1、Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 1 / 231Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Tablet of ContentDoc. No./編號(hào)：

2、2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 2 / 23目錄目錄 1. 目的和范圍目的和范圍 .42. .43. .54. 定義與縮寫定義與縮寫 .55. 參考文件參考文件.56. 概述概述.57. 確認(rèn)前準(zhǔn)備確認(rèn)前準(zhǔn)備 .78. 消毒劑消毒效力試驗(yàn)消毒劑消毒效力試驗(yàn).89. 消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn)消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn) .1310. 驗(yàn)證偏差和變更驗(yàn)證偏差和變更.161

3、1. 附錄列表附錄列表.17Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 3 / 23消毒劑的選用原則：目的：確認(rèn)各潔凈級(jí)別的操作間及設(shè)備外表面按照規(guī)定的消毒程序消毒能夠達(dá)到消毒、防止污染的目的，并在消毒劑有效期內(nèi)能確保其消毒效力能符合要求。范圍：本驗(yàn)證方案適用于本公司潔凈區(qū)的墻面、天花板、門窗、機(jī)器設(shè)備、儀器、操作臺(tái)、地漏、推車、桌椅等表面以及

4、操作人員雙手（手套）的消毒等。1.參考文件參考文件1.1.藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南 2003 版1.2.微生物檢測驗(yàn)證技術(shù)（中國醫(yī)藥科技出版社）2.概述概述2.1.本公司的潔凈區(qū)分為 A 級(jí)、C 級(jí)和 D 級(jí)，擬定用于潔凈區(qū)表面消毒的有七種消毒劑：75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.3%新潔爾滅溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、40mg/L 的二氧化氯、60mg/L 的二氧化氯。本次驗(yàn)證方案將選用以上 7 種消毒劑分別進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。作用對(duì)象一樣的消毒劑每月輪換使用，避免表面微生物產(chǎn)生耐藥菌株。在利用消毒劑進(jìn)行表面擦拭消毒過程中消毒劑的作用時(shí)間應(yīng)不少于 10 分鐘，利用消毒劑進(jìn)行浸泡消毒的

5、不少于 5 分鐘。Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 4 / 23消毒劑的種類、消毒對(duì)象、消毒方法和有效期序序號(hào)號(hào)名稱名稱消毒對(duì)象消毒對(duì)象消毒方法消毒方法有效期有效期175%乙醇用于設(shè)備表面、器具和手消毒。采用擦拭或噴灑方式密閉保存 C 級(jí)：7天 D 級(jí)：30 天240mg/L 二氧化氯溶液用于地面、墻面和器具的消毒采用擦拭方式密閉保存

6、 C 級(jí)：7天 D 級(jí)：30 天360mg/L 二氧化氯溶液用于工作服、清潔布和拖布的消毒采用浸泡方式密閉保存 C 級(jí)：7天 D 級(jí)：30 天40.1%新潔爾滅溶液用于地面、墻面、器具、工作服、清潔布、拖布和潔凈鞋的消毒采用擦拭或浸泡方式密閉保存 C 級(jí)：7天 D 級(jí)：30 天50.3%的新潔爾滅溶液用于水池和地漏的消毒用于液封密閉保存 C 級(jí)：7天 D 級(jí)：30 天60.5%醋酸洗必泰溶液用于水池和地漏的消毒用于液封密閉保存 C 級(jí)：7天 D 級(jí)：30 天70.1%醋酸洗必泰溶液用于工作服、清潔布、拖布和潔凈鞋的消毒采用浸泡方式密閉保存 C 級(jí)：7天 D 級(jí)：30 天2.2.為了確認(rèn)消毒劑的

7、消毒效力，通過實(shí)驗(yàn)室考察部分和現(xiàn)場考察部分分別進(jìn)行驗(yàn)證。其中，用定量懸浮試驗(yàn)法和表面實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室考察試驗(yàn)部分。潔凈區(qū)設(shè)施表面材質(zhì)基本都是不銹鋼和玻璃兩種，故表面試驗(yàn)法選用不銹鋼載片和玻璃裁片模擬潔凈區(qū)設(shè)施表面進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。兩種試驗(yàn)方法作用的消毒劑見表。序號(hào)序號(hào)試驗(yàn)方法試驗(yàn)方法消毒劑消毒劑175%乙醇240mg/L 二氧化氯溶液3表面實(shí)驗(yàn)法0.1%新潔爾滅溶液40.3%的新潔爾滅溶液50.1%新潔爾滅溶液660mg/L 二氧化氯溶液70.1%醋酸洗必泰溶液8定量懸浮試驗(yàn)法0.5%醋酸洗必泰溶液Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing C

