1、實驗一 蛋白質和氨基酸的呈色反應一、 目的要求驗證蛋白質特性；學習和掌握蛋白質呈色反應的原理和方法；學習幾種常用的鑒定蛋白質和氨基酸的方法。二、 實驗原理蛋白質中的某些化學鍵或氨基酸殘基中的某些化學基團可以與某些特殊試劑形成特定的有色物質。這些反應稱為蛋白質的呈色反應。各種蛋白質的氨基酸殘基不完全相同。因此，呈色反應產物的顏色也不完全一樣。呈色反應不是蛋白質所特有，一些非蛋白物質也能呈現類似的呈色反應。因此，不能僅以呈色反應結果來判別被測物質是否為蛋白質。三、 呈色反應雙縮脲反應1.原理兩分子尿素經加熱至180°C后可以縮合成一分子雙縮脲，并放出一分子氨。雙縮脲在堿性溶液中與銅離子結

2、合生成紫紅色絡合物，此反應稱為雙縮脲反應。多肽及所有蛋白質均具有肽鍵，與雙縮脲分子中亞酰胺鍵結構相同，也能發生此反應，因此，蛋白質在堿性溶液中與銅離子也能呈現出類似于雙縮脲的顏色反應。2.器材與試劑1)器材試管、藥匙、電爐、試管夾、滴管。2)試劑1蛋白質溶液(10%卵清蛋白溶液)：吸取雞蛋清溶液10ml，加蒸餾水稀釋，定容至100ml。210%氫氧化鈉溶液。31%硫酸銅(CuSO4)溶液。40.1%甘氨酸(Gly)溶液：稱0.1g甘氨酸溶于蒸餾水中，稀釋至100ml。5結晶尿素。3.實驗步驟雙縮脲反應實驗 (1)制備雙縮脲：取結晶尿素少許(約火柴頭大小)，放入干燥的小試管中。微火加熱至尿素熔解

3、至硬化，剛硬化時立即停止加熱，尿素放出氨，此時雙縮脲即已形成。冷卻后作為雙縮脲樣品(1號管)。(2)另取3支試管，與1號管一起按表加樣，混勻，觀察各管顏色變化，記錄結果并解釋現象。茚三酮反應1.原理蛋白質或氨基酸在弱堿性條件下，其上的氨基與茚三酮共熱可產生藍紫色縮合物。此反應為一切蛋白質和-氨基酸所共有，具有亞氨基的脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應產生特征性的黃色化合物，含有氨基的其他化合物也能呈此反應。2.器材與試劑1)器材濾紙、試管、試管夾、藥匙、電爐、滴管、吸管、水浴鍋。2)試劑1卵清蛋白溶液100ml：與雙縮脲反應相同。20.1%甘氨酸(Gly)溶液。30.1%茚三酮水溶液。40.1%茚三

4、酮-乙醇溶液：0.1g茚三酮溶解于乙醇中并用乙醇定容至100ml。3.實驗步驟與結果觀察(1)取兩支試管，按表加樣。茚三酮反應實驗(2)另取一張濾紙，滴一滴0.1%Gly溶液，風干后，在原處滴一滴0.1%茚三酮-乙醇溶液，在微火旁烘干顯色，觀察紫紅色斑點的出現。黃色反應1.原理在蛋白質分子中，具有芳香環的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)殘基上的芳香環經硝酸作用可生成黃色的硝基化合物，后者在堿性條件下可轉變為橘黃色的硝醌衍生物。多數蛋白質分子含有帶苯環的氨基酸，所以有黃色反應，苯丙氨酸不易硝化，需加入少許濃硫酸后才會有黃色反應。2.器材與試劑1)器材同茚三酮反應2)試劑1卵清蛋白溶液100ml：與雙

5、縮脲反應相同。210%氫氧化鈉溶液。3頭發。4指甲。50.5%苯酚溶液。6濃硝酸。70.3%色氨酸(Trp)溶液。80.3%酪氨酸(Tyr)溶液。3.實驗步驟與結果觀察取6支試管，按表加入試劑，觀察各管出現的現象，有的試管反應慢，可置沸水浴加熱5min。蛋白質的黃色反應實驗 待各管出現黃色后于室溫下逐滴加入10%氫氧化鈉溶液至堿性，觀察顏色變化。實驗結果：雙縮脲反應：1號管紫紅色，2號管淺紫色，3號管藍紫色，4號管藍紫色。因為多肽及所有蛋白質分子均具有肽鍵，與雙縮脲分子中亞酰胺鍵結構相同，也能發生此反應，因此，蛋白質在堿性溶液中與銅離子也能呈現出類似雙縮脲的顏色反應。茚三酮反應：觀察紫紅色斑點黃色反應：1號、2