lái)講，以瓊脂最為適宜，普通參與與1525%即可凝固成固體。此培育基可供即可凝固成固體。此培育基可供分別、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、菌種保藏等用。分別、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、菌種保藏等用。 2半固體培育基半固體培育基:在液體培育基中參與少量凝固在液體培育基中參與少量凝固劑即為半固體培育基，例如瓊脂只需參與劑即為半固體培育基，例如瓊脂只需參與0207%。常用作細(xì)菌動(dòng)力檢查和菌種保管、噬菌。常用作細(xì)菌動(dòng)力檢查和菌種保管、噬菌體制劑的制備等。體制劑的制備等。 3液體培育基液體培育基:沒(méi)有加瓊脂，配

5、好后成液體形狀沒(méi)有加瓊脂，配好后成液體形狀的培育基。常用于生理代謝的研討和工業(yè)發(fā)酵等。的培育基。常用于生理代謝的研討和工業(yè)發(fā)酵等。 1根底培育基根底培育基:含有普通細(xì)菌生長(zhǎng)繁衍需含有普通細(xì)菌生長(zhǎng)繁衍需求的根本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。最常用的根底培育求的根本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。最常用的根底培育基是上面提及的天然培育基中的牛肉膏蛋基是上面提及的天然培育基中的牛肉膏蛋白胨培育基。這種培育基可作為一些特殊白胨培育基。這種培育基可作為一些特殊培育基的根底成分。培育基的根底成分。 2營(yíng)養(yǎng)培育基加富培育基營(yíng)養(yǎng)培育基加富培育基:在根底培在根底培育基中參與某些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如血液、育基中參與某些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如血液、血清、酵母浸膏

6、或生長(zhǎng)因子等。用以培育血清、酵母浸膏或生長(zhǎng)因子等。用以培育對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高的微生物，如培育百日咳桿對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高的微生物，如培育百日咳桿菌需求含有血液的培育基。菌需求含有血液的培育基。 3鑒別培育基鑒別培育基:是一類(lèi)含有某種特定化合物或試是一類(lèi)含有某種特定化合物或試劑的培育基。某種微生物在這種培育基上培育后，劑的培育基。某種微生物在這種培育基上培育后，它所產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與這種特定的化合物或它所產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與這種特定的化合物或試劑能發(fā)生某種明顯的特征性反響，根據(jù)這一特試劑能發(fā)生某種明顯的特征性反響，根據(jù)這一特征性反響可以將某種微生物與其他種微生物區(qū)別征性反響可以將某種微生物與其他種微生物區(qū)別

7、開(kāi)來(lái)。主要用于不同類(lèi)型微生物的快速鑒定，如開(kāi)來(lái)。主要用于不同類(lèi)型微生物的快速鑒定，如用來(lái)檢查細(xì)菌能否產(chǎn)生硫化氫的醋酸鉛培育基。用來(lái)檢查細(xì)菌能否產(chǎn)生硫化氫的醋酸鉛培育基。 4選擇培育基選擇培育基:利用微生物對(duì)某種或某些化學(xué)物利用微生物對(duì)某種或某些化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同，在培育基中參與這類(lèi)物質(zhì)，抑質(zhì)的敏感性不同，在培育基中參與這類(lèi)物質(zhì)，抑制不需求的微生物生長(zhǎng)，而利于所需分別的微生制不需求的微生物生長(zhǎng)，而利于所需分別的微生物生長(zhǎng)，從而到達(dá)分別或鑒別某種微生物的目的，物生長(zhǎng)，從而到達(dá)分別或鑒別某種微生物的目的，如分別真菌的馬丁氏培育基。既有選擇作用又有如分別真菌的馬丁氏培育基。既有選擇作用又有鑒別作用的

8、培育基，如鑒別腸道桿菌的遠(yuǎn)藤氏培鑒別作用的培育基，如鑒別腸道桿菌的遠(yuǎn)藤氏培育基等。育基等。 LB培育基是一種運(yùn)用最廣泛和最普通的細(xì)培育基是一種運(yùn)用最廣泛和最普通的細(xì)菌根底培育基，有時(shí)又稱為普通培育基。菌根底培育基，有時(shí)又稱為普通培育基。它含有酵母提取物、蛋白胨和它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。碳源。碳源和能源：酵母提取物，氮源：磷酸鹽、蛋和能源：酵母提取物，氮源：磷酸鹽、蛋白胨，無(wú)機(jī)鹽：白胨，無(wú)機(jī)鹽：NaCl。在配制固體培育基。在配制固體培育基時(shí)還要參與一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在時(shí)還要參與一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下常用濃度下96時(shí)溶化，普通實(shí)踐運(yùn)用時(shí)時(shí)溶化，普通實(shí)踐運(yùn)用時(shí)在沸水浴