8、ompounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 5 / 23現(xiàn)場考察試驗(yàn)部分選擇固體車間（D 級(jí)）的制粒一、小容量注射劑車間(C 級(jí))的配液間、灌封間層流罩（A 級(jí)）設(shè)備表面消毒前和消毒后分別進(jìn)行取樣，測定其微生物數(shù)量。3.確認(rèn)前準(zhǔn)備確認(rèn)前準(zhǔn)備3.1.驗(yàn)證用試劑與材料3.1.1.菌種序號(hào)序號(hào)名稱名稱序列號(hào)序列號(hào)1金黃色葡萄球菌CMCC(B)260032大腸埃希菌CMCC(B)441023枯草桿菌芽孢CMCC(B)63501白色念珠菌CMCC(F)

9、 98001 3.1.2.培養(yǎng)基序號(hào)序號(hào)名稱名稱備注備注1營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基4改良馬丁培養(yǎng)基培養(yǎng)基經(jīng) 121，20min 滅菌備用5大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號(hào)：BZW12085）6玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)接觸碟（編號(hào)：BZW15129）規(guī)格：55mm，取樣面積為 25m23.1.3.序號(hào)序號(hào)消毒劑名稱消毒劑名稱中和劑中和劑備注備注175%乙醇20.1%新潔爾滅溶液30.3%的新潔爾滅溶液1%卵磷脂 +0.1%聚山梨酯 80中和劑經(jīng) 121，20min 滅菌備用。Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Com

10、pounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 6 / 23消毒液擬定選用的中和劑40.5%醋酸洗必泰溶液50.1%醋酸洗必泰660mg/L 二氧化氯溶液740mg/L 二氧化氯溶液0.5%硫代硫酸鈉3.1.4.稀釋液0.9%無菌氯化鈉溶液（NS）3.1.5.器具及設(shè)備序號(hào)序號(hào)名稱名稱1無菌移液管2錐形瓶3無菌試管4漩渦混合器5恒溫水浴鍋6恒溫恒濕培養(yǎng)箱7恒溫恒濕培養(yǎng)箱3.2.驗(yàn)證用試劑與材料記錄見附錄 1。4.消毒劑消毒效力試驗(yàn)消毒劑消毒效力試驗(yàn)4

11、.1.中和劑鑒定試驗(yàn)4.1.1.試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^該試驗(yàn)，確認(rèn)所用的中和劑對(duì)對(duì)應(yīng)的消毒劑有良好的中和作用，對(duì)試驗(yàn)用菌劑及其恢復(fù)期培養(yǎng)示范有害或不良影響。4.1.2.菌液的制備及計(jì)數(shù)4.1.2.1.金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌工作菌液的制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng) 1824 小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用 0.9無菌氯化鈉溶液做 10 倍系列稀釋成Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validat

12、ion Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 7 / 2311085108CFU/ml 的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為 11085108CFU/ml，可不再用 0.9無菌氯化鈉溶液稀釋） 。計(jì)數(shù)時(shí)，將 11085108CFU/ml 的工作菌液 10 倍系列稀釋成含 50100CFU/ml 菌液，并同時(shí)采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 3035培養(yǎng) 2 天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。4.1.2.2.白色念珠菌工作菌液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng) 2448 小時(shí)。取上

13、述培養(yǎng)物用0.9無菌氯化鈉溶液做 10 倍系列稀釋成 11085108CFU/ml 的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為 11085108CFU/ml，可不再用 0.9無菌氯化鈉溶液稀釋） 。計(jì)數(shù)時(shí)，將 11085108CFU/ml的工作菌液 10 倍系列稀釋成含 50100CFU/ml 菌液，并同時(shí)采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 2328培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。4.1.3.鑒定試驗(yàn)操作4.1.3.1.配制 75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.3%新潔爾滅溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、40mg/L 的二氧化氯、60mg/L 的二

