1、第四章第四章 紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)可見(jiàn)分光光度計(jì)學(xué)習(xí)要求學(xué)習(xí)要求掌握：掌握：紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)工作原理、基本可見(jiàn)分光光度計(jì)工作原理、基本 類(lèi)型及其特點(diǎn)類(lèi)型及其特點(diǎn) 紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)及各可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)及各 部件的基本功能部件的基本功能 熟悉：熟悉：紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo) 、常常 見(jiàn)故障及排除方法見(jiàn)故障及排除方法 了解：紫外了解：紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)準(zhǔn)確性的影響因可見(jiàn)分光光度計(jì)準(zhǔn)確性的影響因 素和應(yīng)用素和應(yīng)用 內(nèi)內(nèi) 容容 提提 要要紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作原理和基本結(jié)構(gòu)可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作原理和基本結(jié)構(gòu) 紫外紫

2、外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)的分類(lèi)可見(jiàn)分光光度計(jì)的分類(lèi) 紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)及準(zhǔn)確性影響因素及準(zhǔn)確性影響因素紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)的常見(jiàn)故障及排除方法可見(jiàn)分光光度計(jì)的常見(jiàn)故障及排除方法紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)的應(yīng)用可見(jiàn)分光光度計(jì)的應(yīng)用 分光光度計(jì)分光光度計(jì)：指能夠從含有各種波長(zhǎng)的指能夠從含有各種波長(zhǎng)的混合光中將每一單色光分離出來(lái)并測(cè)量混合光中將每一單色光分離出來(lái)并測(cè)量其強(qiáng)度的儀器。根據(jù)其使用光的波長(zhǎng)范其強(qiáng)度的儀器。根據(jù)其使用光的波長(zhǎng)范圍不同，分光光度計(jì)又可分為紫外分光圍不同，分光光度計(jì)又可分為紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光分光光度計(jì)、紅外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光

3、分光光度計(jì)、紅外分光光度計(jì)和全波段分光光度計(jì)。光度計(jì)和全波段分光光度計(jì)。 現(xiàn)代常用的分光光度計(jì)通常將紫外現(xiàn)代常用的分光光度計(jì)通常將紫外分光光度計(jì)和可見(jiàn)光分光光度計(jì)合并在分光光度計(jì)和可見(jiàn)光分光光度計(jì)合并在一起，稱(chēng)為紫外一起，稱(chēng)為紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)可見(jiàn)分光光度計(jì) 第一節(jié)第一節(jié) 紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)可見(jiàn)分光光度計(jì) 的工作原理和基本結(jié)構(gòu)的工作原理和基本結(jié)構(gòu)：不不同的物質(zhì)會(huì)吸收不同波長(zhǎng)的光。改變?nèi)肷渫奈镔|(zhì)會(huì)吸收不同波長(zhǎng)的光。改變?nèi)肷涔獾牟ㄩL(zhǎng)，并依次記錄物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光光的波長(zhǎng)，并依次記錄物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收程度，就得到該物質(zhì)的吸收光譜的吸收程度，就得到該物質(zhì)的吸收光譜 。 第一節(jié)第一節(jié) 紫

4、外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)可見(jiàn)分光光度計(jì) 的工作原理和基本結(jié)構(gòu)的工作原理和基本結(jié)構(gòu)一、紫外一、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作原理可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作原理 每一種物質(zhì)都有其特定的吸收光譜，因每一種物質(zhì)都有其特定的吸收光譜，因此可根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜來(lái)分析物質(zhì)的構(gòu)、此可根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜來(lái)分析物質(zhì)的構(gòu)、含量和純度，這就是吸收光譜分析法的理論含量和純度，這就是吸收光譜分析法的理論基礎(chǔ)。基礎(chǔ)。 光的吸收定律（朗伯光的吸收定律（朗伯-比爾定律比爾定律 ）：當(dāng)：當(dāng)用一束單色光照射吸收溶液時(shí)，其吸光度用一束單色光照射吸收溶液時(shí)，其吸光度與液層厚度與液層厚度b及溶液濃度及溶液濃度c的乘積成正比。的乘積成正比。 一、

