1、豬支原體肺炎疫苗研究進展施堯（南京農業大學動物醫學院，江蘇南京210095）中圖分類號:S858.285.1文獻標志碼：A文章編號:1002-1957（2013）03-0093-03摘要：豬支原體肺炎是嚴重影響世界養豬業的疾病之一，也是造成豬呼吸道病綜合征的主要疾病之一。豬支原體肺炎的商品化疫苗有滅活疫苗和弱毒活疫苗。滅活疫苗主要激發機體的體液免疫，對外周免疫細胞的影響不大?；钜呙缒軌蚣ぐl細胞免疫和黏膜免疫，通過占位效應很好地減少支原體肺炎的發生，但活疫苗肺內注射的免疫途徑限制其大面積推廣，輔以保護性佐劑可經肌肉注射達到很好的免疫效果。新型疫苗如亞單位疫苗和口服微球疫苗已經研制成功，但其商品化

2、仍需一個過程。關鍵詞：豬支原體肺炎；滅活疫苗；弱毒活疫苗；亞單位疫苗豬支原體肺炎（Mycoplasmalpneumoniaofswine,MPS）又稱豬喘氣病，是由豬肺炎支原體Mycoplasmahyopneunwniae»M.hyo）引起的一種慢性呼吸道傳染病。臨床上以咳嗽、氣喘和肺部典型的“蝦肉”樣病變為特征，發病率高，死亡率低。豬肺炎支原體常與其他細菌和病毒混合感染，引起豬地方性肺炎（Enzooticpneumonia,EP）和豬呼吸道病綜合征（Porcinerespiratorydiseasecomplex,PRDC）川。豬肺炎支原體常通過病豬與健康豬接觸或通過飛沫經空氣傳播

3、,其傳播距離一般可達4.7km叫最遠可達9.2km囹。豬肺炎支原體對一些消毒劑及一些惡劣環境如干燥具有抵抗力叫一旦傳入很難徹底撲滅。單純的藥物防控豬支原體肺炎有效，但存在保護期短，必須長期間隔或定時給藥，成本高，易產生耐藥性的缺點咯因此，采用疫苗防控豬支原體肺炎是重要選項。目前用于預防豬肺炎支原體感染的商品化疫苗有滅活疫苗和弱毒疫苗。1豬支原體肺炎滅活疫苗自20世紀90年代豬支原體肺炎滅活疫苗在美國注冊上市以來，己有大量試驗證明免疫豬支原體肺炎滅活疫苗帶來了很大的經濟效益叫Wilson等在德國南部的一個肺炎支原體陽性豬場使用富道喘氣病滅活疫苗（SuvaxynMH-One）免疫45口齡的仔豬發現

4、，免疫組的肺部病變率、屠宰重、日增重與對照組均有顯著差異，這說明SuvaxynMH-One疫苗免疫小于7日齡的仔豬，可有效降低豬感染肺炎支原體對肺部造成的傷害，同時減少體重損失和增加平均日增重，提高了豬的生長性能四。潘延缽等對從美國菌種中心引進的豬肺炎支原體（J株）進行培收稿日期:2013-03-23作者簡介:施堯（1992），男，甘肅山丹人，主妾從事豬病研完.E-mail;vet.shiyaogmaiLconi養、滴定，如顏色變化單位CCU達108/mL以上，用甲醛滅活后，加入自主研發的免疫佐劑-603制成疫苗，免疫豬在6個月內能檢測到保護性抗體，攻毒試驗證明滅活疫苗免疫豬能有效獲得攻毒保護

5、阿。但是滅活疫苗主要激發機體的體液免疫的。Kick等發現，未免疫豬支原體肺炎滅活疫苗的對照組血液CD47細胞的百分數要小于免疫組，然而對照組CD8T細胞及CD4/CD8*T細胞卻多于免疫組,這可能與試驗過程中經歷了斷奶有關，但也間接說明了滅活疫苗對外周免疫細胞的影響不大叫。2豬支原體肺炎弱毒活疫苗2.1免疫效果和安全性劉茂軍等使用豬支原體肺炎活疫苗（168株）在河南3個豬場進行臨床免疫效力試驗，研究結果顯示，免疫豬的肺病變與非免疫組之間都存在顯著差異，疫苗免疫顯著降低了試驗豬的肺病變，這表明豬支原體肺炎活疫苗（168株）具有良好的免疫保護性"。此外,Elsbemd等發現，免疫過豬支原

6、體肺炎活疫苗的豬群比未免疫豬群日增重平均增加17.91g,最高達29.63g,這表明免疫活疫苗對仔豬生長有促進作用咧。與豬瘟疫苗同時免疫也有很好的免疫效果，沈青春等對24頭30-40日齡仔豬分別或同時免疫豬支原體肺炎活疫苗（RM48株）和豬瘟活疫苗（傳代細胞源），結果表明，兩種疫苗同時免疫對各自的近期免疫效力均無明顯影響網。豬支原體肺炎活疫苗（168株）免疫后，免疫豬和同群感染豬均未觀察到典型的臨床癥狀和病理變化;連續5代返強試驗，試驗豬均未觀察到典型的臨床癥狀和病理變化，說明該疫苗株未出現返強。單劑量、單劑量重復和大劑量試驗及5批次疫苗的臨床試驗也未觀察到不良反應的，這說明受試批次豬支原體肺

