1、1維生素維生素B12注射液含量測定注射液含量測定 2 2 一、 任務依據 【中國藥典】2015版 二部 P1236 維生素維生素B B1212注射液注射液本品為維生素本品為維生素B B1212的滅菌水溶液。含維生素的滅菌水溶液。含維生素B B1212（C C6363H H8888CoNCoN1414O O1414P P）應為標示量的）應為標示量的90.0%90.0% 110.0%110.0%【含量測定】避光操作。精密量取本品適量，用水定【含量測定】避光操作。精密量取本品適量，用水定量稀釋成每量稀釋成每1mL1mL中約含維生素中約含維生素B B1212 25g 25g的溶液，照紫的溶液，照紫外外

2、- -可見分光光度法（可見分光光度法（通則通則04010401），在），在361nm361nm的波長處的波長處測定吸光度，按測定吸光度，按C C6363H H8888CoNCoN1414O O1414P P的吸收系數（的吸收系數（ ）為）為207207計算，即得。計算，即得。1%1cmE 3 3 二、 任務分解 1. 實驗原理 紫外紫外-可見分光光度計可見分光光度計 紫外紫外-可見分光光度法是通過被測物質在紫可見分光光度法是通過被測物質在紫外光區或可見光區的特定波長處或一定波長范外光區或可見光區的特定波長處或一定波長范圍內的的吸光度，對該物質進行定性和定量分圍內的的吸光度，對該物質進行定性和定

3、量分析的光學分析方法。析的光學分析方法。 定量分析通常選擇物質的最大吸收波長處定量分析通常選擇物質的最大吸收波長處測出吸光度，然后用對照品或吸收系數求算出測出吸光度，然后用對照品或吸收系數求算出被測物質的含量，多用于制劑的含量測定。被測物質的含量，多用于制劑的含量測定。 4 4 二、 任務分解 2.計算計算稀釋倍數 根據維生素根據維生素B12注射液【含量測定】中內容要求注射液【含量測定】中內容要求描述，描述，“用水定量稀釋成用水定量稀釋成每每1mL中約含維生素中約含維生素B12 25g的溶液的溶液”。【規格】（【規格】（1）1ml：0.05mg （2）1ml：0.1mg （3）1ml：0.25

4、mg （4）1ml：0.5mg （5）1ml：1mg （6）2ml：0.5mg 5 5 10mlmg025. 0mlmg25. 0ml1ug25ml2mg5 . 0供試品溶液濃度樣品溶液濃度稀釋倍數 以下均以規格2ml：0.5mg為例樣品溶液：實際使用的維生素B12注射液供試品溶液：按要求配制的每1mL中約含維生素B12 25g的溶液。 6 6 二、 任務分解3. 制定計劃(1)填寫所需溶液、藥品及儀器藥品名稱規格數量用途及可用量維生素B12注射液2ml：0.5mg/2盒2盒藥品，1人水純化水500ml，1人儀器清洗、溶劑表表1 維生素維生素B12注射液含量測定所需藥品注射液含量測定所需藥品

5、7 7 二、 任務分解3. 制定計劃(1)填寫所需溶液、藥品及儀器表表2 維生素維生素B12注射液含量測定所需儀器注射液含量測定所需儀器儀器名稱規格型號數量用途紫外-可見分光光度計北京通用T61臺含量測定石英比色皿石英1套含量測定移液管10ml1支溶液配制容量瓶100ml2支溶液配制洗瓶500ml1支洗滌、稀釋小燒杯100ml1個稀釋膠頭滴管2ml1支定容大燒杯500ml1個廢液杯洗耳球塑料1個移液 8 8 二、 任務分解 9 9 二、 任務分解3. 制定計劃(3)操作步驟測定步驟操作內容數據記錄1.儀器檢定1. 雜散光的檢查2.波長準確度、吸光度準確度檢定。3. 雜散光的檢查 定期檢查2.配

6、制供試品溶液精密量取一定體積定量稀釋成規定濃度的溶液。供試品的名稱、批號、生產廠家。3.比色皿配對使用的石英吸收池必須潔凈。當吸收池中裝入同一溶劑，在規定波長測定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配對使用，否則必須加以校正。 10 10 二、 任務分解3. 制定計劃(3)操作步驟測定步驟操作內容數據記錄4.溶劑空白吸收將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質）測定其吸收光度溶劑空白吸收=5.確定測定波長 除另有規定外，在規定的吸收峰2nm處，再測幾點的吸光度，吸光度最大的波長應在規定的波長2nm以內，并以吸光度最大的波長作為測定波長。測定波長= nm 6