9、中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在以免瓊脂燒焦。瓊脂在40時(shí)凝固，通常時(shí)凝固，通常不被微生物分解利用。不被微生物分解利用。 由于這種培育基多用于培育細(xì)菌，因由于這種培育基多用于培育細(xì)菌，因此，要用稀酸或稀堿將其此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁衍?；蛭A性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁衍。 LB培育基的配方如下：酵母提取物培育基的配方如下：酵母提取物 5g、蛋白胨、蛋白胨 10g、NaCl 5g、瓊、瓊脂脂 1520g、水、水 1000mL、pH 7.47.6 酵母提取物，蛋白胨，酵母提取物，蛋白胨， NaCl，瓊脂；

10、，瓊脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；試管，三角；試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培育基分裝器，燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培育基分裝器，天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙?jiān)嚰坧H 5.59.0，棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，麻繩，紗布等。麻繩，紗布等。1稱量稱量 按培育基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取酵母提取物、蛋白胨、按培育基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。蛋白胨很易吸潮，在稱取時(shí)動(dòng)作要迅放入燒杯中。蛋白胨很易吸潮，在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。另外，稱藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種速。另外，稱藥品時(shí)嚴(yán)防藥

11、品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯(cuò)。瓶蓋也不要蓋錯(cuò)。2溶化溶化在上述燒杯中可先參與少于所需求的水量，用玻棒攪勻，然在上述燒杯中可先參與少于所需求的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補(bǔ)充后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補(bǔ)充水分到所需的總體積。假設(shè)配制固體培育基，將稱好的瓊水分到所需的總體積。假設(shè)配制固體培育基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過(guò)程脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過(guò)程中，需不斷攪拌，以防瓊脂

12、糊底使燒杯破裂。最后補(bǔ)足所中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補(bǔ)足所失的水分。失的水分。 3調(diào)調(diào)pH在未調(diào)在未調(diào)pH前，先用精細(xì)前，先用精細(xì)pH試紙丈量培育基的原始試紙丈量培育基的原始pH值，假值，假設(shè)設(shè)pH偏酸，用滴管向培育基中逐滴參與偏酸，用滴管向培育基中逐滴參與1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其試紙測(cè)其pH值，直至值，直至pH達(dá)達(dá)7.6。反之，那么用反之，那么用1mol/L HCl進(jìn)展調(diào)理。留意進(jìn)展調(diào)理。留意pH值不要調(diào)過(guò)值不要調(diào)過(guò)頭，以防止回調(diào)，否那么，將會(huì)影響培育基內(nèi)各離子的濃頭，以防止回調(diào)，否那么，將會(huì)影響培育基內(nèi)各離子的濃度。對(duì)于

13、有些要求度。對(duì)于有些要求pH值較準(zhǔn)確的微生物，其值較準(zhǔn)確的微生物，其pH的調(diào)理可的調(diào)理可用酸度計(jì)進(jìn)展運(yùn)用方法，可參考有關(guān)闡明書(shū)。用酸度計(jì)進(jìn)展運(yùn)用方法，可參考有關(guān)闡明書(shū)。4分裝分裝 (1)液體分裝分裝高度以試管高度的液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。左右為宜。(2)固體分裝分裝試管，其裝量不超越管高的固體分裝分裝試管，其裝量不超越管高的1/5，滅菌后制，滅菌后制成斜面，分裝三角燒瓶的量以不超越三角燒瓶容積的一半成斜面，分裝三角燒瓶的量以不超越三角燒瓶容積的一半為宜。為宜。(3)半固體分裝試管普通以試管高度的半固體分裝試管普通以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直為宜，滅菌后垂直待凝。待凝。

14、5加塞加塞培育基分裝終了后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以培育基分裝終了后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)入培育基內(nèi)而呵斥污染，并保證有良好阻止外界微生物進(jìn)入培育基內(nèi)而呵斥污染，并保證有良好的通氣性能。的通氣性能。6.包扎包扎加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞，其外再用一道麻繩扎紙，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號(hào)筆注明培育基稱號(hào)、組別、日期。三角燒瓶加好。用記號(hào)筆注明培育基稱號(hào)、組別、日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)方式扎好，運(yùn)用時(shí)

15、容易塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)方式扎好，運(yùn)用時(shí)容易解開(kāi)，同樣用記號(hào)筆注明培育基稱號(hào)、組別、日期。解開(kāi)，同樣用記號(hào)筆注明培育基稱號(hào)、組別、日期。7滅菌滅菌將上述培育基以將上述培育基以1.05kg/cm215磅磅/英寸英寸2，121.3，20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時(shí)滅菌，那么應(yīng)分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時(shí)滅菌，那么應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存。放入冰箱內(nèi)暫存。8擱置斜面擱置斜面將滅菌的試管培育基冷至將滅菌的試管培育基冷至50左右，將試管左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長(zhǎng)度以不棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長(zhǎng)度以不超越試管總長(zhǎng)的一半為宜。超越試管總長(zhǎng)的一半為宜。9無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查將滅菌的培育