5、紫外一、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作原理可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作原理 kbcIIT100J朗伯-比爾定律：I I0 0：入射光強(qiáng)度入射光強(qiáng)度b:b:液層厚度液層厚度T:T:透光度透光度k:k:吸光系數(shù)吸光系數(shù)kbcTIIIITA1lglglglg00C:C:溶液濃度溶液濃度I:I:透射光強(qiáng)度透射光強(qiáng)度A:A:吸光度吸光度一、紫外一、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作原理可見(jiàn)分光光度計(jì)的工作原理 朗伯-比爾定律適用的條件是： 入射光為單色光。波長(zhǎng)范圍越大，單色光純度越低，對(duì)朗伯-比耳定律的偏離就越大。溶液濃度不能過(guò)大。在一定濃度范圍內(nèi)的溶液中，鄰近分子的存在并不改變每一給定分子的特性，即分子間互不干擾。當(dāng)溶液

6、濃度很大時(shí)，由于溶液分子的相互干擾，該定律不再成立。 二、紫外二、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu) 二、紫外二、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu) 光源（光源（light sourcelight source）：）：提供入射光的裝置。 不同類(lèi)型的分光光度計(jì)根據(jù)需要配有不同的光源，但對(duì)光源有兩個(gè)基本要求：1.在所需波長(zhǎng)范圍的光譜區(qū)域內(nèi)發(fā)射連續(xù)光譜；2.有足夠的輻射強(qiáng)度并能長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定。 二、紫外二、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu) 幾種常用光源比較幾種常用光源比較光源波長(zhǎng)范圍(nm) 特 點(diǎn)鎢燈3302500鎢絲易蒸發(fā)，壽命短。主要用

7、于可見(jiàn)光區(qū)鹵鎢燈3302500加入鹵素使用壽命延長(zhǎng)，穩(wěn)定性好氫燈150400用于紫外區(qū)氘燈150400發(fā)光強(qiáng)度比氫燈高35倍汞燈254734用于紫外或熒光分析儀 二、紫外二、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu) 單色器（單色器（monochromatormonochromator）：是將來(lái)自光源的是將來(lái)自光源的復(fù)合光分解為單色光并分離出所需波段光束的復(fù)合光分解為單色光并分離出所需波段光束的裝置，是分光光度計(jì)的關(guān)鍵部件。裝置，是分光光度計(jì)的關(guān)鍵部件。主要包括：主要包括： 入射狹縫入射狹縫 色散元件，包括棱鏡和光柵色散元件，包括棱鏡和光柵 準(zhǔn)直鏡準(zhǔn)直鏡 出射狹縫組成。出射狹縫組成

8、。 二、紫外二、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu) 吸收池（吸收池（absorption cellabsorption cell）：又稱(chēng)為比色皿、又稱(chēng)為比色皿、比色杯、樣品池或液槽等，是用來(lái)盛放被測(cè)比色杯、樣品池或液槽等，是用來(lái)盛放被測(cè)溶液的器件。同時(shí)也決定著透光液層厚度、溶液的器件。同時(shí)也決定著透光液層厚度、特定波長(zhǎng)光的透光度等多種參數(shù)，應(yīng)具有良特定波長(zhǎng)光的透光度等多種參數(shù)，應(yīng)具有良好的透光性和較強(qiáng)的耐腐蝕性。可見(jiàn)光范圍好的透光性和較強(qiáng)的耐腐蝕性。可見(jiàn)光范圍內(nèi)：用無(wú)色光學(xué)玻璃或塑料制作；紫外光范內(nèi)：用無(wú)色光學(xué)玻璃或塑料制作；紫外光范圍內(nèi)：需用能透紫外線(xiàn)的石英玻璃或藍(lán)寶石圍