14、氧化氯，具體操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理 。將配置好的消毒劑置 201恒溫水浴鍋中備用。4.1.3.2.分組操作試驗(yàn)分組及稀釋操作方法簡表混合液 A混合液 B組號(hào)取 0.5ml 工作菌液加入下列溶液中取混合液 A 0.5ml加入下列溶液取混合液 B 或混合液B 的稀釋級(jí)溶液0.5ml 平板計(jì)數(shù)（2 皿/組）1消毒劑 4.5ml稀釋液 4.5ml混合液 B、10-12消毒劑 4.5ml混勻作用10min中和劑 4.5ml混勻作用10min混合液 B、10-1Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect o

15、f the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 8 / 23具體操作第 1 組目的：觀察消毒液對(duì)試驗(yàn)菌有無殺滅或抑制能力。操作：取消毒劑 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混勻作用 10min 后，取混合液 0.5ml+稀釋液 4.5ml，混勻作用10min，取 0.5ml 注皿，平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3035培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 2328培養(yǎng)5 天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。第 2 組目的：觀察殘留消毒劑被中

16、和后受到消毒劑作用后的試驗(yàn)菌是否恢復(fù)生長。操作：取消毒劑 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混勻作用 10min 后，取混合液 0.5ml +中和劑 4.5ml，混勻作用10min，用稀釋液稀釋成 10-1。分別取未稀釋溶液（混合液 0.5mll+中和劑 4.5ml 的混合液）及 10-1 0.5ml 注皿，各平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于 3035培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置于 2328培養(yǎng) 5 天計(jì)數(shù)。第 3 組目的：觀察中和劑是否有抑菌性操作：取中和劑 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混勻作用 10min，

17、取混合液 0.5ml l+稀釋液 4.5ml，混勻作用10min 后，用稀釋液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 10-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級(jí) 0.5ml 注皿，各稀釋級(jí)平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3035培養(yǎng)3中和劑 4.5ml稀釋液 4.5ml10-2、10-34中和產(chǎn)物4.5ml（消毒液與中和劑比例為 1:1）稀釋液 4.5ml10-2、0-35稀釋液 4.5ml稀釋液 4.5ml10-2、10-36稀釋液和中和劑各 1.0ml 注入無菌平皿中，各制備 2 皿。Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and S

18、anitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 9 / 233 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3035培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。第 4 組目的：觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和殘留消毒劑對(duì)試驗(yàn)菌的生長繁殖是否有影響。操作：取消毒劑和中和劑 1:1 的混合液 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混勻作用 10min，取混合液 0.5ml l+稀釋液4.5ml，混勻作用 10min 后，用稀釋液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 1

19、0-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級(jí) 0.5ml 注皿，各稀釋級(jí)平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3035培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3035培養(yǎng) 3 天計(jì)。第 5 組目的：作菌落數(shù)對(duì)照用操作：取稀釋液 4.5ml+工作菌液 0.5ml，混勻作用 10min，取混合液 0.5ml l+稀釋液 4.5ml，混勻作用10min 后，用稀釋液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 10-2、10-3。取相應(yīng)稀釋級(jí) 0.5ml 注皿，各稀釋級(jí)平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3035培養(yǎng)3 天計(jì)

20、數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3035培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)。第 6 組目的：作為陰性對(duì)照用操作：分別取稀釋液和中和劑各 1.0ml 注入無菌平皿中，各制備 2 皿。4.1.3.3.結(jié)果判斷試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。第 1 組無菌生長，或僅有少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長。第 2 組菌落數(shù)比第 1 組菌落數(shù)多，但比第 3、4、5 組菌落數(shù)少，且符合下表要求第第 1 組平板平均菌落數(shù)第 2 組平板平均菌落數(shù)05x(x+5)y(y+0.5y)Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect o

21、f the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 10 / 233、4、5 組有相似菌落數(shù)生長，其每組間菌落數(shù)誤差率不超過 15%。計(jì)算公式如下：（3 組間菌落平均數(shù)-各組菌落平均數(shù)）的絕對(duì)值之和誤差率10033 組間菌落平均數(shù)第 6 組無菌生長。否則，說明試劑有污染，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。4.1.4.中和劑鑒定試驗(yàn)記錄見附錄 2。4.2.定量懸浮試驗(yàn)4.2.1.試驗(yàn)?zāi)康挠捎?0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液、60mg/L 二氧化氯溶液、0.1%醋酸洗必泰溶液、0.5%醋酸洗必泰溶液