7、.吸光度測定1.將參比液、測定液裝于吸收池中。2.以參比液為空白，測定吸光度，記錄。A1= A2=7.記錄與計算1.計算供試品的百分含量%2.計算平均百分含量%標示量%= 平均百分含量%8.結果與判定1.將測得的含量與藥典規定值比較，得出結論。2.相對偏差均應在0.5%以內。相對偏差= 結論： 11 11 三、實驗實施 （一）.使用前儀器的校正和檢定1.波長準確度1.1 波長準確度的允差范圍 紫外-可見分光光度計波長準確度允許誤差，紫外區為1nm，500nm處2nm。 P55-56（通則0401） 12 12 三、實驗實施 （一）.使用前儀器的校正和檢定1.2 波長準確度檢定方法 1.用低壓汞

8、燈檢定 2.用儀器固有的氘燈檢定 3.用氧化鈥玻璃檢定 4.用高氯酸鈥溶液檢定 P55-56（通則0401） 13 13 三、實驗實施 （一）.使用前儀器的校正和檢定2.吸光度準確度 精密稱取在120干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，置1000ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀釋至1000ml，用配對的1cm石英池，以0.005mol/L硫酸液為空白，在235、257、313、350nm分別測定吸光度，然后換算成 ，測得值應符合表1中規定的允差范圍。P56（通則0401）1%1cmE 14 14 三、實驗實施 （一）.使用前儀器的校正和檢定表1 分光光度法允差范圍 波長吸收強度

9、吸收系數允差范圍235最小124.5123.0126.0257最大144.0142.8146.2313最小48.647.050.3350最大106.6105.5108.51%1cmEP56（通則0401） 15 15 三、實驗實施 （一）.使用前儀器的校正和檢定 3 .雜散光的檢查 可按表2所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英池中，在規定的波長處測定透光率，應符合表2中規定。表2 雜散光的檢查及限度試劑濃度（%，g/ml）測定用波長（nm） 透光率（%）碘化鈉1.002200.8亞硝酸鈉5.003400.8P56（通則0401） 16 16 三、實驗實施 （二）. 供試品溶液的配制 維

10、生素維生素 B12注射液注射液 10.00ml 100ml平行配制平行配制2份份水水 17 17 1.移液管使用 三、實驗實施 18 18 三、實驗實施 1.移液管使用移液管、刻度吸管 移液管的的拿持 潤洗 19 19 三、實驗實施 1.移液管使用 吸液 調節液面 放出液體 20 20 配制測定溶液時稀釋轉移次數應盡可能少，轉移稀釋時取容配制測定溶液時稀釋轉移次數應盡可能少，轉移稀釋時取容積一般不少于積一般不少于5ml。含量測定時供試品應稱取。含量測定時供試品應稱取2份，如為對照品比份，如為對照品比較法，對照品一般也應稱取較法，對照品一般也應稱取2份。吸收系數檢查也應稱取供試品份。吸收系數檢查

11、也應稱取供試品2份，平行操作，每份結果對平均值的偏差應在份，平行操作，每份結果對平均值的偏差應在0.5%以內。作鑒以內。作鑒別或檢查可取樣品別或檢查可取樣品1份。份。三、實驗實施 （二）. 供試品溶液的配制 P57-58 21 21 2.容量瓶的使用 三、實驗實施 用移液管移取一定體積的溶液于容量瓶中，加水至距標線約用移液管移取一定體積的溶液于容量瓶中，加水至距標線約1cm處處，等，等12分鐘，使附在瓶頸內壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至彎分鐘，使附在瓶頸內壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至彎液面下緣與標線相切，然后蓋上瓶塞，左手用食指按住塞子，其余手液面下緣與標線相切，然后蓋上瓶塞，左手用食指

12、按住塞子，其余手指拿住瓶頸標線以上部分，右手指尖托住瓶底，將容量瓶倒轉，使氣指拿住瓶頸標線以上部分，右手指尖托住瓶底，將容量瓶倒轉，使氣泡上升到頂，使瓶振蕩，正立后再次倒轉進行振蕩，如此反復泡上升到頂，使瓶振蕩，正立后再次倒轉進行振蕩，如此反復1520次以上，使瓶內溶液混合均勻。次以上，使瓶內溶液混合均勻。 22 22 2.容量瓶的使用 三、實驗實施 容量瓶 容量瓶的檢漏 轉移 初混 定容 23 23 三、實驗實施 （二）. 供試品溶液的配制 加水至距標線約1cm處，等12分鐘，使附在瓶頸內壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至彎液面下緣與標線相切 24 24 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光