9、內(nèi)：需用能透紫外線(xiàn)的石英玻璃或藍(lán)寶石制作。制作。 二、紫外二、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu) 檢測(cè)器：檢測(cè)器：把光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)的裝置稱(chēng)為檢把光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)的裝置稱(chēng)為檢測(cè)器，又稱(chēng)為光電轉(zhuǎn)換器。測(cè)器，又稱(chēng)為光電轉(zhuǎn)換器。 常用的檢測(cè)器有：常用的檢測(cè)器有： 光電管光電管 光電倍增管光電倍增管 光電二極管陣列光電二極管陣列 二、紫外二、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu) 信號(hào)顯示系統(tǒng)：信號(hào)顯示系統(tǒng)：是把放大的信號(hào)以適當(dāng)?shù)姆绞绞前逊糯蟮男盘?hào)以適當(dāng)?shù)姆绞斤@示或記錄下來(lái)的裝置。顯示或記錄下來(lái)的裝置。常用的信號(hào)顯示裝置有：常用的信號(hào)顯示裝置有： 指針顯示指針顯

10、示 LD數(shù)字顯示數(shù)字顯示 VGA屏幕顯示屏幕顯示 計(jì)算機(jī)顯示計(jì)算機(jī)顯示 第二節(jié)第二節(jié) 紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的分類(lèi)可見(jiàn)分光光度計(jì)的分類(lèi)按其光學(xué)系統(tǒng)分可分為按其光學(xué)系統(tǒng)分可分為 單波長(zhǎng)分光光度計(jì)：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)分光光度計(jì)： 單光束單波長(zhǎng)分光光度計(jì)單光束單波長(zhǎng)分光光度計(jì) 雙光束單波長(zhǎng)分光光度計(jì)雙光束單波長(zhǎng)分光光度計(jì) 雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)單光束分光光度計(jì)特點(diǎn)單光束分光光度計(jì)特點(diǎn)單光束光路，從光源到試樣至接收器只有一單光束光路，從光源到試樣至接收器只有一個(gè)光通道，使用中依次對(duì)參考樣品和待測(cè)試樣個(gè)光通道，使用中依次對(duì)參考樣品和待測(cè)試樣進(jìn)行測(cè)定；進(jìn)行測(cè)定；只有一個(gè)色散元件，工作波長(zhǎng)范圍較窄；只有一個(gè)

11、色散元件，工作波長(zhǎng)范圍較窄；通常采用直接接收放大顯示的簡(jiǎn)單電子系統(tǒng)，通常采用直接接收放大顯示的簡(jiǎn)單電子系統(tǒng)，用電表或數(shù)字顯示；用電表或數(shù)字顯示；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、附件少、功能范圍小，不能做特結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、附件少、功能范圍小，不能做特殊試樣測(cè)定。殊試樣測(cè)定。 單光束分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖單光束分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖雙光束分光光度計(jì)特點(diǎn)雙光束分光光度計(jì)特點(diǎn)從光源到檢測(cè)器有試樣光路和參考光路兩條從光源到檢測(cè)器有試樣光路和參考光路兩條通路，可同時(shí)對(duì)檢測(cè)樣品和參考樣品進(jìn)行測(cè)定，通路，可同時(shí)對(duì)檢測(cè)樣品和參考樣品進(jìn)行測(cè)定，直接獲得檢測(cè)數(shù)據(jù)直接獲得檢測(cè)數(shù)據(jù) ；一般采用兩個(gè)光柵或棱鏡加光柵的雙單色器，一般采用兩個(gè)光柵或棱鏡加光

12、柵的雙單色器，能有效地提高分辨率和降低雜散光能有效地提高分辨率和降低雜散光 ；可裝備各種附件，光、電、機(jī)緊密結(jié)合，功可裝備各種附件，光、電、機(jī)緊密結(jié)合，功能范圍較寬能范圍較寬 ；大大簡(jiǎn)化測(cè)定程序，可以進(jìn)行波長(zhǎng)自動(dòng)掃描。大大簡(jiǎn)化測(cè)定程序，可以進(jìn)行波長(zhǎng)自動(dòng)掃描。 雙光束分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖雙光束分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖比值比值雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)特點(diǎn)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)特點(diǎn)從同一光源發(fā)出的光分為兩束，分別經(jīng)兩個(gè)從同一光源發(fā)出的光分為兩束，分別經(jīng)兩個(gè)單色器分光后得到兩束不同波長(zhǎng)（單色器分光后得到兩束不同波長(zhǎng)（1 1，2 2）的單色光，經(jīng)切光器使兩束光以一定頻率交替的單色光，經(jīng)切光器使兩束光以一定頻率交替照射同一