22、是通過浸泡或液封消毒，通過定量懸浮試驗(yàn)，確定其消毒效力是否符合要求。4.2.2.試驗(yàn)操作4.2.2.1.配制 0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液、60mg/L 二氧化氯溶液、0.1%醋酸洗必泰溶液、0.5%醋酸洗必泰溶液，操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置 201恒溫水浴鍋中備用。4.2.2.2.由于 0.3%的新潔爾滅溶液、0.1%新潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰溶液、60mg/L 二氧化氯溶液為高效消毒劑，能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗(yàn)用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希

23、菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌。4.2.2.3.將菌液制備成 11085108CFU/ml 的工作菌液，菌液的制備及計(jì)數(shù)同 8.1.2。4.2.2.4.將試管按需要分組排列在試管架上，試驗(yàn)組分 3 組（4min、5min、6min 各一組），并由左向右逐管標(biāo)明消毒劑、中和劑、10-1、10-2。對(duì)照組分 1 組，并由左向右逐管標(biāo)明稀釋液、中和劑、10-1、10-2、10-3、10-4。4.2.2.5.向個(gè)試管加入 4.5ml 相應(yīng)的試劑，標(biāo)明 10-1、10-2、10-3、10-4。加入 4.5ml 的稀釋液。4.2.2.6.吸取工作菌液 0.5ml 加入標(biāo)明消毒劑的試管中，對(duì)照組加入標(biāo)明稀釋液

24、的試管中，迅Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 11 / 23速混勻，并開始計(jì)時(shí)。4.2.2.7.待菌液與消毒劑相互作用至 8min、10min、12min，吸取菌液和消毒劑混合液 0.5ml，加入標(biāo)明中和劑的試管中，迅速混勻。 4.2.2.8.中和作用 10min 后，吸取 0.5ml 加入標(biāo)明 10-1的試管中，混勻后吸取 0.5m

25、l 加入標(biāo)明 10-2試管中（對(duì)照組以此類推，對(duì)照組直至 10-4） 。4.2.2.9.試驗(yàn)組分別取中和劑管、10-1、10-2管溶液 1ml 按平皿法測定存活菌數(shù)；對(duì)照組取 10-3、10-41ml 按平皿法測定存活菌數(shù)。每管平行制備 2 皿。4.2.2.10.金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于 3035培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置于 2328培養(yǎng) 5 天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。4.2.3.結(jié)果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的活菌濃度 （CFU/ml） ，并換算為對(duì)數(shù)值（N） ，并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值: 殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（NO

26、）試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值（NX）4.2.4.可接受標(biāo)準(zhǔn)殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)應(yīng)不低于 35 個(gè)對(duì)數(shù)單位。4.2.5.定量懸浮試驗(yàn)記錄見附錄 34.3.表面試驗(yàn)法4.3.1.試驗(yàn)?zāi)康挠捎?75%乙醇、40mg/L 二氧化氯溶液、0.1%新潔爾滅溶液是通過擦拭消毒，故選用不銹鋼載片和玻璃裁片進(jìn)行表面試驗(yàn)法，確定其消毒效力是否符合要求。4.3.2.菌種選擇由于 75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。40mg/L 二氧化氯溶液為高效消毒劑，能殺滅芽孢，故定量懸浮試驗(yàn)用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌

27、。4.3.3.工作菌液制備工作菌液的制備方法、濃度及驗(yàn)證同步計(jì)數(shù)操作同 8.1.2。4.3.4.試驗(yàn)操作4.3.4.1.（1）染菌不銹鋼載片制備Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 12 / 23將經(jīng)滅菌的載片平鋪于無菌平皿內(nèi)，滴加金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌含菌量為11085108CFU 的菌液 0.1ml，并均勻涂布于整個(gè)

