1、血紅蛋白與相關遺傳病1.血紅蛋白電泳紅細胞滲透脆性實驗珠蛋白基因檢測HbA23.5%溶血%60%地中海貧血2.3實驗原理實驗結果實驗內容 根據不同的血紅蛋白帶有不同的電荷，等電點不同，在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH大于Hb的等電點時其帶負電荷，電泳時在電場中向陽極泳動，反之，Hb帶正電荷向陰極泳動。經一定電壓和時間的電泳，不同的血紅蛋白所帶電荷不同、相對分子質量不同，其泳動方向和速度不同，可分離出各自的區帶，同時對電泳出的各區帶進行電泳掃描，可進行各種血紅蛋白的定量分析。 血紅蛋白電泳.4實驗原理實驗結果實驗內容 血紅蛋白電泳 電泳的介質：醋酸纖維薄膜 緩沖液：TEB（）材料：pH 8.6

2、 TEB緩沖液適合于檢出HbA、HbA2、HbS、HbC，但HbF不易與HbA分開，HbH與HbBarts不能分開和顯示，應再選擇其他緩沖液進行電泳分離。 無“拖尾”現象分離速度快靈敏度高.5實驗原理實驗結果實驗內容 血紅蛋白電泳準備點樣洗脫定量.6實驗原理實驗結果實驗內容 血紅蛋白電泳A：4；A2：65HbA2含量=A2A2+A2100%* *臨床意義：臨床意義： HbA2參考值：2.0%-3.5% HbA2增多，見于珠蛋白合成障礙性貧血，為雜合子的重要實驗室診斷指標。HbE病時也在HbA2區帶位置處增加，但含量很大（在10%以上）。HbA2輕度增加亦可見于肝病、腫瘤和某些血液病。=3.0%

3、.7實驗原理實驗結果實驗內容 紅細胞滲透脆性實驗正常紅細胞懸浮于等滲的血漿中，若將其置于高滲溶液中，紅細胞會因失水而皺縮；反之，將其置于低滲溶液中，則水進入紅細胞，使紅細胞膨脹。如環境滲透壓繼續下降，紅細胞會因繼續膨脹而破裂，釋放血紅蛋白，稱為溶血。紅細胞膜對低滲溶液具有一定的抵抗力，這一特征稱為紅細胞滲透脆性。紅細胞膜對低滲溶液的抵抗力越大，紅細胞在低滲溶液中越不容易發生溶血，即紅細胞滲透脆性越小。將血液滴入不同的低滲溶液中，可檢查紅細胞膜對于低滲溶液抵抗力的大小。開始出現溶血現象的低滲溶液濃度，為該血液紅細胞的最小抵抗力；開始出現完全溶血時的低滲溶液濃度，則為該血液紅細胞的最大抵抗力。.8

4、實驗原理實驗結果實驗內容 紅細胞滲透脆性實驗抗凝全血37反應地貧A液上清液測得H1混勻地貧C液測得H2離心地貧B液地貧A液：低滲NaCl地貧B液：終止反應地貧C液：破壞所有RBC.9實驗原理實驗結果實驗內容 紅細胞滲透脆性實驗H1：270；H2：280溶血%=H1=77.1%* *臨床意義臨床意義：正常值：溶血%60%脆性增加：試驗結果與正常對照比較，提高0.04%者即有意義， 見于遺傳性球形紅細胞增多癥，自身免疫性溶血性貧血伴球形紅細胞增多癥，也可見于遺傳性橢圓形紅細胞增多癥和部分遺傳性口形紅細胞增多癥患者。脆性減低：見于缺鐵性貧血，地中海性貧血，鏈狀細胞貧血，靶形紅細胞增多癥，血紅蛋白增多

5、癥，脾切除術后，肝臟疾病，阻塞性黃疸等。 .10實驗原理實驗結果實驗內容 珠蛋白基因檢測提取DNA擴增珠蛋白基因（PCR）PCR產物電泳DNA測序.11實驗原理實驗結果實驗內容 珠蛋白基因檢測提取提取DNADNA：白細胞中加雙蒸水，裂解細胞；加SDS，破壞細胞膜；加蛋白酶K，消化蛋白質；加酚/氯仿/異戊醇，抽提DNA，去除蛋白質和脂質；加無水乙醇，析出DNA。PCRPCR：利用DNA在體外攝氏95高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互補鏈，達到在體外

6、擴增特定基因的目的。PCRPCR產物電泳產物電泳：在pH高于其pI時，DNA分子帶負電荷，在直流電場中通過凝膠介質向正極泳動。不同的DNA分子因電荷數、構象和分子量大小的不同，在同一電泳系統中的泳動速度有差異，達到分離的目的。.12實驗原理實驗結果實驗內容 珠蛋白基因檢測白細胞中加雙蒸水，裂解細胞；加SDS，破壞細胞膜；加蛋白酶K，消化蛋白質；加酚/氯仿/異戊醇，抽提DNA，去除蛋白質和脂質；加無水乙醇，析出DNA。提取DNAPCR反應體系：DNA，dNTP，引物，Taq酶，Mg2+，緩沖液，雙蒸水。變性（94）退火（63）延伸（74）DNA電泳均勻混合DNA與溴酚藍（電泳指示劑），小心加入制備好的瓊脂糖凝膠的樣品槽內，跑電泳，紫外下觀察。.13實驗原理實驗結果實驗內容 珠蛋白基因檢測電泳結果.珠蛋白基因測序14實驗原理實驗結果實驗內容 珠蛋白基因檢測.15實驗原理實驗結果實驗內容 珠蛋白基因檢測珠蛋白基因外顯子區域無突變.16實驗原理實驗結果實驗內容 珠蛋白基因檢測Slide by slide alignment不配對處較多，經驗證均處于測序不穩定區域。.17實驗原理實驗結果實驗內容 珠蛋白基因檢測基因多態性檢測第一段外顯子第3位堿基：T第二段內含子第16位堿基：G