13、樣品，然后經(jīng)過(guò)檢測(cè)器顯示出兩個(gè)波照射同一樣品，然后經(jīng)過(guò)檢測(cè)器顯示出兩個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度差值（長(zhǎng)下的吸光度差值（A=AA=A1 1-A-A2 2）；）；雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)不用參比溶液，只用一個(gè)雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)不用參比溶液，只用一個(gè)待測(cè)溶液，能較好的解決由于非特征吸收信號(hào)待測(cè)溶液，能較好的解決由于非特征吸收信號(hào)影響而帶來(lái)的誤差，大大提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度。影響而帶來(lái)的誤差，大大提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度。雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)示意圖 第三節(jié)第三節(jié) 紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)的可見(jiàn)分光光度計(jì)的 性能指標(biāo)及準(zhǔn)確性影響因素性能指標(biāo)及準(zhǔn)確性影響因素一、性能指標(biāo)一、性能指標(biāo) ( (一一) )波長(zhǎng)準(zhǔn)確度

14、和波長(zhǎng)重復(fù)性波長(zhǎng)準(zhǔn)確度和波長(zhǎng)重復(fù)性 ( (二二) )光度準(zhǔn)確度光度準(zhǔn)確度 ( (三三) )光度線(xiàn)性范圍光度線(xiàn)性范圍 ( (四四) )分辨率分辨率 ( (五五) )光譜帶寬光譜帶寬 ( (六六) )雜散光雜散光 ( (七七) )基線(xiàn)穩(wěn)定度基線(xiàn)穩(wěn)定度 ( (八八) )基線(xiàn)平直度基線(xiàn)平直度( (一一) )波長(zhǎng)準(zhǔn)確度和波長(zhǎng)重復(fù)性波長(zhǎng)準(zhǔn)確度和波長(zhǎng)重復(fù)性 波長(zhǎng)準(zhǔn)確度也叫波長(zhǎng)精度，是指儀器波長(zhǎng)準(zhǔn)確度也叫波長(zhǎng)精度，是指儀器波長(zhǎng)指示器上所指示的波長(zhǎng)值與儀器實(shí)際輸波長(zhǎng)指示器上所指示的波長(zhǎng)值與儀器實(shí)際輸出的波長(zhǎng)值之間的符合程度。出的波長(zhǎng)值之間的符合程度。 波長(zhǎng)重復(fù)性是指在對(duì)同一個(gè)吸收帶或波長(zhǎng)重復(fù)性是指在對(duì)同一個(gè)吸收

15、帶或發(fā)射線(xiàn)進(jìn)行多次測(cè)量時(shí)，峰值波長(zhǎng)測(cè)量結(jié)果發(fā)射線(xiàn)進(jìn)行多次測(cè)量時(shí)，峰值波長(zhǎng)測(cè)量結(jié)果的一致程度。的一致程度。 一、 紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)( (二二) )光度準(zhǔn)確度光度準(zhǔn)確度 是指儀器在吸收峰上讀出的透射率或吸是指儀器在吸收峰上讀出的透射率或吸光度與已知真實(shí)透射率或吸光度之間的偏差。光度與已知真實(shí)透射率或吸光度之間的偏差。該偏差越小，光度準(zhǔn)確度越高。該偏差越小，光度準(zhǔn)確度越高。 ( (三三) )光度線(xiàn)性范圍光度線(xiàn)性范圍 是指儀器光度測(cè)量系統(tǒng)對(duì)于照射到接收是指儀器光度測(cè)量系統(tǒng)對(duì)于照射到接收器上的輻射功率與系統(tǒng)的測(cè)定值之間符合線(xiàn)器上的輻射功率與系統(tǒng)的測(cè)定值之間符合線(xiàn)