28、載體表面。滴染菌液后，載片置超凈工作臺(tái)晾干后備用。每種菌平行制備兩個(gè)染菌不銹鋼載片。（2）染菌玻璃載片制備因培養(yǎng)皿的材質(zhì)為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻璃載片進(jìn)行染菌試驗(yàn)。進(jìn)行菌液滴染前，用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積（50mm50mm） ，標(biāo)注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。4.3.4.2.試驗(yàn)組：將消毒劑擦拭在制備好的染菌載片上，消毒劑作用時(shí)間分別為 8min、10min、12min，不銹鋼載片和玻璃載片每個(gè)作用時(shí)間分別制備 2 個(gè)。作用結(jié)束后，用接觸碟取樣（接觸碟規(guī)格：55mm，取樣面積為 25m2） 。取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸

29、碟（編號(hào)：BZW12085） ；取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號(hào)：BZW15129） 。接觸碟取樣方法：打開接觸碟蓋，使無菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸 10 秒左右，在蓋上跌蓋。對(duì)照組對(duì)照組的活菌濃度計(jì)數(shù)見 8.3.3。.陰性對(duì)照：用接觸碟在已滅菌的載片上（未染菌片的載）按壓取樣，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。4.3.4.3.培養(yǎng)將取樣金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的接觸碟倒置于 3035培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；取樣白色念珠菌的接觸碟倒置于 2328培養(yǎng) 5 天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。4.3.4.4.結(jié)果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)

30、組和對(duì)照組的活菌濃度 （CFU/ml） ，并換算為對(duì)數(shù)值（N） ，并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值: 殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（NO）試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值（NX）4.3.4.5.可接受標(biāo)準(zhǔn)殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)應(yīng)不低于 35 個(gè)對(duì)數(shù)單位。Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 13 / 234.3.5.表面試驗(yàn)法記錄見附錄 54.

31、4.現(xiàn)場考察試驗(yàn)4.4.1.消毒前對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。取樣地點(diǎn)：固體車間（D 級(jí)）的制粒間一墻壁和設(shè)備表面、小容量注射劑車間(C 級(jí))的配液間墻壁和設(shè)備表面、灌封間層流罩（A 級(jí)）下設(shè)備表面。取樣操作及檢驗(yàn)執(zhí)行表面微生物檢驗(yàn) 。4.4.2.生產(chǎn)操作結(jié)束后操作人員按照生產(chǎn)區(qū)清潔對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行清潔消毒。4.4.3.清潔消毒完畢 15 分鐘后，現(xiàn)場 QA 對(duì)清潔消毒后的潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。取樣地點(diǎn)：固體車間（D 級(jí)）的制粒間一墻壁和設(shè)備表面、小容量注射劑車間(C 級(jí))的配液間墻壁和設(shè)備表面、灌封間層流罩（A 級(jí)）下設(shè)備表面。取樣操作及檢驗(yàn)執(zhí)行表面微生物檢驗(yàn) 。4.4.4.至少進(jìn)行 3 次

32、試驗(yàn)。4.4.5.可接受標(biāo)準(zhǔn)消毒后：A 級(jí)：1CFU/25cm2C 級(jí)：25CFU/25cm2D 級(jí)：50CFU/25cm24.4.6.現(xiàn)場考察試驗(yàn)記錄見附錄 55.消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn)消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn)5.1.試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^該試驗(yàn)，確定消毒劑在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的，并且消毒效力不會(huì)變化，符合要求。5.2.試驗(yàn)操作5.2.1.配制 75%乙醇、0.1%新潔爾滅溶液、0.3%新潔爾滅溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、60mg/L 的二氧化氯。操作與儲(chǔ)存執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理 。40mg/L 的二氧化氯為配制臨配新用，不做有效期考察。5.2.2.在消毒劑儲(chǔ)存的第 0 天、第 6 天、第 7

33、 天、第 8 天、第 28 天、第 30 天、第 32 天取樣試驗(yàn)。0.1%新潔爾滅溶液、0.3%新潔爾滅溶液、0.1%醋酸洗必泰、0.5%醋酸洗必泰、60mg/L 二氧化氯試驗(yàn)操作同 8.2 定量懸浮試驗(yàn)。75%乙醇試驗(yàn)操作同 8.3 表面試驗(yàn)。Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 14 / 235.2.3.結(jié)果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的