13、光度計的使用 1 .實驗儀器的準備實驗儀器的準備 開機自檢開機自檢 25 25 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 1開機自檢結束，按開機自檢結束，按Enter 鍵進入儀器界面鍵進入儀器界面按按Start鍵進入測量界面鍵進入測量界面1 .實驗儀器的準備實驗儀器的準備 進入測量界面進入測量界面按按GOTO 鍵輸入測鍵輸入測量波長，輸入數字量波長，輸入數字“361”按按Enter 鍵確鍵確認輸入認輸入23 26 26 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 2. 吸收池（比色皿）的配對檢查吸收池（比色皿）的配對檢查 清洗清洗比色皿的操作比色皿的操作裝液裝液擦拭擦拭放置放

14、置 27 27 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 2.吸收池（比色皿）的配對檢查吸收池（比色皿）的配對檢查 取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側。裝樣品溶液的體積以池體積的4/5為度，使用揮發性溶液時應加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應無殘留溶劑。吸收池放入樣品室時應注意每次放入方向相同。 28 28 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 2. 吸收池（比色皿）的配對檢查吸收池（比色皿）的配對檢查 比色皿的配對（測透光率）比色皿的配對（測透光率）進入透光率測量界面進入透光率測量界面透光率相差應在透光率相差應在0.3%0.3%以下，以下，否則必須加以校正值

15、否則必須加以校正值 29 29 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 2. 吸收池（比色皿）的配對檢查吸收池（比色皿）的配對檢查 使用后用溶劑及水沖洗干凈，晾干，防塵保存，吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸發煙硝酸（3：1V/V）混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會損壞吸收池的光學表面，并應充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。P57 30 30 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 3. 溶劑空白吸收溶劑空白吸收對溶劑的要求 含有雜原子的有機溶劑，通常均具有很強的末端吸收。因此，當作溶劑使用

16、時，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇。另外，當溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。因此，在檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質）測定其吸收光度，溶劑和吸收池的吸光度應符合表3規定。 P57（通則0401） 31 31 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 3. 溶劑空白吸收溶劑空白吸收 表表3 以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規定以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規定波長范圍（nm） 220240 241250 251300 300以上吸光度 0.40 0.20 0

17、.10 0.05每次測定時應采用同一廠牌批號，混合均勻的同批溶劑。P57（通則0401） 32 32 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 3. 溶劑空白吸收溶劑空白吸收 33 33 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 3. 溶劑空白吸收溶劑空白吸收 34 34 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 4.確定測定波長確定測定波長 123在給定波長2nm處測樣品吸光度，選擇實際最大吸收波長測定波長是多少？測定波長是多少？ 35 35 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用4.確定測定波長確定測定波長 測定時除另有規定者外，應在規定的吸收峰2

18、nm處，再測幾點的吸光度，以核對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸光度最大的波長作為測定波長，除另有規定外吸光度最大波長應在該品種項下規定的波長加減2nm以內，否則應考慮試樣的同一性、純度以及儀器波長的準確度。 P58（通則0401） 36 36 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 5. 供試品溶液的吸光度值的測定供試品溶液的吸光度值的測定 37 37 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 5. 供試品溶液的吸光度值的測定供試品溶液的吸光度值的測定 關于皿差問題： 由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應減去空白讀數，或由儀器自動扣除空白讀數

19、后再計算含量。 （通則0401） 38 38 三、實驗實施 （三）. 紫外-可見分光光度計的使用 5.供試品溶液的吸光度值的測定供試品溶液的吸光度值的測定 供試品溶液的濃度，除各品種項下已有注明者外，供試品溶液的吸光度以在0.30.7之間為宜，吸光度讀書在此范圍誤差較小，并應結合所用儀器吸光度線性范圍，配制合適的讀數濃度。 P58（通則0401） 39 39 三、實驗實施 （四）. 實驗數據的記錄與計算 1. 公式 %100b%1cm1標供稀釋倍數百分含量CEA 40 40 三、實驗實施 （四）. 實驗數據的記錄與計算 2.原始數據記錄表紫外可見分光光度法：記錄儀器型號，檢查溶劑是否符合要求的數據，吸收池的配對情況，供試品與對照品的稱量（平行試驗各2份）及其溶解和稀釋情況，核對供試品溶液的最大吸收峰波長是否正確，測定波長及其吸光度值（或附儀器自動打印記錄），計算式及結