16、性關(guān)系的功率范圍，即儀器的最佳工作范圍。性關(guān)系的功率范圍，即儀器的最佳工作范圍。 一、 紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)( (四四) )分辨率分辨率 分光光度計(jì)的分辨率是指儀器對(duì)于緊密分光光度計(jì)的分辨率是指儀器對(duì)于緊密相鄰的峰可分辨的最小波長(zhǎng)間隔，反映儀器相鄰的峰可分辨的最小波長(zhǎng)間隔，反映儀器分辨吸收光譜微細(xì)結(jié)構(gòu)的能力，是衡量?jī)x器分辨吸收光譜微細(xì)結(jié)構(gòu)的能力，是衡量?jī)x器性能的綜合指標(biāo)。性能的綜合指標(biāo)。 ( (五五) )光譜帶寬光譜帶寬 是指從單色器射出的單色光最大強(qiáng)度的是指從單色器射出的單色光最大強(qiáng)度的1/2處的譜帶寬度。處的譜帶寬度。 一、 紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的

17、性能指標(biāo)可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)( (六六) )雜散光雜散光 除所需波長(zhǎng)單色光以外其余所有的光都除所需波長(zhǎng)單色光以外其余所有的光都是雜散光，雜散光是測(cè)量過(guò)程中的主要誤差是雜散光，雜散光是測(cè)量過(guò)程中的主要誤差來(lái)源，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)準(zhǔn)確度。來(lái)源，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)準(zhǔn)確度。( (七七) )基線(xiàn)穩(wěn)定度基線(xiàn)穩(wěn)定度 基線(xiàn)穩(wěn)定度是指在不放置樣品的情況基線(xiàn)穩(wěn)定度是指在不放置樣品的情況下，掃描下，掃描100%100%T T或或0%0%T T時(shí)讀數(shù)偏離的程度。時(shí)讀數(shù)偏離的程度。( (八八) )基線(xiàn)平直度基線(xiàn)平直度 是指在不放置樣品的情況下，掃描是指在不放置樣品的情況下，掃描100%100%T T或或0%0%T T時(shí)基線(xiàn)

18、傾斜或彎曲的程度。時(shí)基線(xiàn)傾斜或彎曲的程度。 一、 紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)可見(jiàn)分光光度計(jì)的性能指標(biāo)二二、影響因素影響因素 （一）單色光不純的影響（一）單色光不純的影響 （二）雜散光的影響（二）雜散光的影響 （三）吸收池的影響（三）吸收池的影響 （四）電壓、檢測(cè)器負(fù)高壓波動(dòng)的影響（四）電壓、檢測(cè)器負(fù)高壓波動(dòng)的影響 （五）儀器狹縫寬度的影響（五）儀器狹縫寬度的影響 （六）背景吸收的影響（六）背景吸收的影響 （七）其它因素的影響（七）其它因素的影響二、 影響紫外影響紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)準(zhǔn)確性的因素可見(jiàn)分光光度計(jì)準(zhǔn)確性的因素 第四節(jié)第四節(jié) 紫外紫外- -可見(jiàn)分光光度計(jì)的可見(jiàn)分光光度計(jì)的 常見(jiàn)故障及排除方法常見(jiàn)故障及排除方法故障現(xiàn)象故障原因排除方法接通電源后，指示燈不亮，儀器不工作 電源線(xiàn)接觸不良，保險(xiǎn)絲壞，電路故障 接好電源線(xiàn)，檢查保險(xiǎn)絲，更換新的保險(xiǎn)絲不能調(diào)零（即0T） 光門(mén)不能完全關(guān)閉微電流放大器損壞 檢修光門(mén)蓋，更換放大器 不能置100T 光能量不夠，光源損壞比色器架沒(méi)安裝到位，光門(mén)未完全打開(kāi) 變換靈敏度開(kāi)關(guān)，調(diào)整光源更換新的光源檢查比色器架子，擺正位置檢修光門(mén) 測(cè)光精度不準(zhǔn) 波長(zhǎng)移位，吸收池受污染樣品混濁，配制溶液不準(zhǔn)確 進(jìn)行波長(zhǎng)校正，清洗吸