1、 水中細菌總大腸菌群水中細菌總大腸菌群的測定的測定 周艷艷周艷艷 2013.9.9 2013.9.9 執行標準執行標準: : 生活飲用水衛生標準（GB/T 5749-2006） 生活飲用水標準檢驗方法（GB/T 5750.12-2006） 總大腸菌群（MPN/100ml）：不得檢出一一 、基本概念、基本概念n總大腸菌群總大腸菌群:是指一群在37OC培養24小時能發酵乳糖，產酸產氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。在飲用水的微生物安全監測中，大腸菌群是水的糞便污染指標菌，以該菌的檢出情況來表示水中有無糞便污染及其程度。因為糞便中可能會帶有一些腸道致病菌，所以水中總大腸菌群數的高低，也反映了

2、其對人體健康危害性的大小。食品中大腸菌群數系以100g(ml)檢樣內大腸菌群最可能數(MPN)表示。MPNMPN:最大可能數的簡稱.表示樣品中活菌的密度.是用概率論來推算樣品中菌數近似的數值。常用的單位常用的單位: : 液體大腸實驗-MPN/100ml二、實驗原理二、實驗原理n應用乳糖蛋白胨液體培養基,并倒置一杜氏發酵小管.乳糖能起選擇作用,因為很多細菌不能發酵乳糖,而大腸菌群能發酵乳糖而產酸產氣。細菌產酸后,培養基即由原來的紫色變為黃色。 產氣情況可通過倒置小管中的氣泡來觀察。 三、實驗器材三、實驗器材 1、恒溫培養箱（361 ）、電子天平、 滅菌培養皿、試管等。 2、培養基及試劑： 乳糖膽

3、鹽發酵管、伊紅美藍瓊脂平板（EMB）等。四、實驗步驟四、實驗步驟n1、初發酵實驗n2、分離培養（伊紅美藍平板）n3、革蘭氏染色n4、復發酵實驗n5、觀察結果并填寫實驗記錄五、實驗方法五、實驗方法1、 分離劃線挑選產酸產氣的發酵管，接種至伊紅美藍平板（分區劃線法）。 第一區劃線第一區劃線滅菌接種環滅菌接種環第二區劃線第二區劃線滅菌接種環滅菌接種環第三區劃線第三區劃線滅菌接種環滅菌接種環n操作要點: 1.劃下一個區前必須滅菌接種環 2.劃線時接種環同平板呈30-40角 3.每次劃線應該壓到上一個區域的2-3條線 4.用接種環的“面”而不是“弧”在平板上滑動2、革蘭氏染色na.涂片：接種環，挑取菌落

4、，無菌水一滴、涂勻nb.干燥：涂布后待其自然干燥nC.熱固定：通過火焰2-3次nd.初染：結晶紫染色液，1min鐘水洗ne.媒染:革蘭氏碘液，作用1min水洗nf.脫色：95%的乙醇，約30s水洗ng.復染:沙黃復染色液，復染1min水洗nh.鏡檢：油鏡觀察鏡檢：革蘭氏陰性呈紅色，革蘭氏陽性呈紫色操作要點：1.選用生長18-24小時的細菌為宜；2.涂片不宜過厚，火焰固定時不宜過熱；(固定的的作用是殺死細菌，使菌體蛋白質凝固在載玻片上，以免染色時被水沖走。)3.酒精脫色時間一般為20-30s，取決于涂片的厚度，脫色不足或過度均會造成染色的假陽性或假陰性。五、整個實驗過程注意事項：五、整個實驗過程注意事項：產酸判斷：紫色培養液變成黃色產氣判斷：發酵導管內有