7、炎活疫苗（168株）具有良好的安全性。2.2免疫機理豬玄原體肺炎疫苗的免疫機理獨特，黏膜免疫和占位效應企免疫過程中發揮重要作用|峋。仔豬出生后57d,不會自然感染肺炎支原體，活疫苗弱毒株通過肺內注射直接到達肺泡黏膜表面，在肺泡表面形成優勢占位，借助黏膜蛋白等營養物質大晝繁殖，最終占據肺泡表面所有的可占用空間(大約需12周時間)，同時，這個過程伴隨機體發生局部黏膜免疫、細胞免疫和體液免疫。此時,如果仔豬吸入感染肺炎支原體野毒株，肺泡表面已缺乏可占據的空位，野毒被抗體中和、淋巴細胞吞噬或衰竭死亡，從而減少喘氣病的發生2.3佐劑和免疫途徑對免疫效果的影響豬支原體肺炎弱毒活疫苗顯示出良好的免疫效果，但

8、由于現有活疫苗采用肺內注射的免疫途徑，一定程度上影響了其廣泛應用。活疫苗輔以佐劑肌肉注射顯示出良好的免疫效果。熊祺琰等發現，免疫刺激復合物(ISCOM)基質佐劑和左旋咪哇+殼聚糖混合佐劑肌肉注射能有效激發細胞免疫應答和體液免疫應答；同時左旋咪哩+黃芷多糖混合佐劑能增強疫苗的細胞免疫刺激能力，而對體液免疫無作用;但是皂角素佐劑未顯示明顯的免疫增強效果網。對ISCOM-基質的研究發現JSCOM-基質不影響活疫苗的活力，并且在體外可直接或協同刀豆蛋白刺激淋巴細胞產生明顯的增殖反應，最低起效濃度為0.01ng/mL;當作為佐劑與活疫苗配合肌肉注射免疫時，可顯著誘導動物對疫苗抗原的細胞免疫應答，體液免疫

9、應答亦有一定程度增強。用肺炎支原體強毒攻毒后25d剖檢，免疫組病變明顯較對照組減輕，顯示出較好的攻毒保護效果叫。趙卓等發現，用6035納米佐劑稀釋豬支原體肺炎凍干活疫苗，肌肉注射，采用“55分計分法”記錄肺臟病變情況，結果表明，疫苗經納米佐劑稀釋后，與用生理鹽水稀釋的疫苗相比，肺炎減少率均達到80%以上，且胸腔免疫與肌肉注射效果相當團。黏膜免疫在豬支原體肺炎免疫應答中發揮重要作用，因此，探究能引起良好免疫應答的口服或噴霧佐劑成為支原體肺炎疫苗研究的熱點。Lin等發現，通過共同噴霧干燥法制作的口服微球疫苗能為豬提供有效的保護力。而經噴霧免疫時，噴霧器在霧化過程中的切割力能顯著降低疫苗的活力。噴霧

10、器噴射壓力越大，對疫苗活力下降的影響越大回。3新型亞單位疫苗的研制Fagan等以肺炎支原體核糖核酸氧化酶Nrdf和半乳糖昔酶R2亞單位的融合蛋白為基礎構建新型亞單位疫苗，免疫此疫苗后用強毒株攻毒,免疫組比未免疫蛆豬肺的損傷率顯著降低。馬豐英等以MAyol68株的基因組為模板，經擴增、轉化大腸桿菌表達、突變、菌株破碎、蛋白純化，純化后加入佐劑制成疫苗，經動物免疫后發現，以P36、P46、P65蛋白為組分和以P36、P46、P65、重組質粒P97R1-Nrdf蛋白為組分的豬支原體肺炎亞單位疫苗均能產生較高水平的抗體，且產生了比常規豬支原體肺炎疫苗免疫組更高水平的IFN-7(7干擾素)，而IFN-y

11、是由T細胞分泌的，是介導細胞免疫的關鍵，在活化巨噬細胞抵抗豬肺炎支原體的過程中發揮著一定的作用。此外，注射2種亞單位疫苗小鼠的脾臟T淋巴細胞誘導的IL-4(白細胞介素4)極顯著高于對照組(P<0.01>,說明這2種亞單位疫苗在激活體液免疫的同時也激活了細胞免疫網。4小結與展望豬支原體肺炎是影響世界生豬養殖業的重要傳染病之一，目前防控豬支原體肺炎的商品化疫苗有滅活疫苗和弱毒活疫苗。滅活疫苗只激發機體的體液免疫，而抗原的制備工藝是滅活疫苗生產的瓶頸，其高滴度和高純度抗原生產工藝仍是國際支原體組織(InternationalResearchProgrammeonComparativeMy