34、活菌濃度 （CFU/ml） ，并換算為對(duì)數(shù)值（N） ，并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值： 殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（NO）試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值（NX）5.2.4.可接受標(biāo)準(zhǔn)在消毒液有效期末，殺滅對(duì)數(shù)值 (KL)應(yīng)不低于 35 個(gè)對(duì)數(shù)單位。5.3.消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn)記錄見附錄 66.附錄列表附錄列表序號(hào)序號(hào)文件名稱文件名稱1附錄 1：驗(yàn)證用試劑與材料2附錄 2：中和劑鑒定試驗(yàn)記錄3附錄 3：定量懸浮試驗(yàn)記錄4附錄 4：表面試驗(yàn)記錄5附錄 5：現(xiàn)場考察試驗(yàn)記錄6附錄 6：消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn)記錄Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitiz

35、ing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 15 / 23TEST METHOD VALIDATION PROTOCOL分析方法驗(yàn)證方案分析方法驗(yàn)證方案方案編號(hào)方案編號(hào)(版本號(hào)版本號(hào):):Protocol No. (Version:) :(V: )TMP-07-077分析方法名稱分析方法名稱 TEST METHOD:QUALIFICATION OF DISINFECTANT EFFECTIVENESS AND STABILITY 消

36、毒劑效力及有效期確認(rèn)方案消毒劑效力及有效期確認(rèn)方案Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 16 / 23 PROTOCOL APPROVAL PAGE方案批準(zhǔn)頁方案批準(zhǔn)頁P(yáng)ROTOCOL PREPARATION 方案準(zhǔn)備方案準(zhǔn)備WYETH PHARMACEUTICAL CO., LTD. 惠氏制藥有限公司惠氏制藥有限公司SIGNATURE

37、簽名簽名DATE 日期日期 QC Microbial Analyst QC Microbial AnalystPROTOCOL REVIEW 方案復(fù)核方案復(fù)核QC Senior AnalystQC ManagerQAValidation OfficerPROTOCOL APPROVAL 方案批準(zhǔn)方案批準(zhǔn) Senior QO Manager Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效

38、力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 17 / 23 PROTOCOL REVISION HISTORY PAGE方案修訂歷史記錄頁方案修訂歷史記錄頁REVISION NUMBER修訂次數(shù)修訂次數(shù)VERSION 版本號(hào)版本號(hào)REVISION CONTENT修訂內(nèi)容修訂內(nèi)容01Original 原稿Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 1

39、8 / 231.目的目的 PURPOSE.52.范圍范圍 SCOPE.53.引言引言 INTRODUCTION.54.參考資料參考資料 REFENRENCE.65.驗(yàn)證方法驗(yàn)證方法 TEST METHOD.65.1.所用儀器和物料所用儀器和物料 .65.2.測試工作菌種測試工作菌種.65.3.實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序.66.接受標(biāo)準(zhǔn)接受標(biāo)準(zhǔn).86.1.消毒效力接受標(biāo)準(zhǔn)：消毒效力接受標(biāo)準(zhǔn)：.86.2.中和效力控制及其接受標(biāo)準(zhǔn)：中和效力控制及其接受標(biāo)準(zhǔn)：.8Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of th

40、e Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 19 / 23目的目的 PURPOSE驗(yàn)證惠氏蘇州工廠目前使用的幾種消毒劑 Process LpHse: 酸性、Process Vesphene se:堿性、Ethanol 酒精溶液、快活溶液，在不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面等不同材質(zhì)上的消毒效力，同時(shí)驗(yàn)證消毒劑的使用有效期。范圍范圍 SCOPE本驗(yàn)證需要驗(yàn)證的消毒劑有：Process LpHse: (酸性)、Process Vesphene se:(堿性)、Ethanol 酒精溶液、快

41、活溶液 FORWARD disinfectant 四種。表 1：各消毒劑使用時(shí)涉及的材質(zhì)消毒劑消毒劑類型類型適用對(duì)象適用對(duì)象所涉及的材質(zhì)所涉及的材質(zhì)Process LpHse: 酸性酚類消毒劑（廣譜、中效）生產(chǎn)設(shè)備/器具/車間地面、墻壁、天花板不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面Process Vesphene se:堿性酚類消毒劑（廣譜、中效）車間設(shè)備/器具/操作間地漏不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面Ethanol 酒精溶液醇類消毒劑（中效）生產(chǎn)設(shè)備/器具/微生物實(shí)驗(yàn)室不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面快活溶液季銨鹽類消毒劑（低效）車間地面、墻壁、天花板/非控制區(qū)域、車間公

42、用區(qū)不銹鋼、橡膠、瓷磚、玻璃、塑料門簾、墻面引言引言 INTRODUCTION本驗(yàn)證的原理是，在某種材質(zhì)表面接種 0.1ml (104-105CFU)的菌種，室溫下自然風(fēng)干后，將消毒劑直接噴在材質(zhì)表面，等消毒劑作用一段時(shí)間后，檢驗(yàn)沒有被殺滅的細(xì)菌數(shù)；根據(jù)細(xì)菌被殺滅的數(shù)量，來判斷消毒劑的殺菌效果。實(shí)際消毒操作時(shí)，消毒劑噴到要消毒物體表面后，再通過人為的涂擦等操作使消毒劑與物體表面充分接觸，同時(shí)，此操作也會(huì)機(jī)械去除掉一部分微生物。在該驗(yàn)證中，消毒劑是噴到材質(zhì)表面，這種方法要比實(shí)際消毒時(shí)的效果差，因此驗(yàn)證的結(jié)果更能體現(xiàn)實(shí)際的消毒效果。參考資料參考資料 REFENRENCEDisinfectant E

43、ffectiveness Study（812-Analytical Report-0807-1.0）SOPTS-35(V5)驗(yàn)證方法驗(yàn)證方法 TEST METHOD1.1.所用儀器和物料 所用培養(yǎng)皿、移液管、容器均在 121 度下滅菌 30 分鐘后使用Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 20 / 23 無菌一次性培養(yǎng)皿，移液管。 生物安

44、全柜(BHC-1300A/B3生物安全柜)工作窗口吸入風(fēng)速為0.5m/s 滅菌鍋培養(yǎng)箱（25 度和 32 度各一個(gè)）1.2.測試工作菌種大腸埃希菌（ CMCC(B)44102）菌種斜面金黃色葡萄球菌 （CMCC(B)26003）菌種斜面白色念珠菌（ CMCC98001）菌種斜面環(huán)境菌種科氏葡萄球菌斜面（六、九、十月環(huán)境檢測沉降菌平板上連續(xù)檢出科氏葡萄球菌，特選此菌為環(huán)境菌種）需驗(yàn)證的消毒劑應(yīng)質(zhì)量合格并在有效期即將結(jié)束時(shí)開始驗(yàn)證試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)所用的儀器設(shè)備均在校正合格期限內(nèi)。1.3.實(shí)驗(yàn)程序消毒劑的配置：消毒劑按照相關(guān)的程序進(jìn)行稀釋，配置好的消毒劑溶液儲(chǔ)存在實(shí)際操作時(shí)使用的噴壺中，在有效期內(nèi)（7 天

45、）每天模擬日常使用方法使用，第 8 天開始驗(yàn)證試驗(yàn)。消毒劑配置方法及消毒反應(yīng)時(shí)間見表 2.材質(zhì)的準(zhǔn)備：所需的材質(zhì)均是在實(shí)際操作中消毒劑所消毒的表面材質(zhì)，準(zhǔn)備的材質(zhì)需為無菌材質(zhì)，在實(shí)驗(yàn)過程中，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組需 3 塊同種材質(zhì)同時(shí)進(jìn)行。 表 2.消毒劑配置方法及消毒反應(yīng)時(shí)間消毒劑消毒劑稀釋比例稀釋比例反應(yīng)時(shí)間反應(yīng)時(shí)間菌種菌種Process LpHse: 酸性1:256(v/v)3,5,10minutes大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌Process Vesphene se:堿性1:128(v/v)3,5,10minutes大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌Ethanol 酒精

46、溶液75%2,3,5minutes大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案Page/頁碼： 21 / 23科氏葡萄球菌快活溶液1:10(v/v)3,5,10minutes大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌科氏葡萄球菌Comment s1: 多少時(shí)間？Doc. No./編號(hào)：2008244712045Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Pr