12、coplasmologyJRPCM)在2012年大會上的5項主要議題之一。對肺炎支原體而言，疫苗誘導產生的抗體水平和阻止病原移行及疾病的發生聯系不大，疫苗抗體水平不一定與保護正相關，只為參考性指標。弱毒疫苗能夠激發機體的細胞免疫，通過占位效應而減少喘氣病的發生，免疫效果良好。但弱毒疫苗肺內注射的免疫方法阻礙著其推廣?；钜呙巛o以多種佐劑經肌肉注射能達到良好的免疫效果，因此,探究新型佐劑、改良活疫苗的免疫方法,使活疫苗能夠通過肌肉注射、口服或者噴霧免疫是今后豬支原體肺炎疫苗研究的關鍵。新型疫苗能夠很好地激發機體細胞免疫，然而以天然菌體成分或其分泌物作為亞單位疫苗的組分，其免疫原性雖好，但提取成本高

13、、產量較低，因此,利用基因工程方法制備亞單位疫苗是首選途徑。新型疫苗的商品化也是今后支原體防控的關鍵。參考文獻：1 WoesteK,GrosseBE.Transmissionofagentsoftheporcinerespiratorydiseasecomplex(PRDC)betweenswineherds:areviewPartI-diagnostics,pathogentransmissionviapigmovement(J.DtschTieraratlWochenschr,2007,l14(9):324-326,328-337.2 CardonaAC.PijoanC,DeeSA.Ass

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15、rbornetransportof急性副豬嗜血桿菌病的診治與分析朱秀高(武漢回盛生物科技有限公司，湖北武漢430042)中圖分類號:S858.285.1文獻標志碼：B文章編號：1002-1957(20】3)03-0095-021發病情況2013年3月，江蘇某地區一存欄570頭母豬豬場的保育豬群發病，臨床表現為突然不食、高熱至40T、有輕微呼吸急促癥狀、呈腹式呼吸：兩天后病豬癱瘓在保育床上，并在48小時內死亡：截至筆者現場處理時，全群發病率為48%、死亡率65%,無其他明顯可見臨床表現。發病后先后用阿莫西林(含克拉維酸鉀)及頭泡嚏吠鈉預混劑經飼料給藥治療無明顯效果。將4頭發病癱瘓豬宰殺后解剖,觀

16、察其內臟器官的病理變化，其中肝臟、腎臟、脾臟及淋巴結等部位無任何異常，胃腸等消化器官也無病變。病變局收稀日期:2013-04-18作者簡介：朱秀高(】984-),男，山東圳坊人，執業善醫師，碩士，主要從享動物疾病防治工作.E-mail:zhuxiugaaoinfectiousPRRSVandMycoplasmahyopneumoniaefromaswinepopulationinfectedwithmultipleviralvariantsJ.VeterinaryMicrobiology,2010,145(3-4)：198-208.5 EterpiM,McDonnellG.ThomasV.De

17、contaminationefficacya-gainstMycoplasrTuJ.LettApplMicrobiol,2011,52(2):150-155.6 華利忠，馮志新，劉茂軍，等.豬支原體肺炎疫苗的免疫原理及應用效果概述J.中國獸藥雜志,2012,46(8):58-61.7 MaesD,VerbekeW.Viccaa/.BenefittocostofvaccinationagainstMycoplasmahyopneumoniaeinpigherdsunderBelgianmarketconditionsfrom1996to2000JJ.LivestockProductionScie

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21、面有點狀壞死灶(3/4),關節腔內有大量淡黃色積液(4/4)o圖1心包積水圖2肺臟腫脹2診療情況根據發病情況、臨床癥狀和剖檢病變，筆者懷疑病豬為急性副豬嗜血桿菌感染，在采取治療措施的同時進行實驗室診斷。病豬宰殺后無菌條件下采集心包液和關節液劃線于自制的含NAD(煙酰胺腺嗔沈育春，范學政，王芳，等.豬瘟和豬肺炎支原體活疫苗同時免疫的相互干擾研究幾中國獸藥雜志,2011,45(12):9-12.14 劉茂軍，蘇國東，周勇岐，等.豬支原體肺炎活疫苗168株的安全性研究JJ.中國獸藥雜志,2012,46：I-4.15 王榮祥，楊倩，張小飛，等.氣喘病疫苗免疫效果探討J.畜牧獸醫雜志,2011,30(2):91-95.16 周勇岐，趙永前.豬支原體肺炎168株活疫苗的作用機理與應用J.中國牧業通訊，2008(10):49-52.17 熊祺琰，范志鵬，甘源，等.幾種佐劑對肌肉注射豬支原體肺炎活疫苗免疫刺激能力的增強作用研究