1、 專(zhuān)題 1 基因工程 1.3 基因工程的基本操作程序 一、 目的基因的獲取 1.1. 從基因文庫(kù)中獲取 基因文庫(kù)種類(lèi)：_ 。 2 2 .利用 PCRPCR 技術(shù)擴(kuò)增目的基因 (1) _ 含義：是一項(xiàng)在生物體外 的核酸合成技術(shù)。 (2) 原理： _ 。 (3) 過(guò)程：第一步，加熱至 9095 9095 C DNADNA 解鏈為 _;第二步，冷卻至 _ _ ，引物與兩條單鏈 DNDNA A ;第三步，加熱至 7075 7075 C, _ _ 從引物起始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的合成。 (4) _ 特點(diǎn)： 形式擴(kuò)增。 3 3 人工合成法：如果基因較小，核苷酸序列又已知，可以通過(guò) _用化學(xué)方法直接人 工合成。 二、

2、 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 1.1. _ 組成：目的基因、 _ 、 、標(biāo)記基因。 2 2 .功能：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以 _給下一代；使目的基因能 夠 _ 和發(fā)揮作用。 3 3.啟動(dòng)子：位于基因的首端， 是 _ 酶識(shí)別和結(jié)合的部位， 能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mRNAmRNA 4 4 .終止子：位于基因的尾端，功能是終止 _ 。 5 5.標(biāo)記基因：鑒別受體細(xì)胞中是否含有 _ ,從而將符合要求的受體細(xì)胞篩選出來(lái)。 三、 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi) _的過(guò)程。 1.1. 將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 (1)(1) 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 (采用最多的方法) 農(nóng)桿菌特

3、點(diǎn)：易感染 _ 植物和裸子植物，對(duì) _ 植物沒(méi) 有感染力；TiTi 質(zhì)粒的 _ 可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的 _ _ 上。 轉(zhuǎn)化過(guò)程：構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入 _ T導(dǎo)入植物細(xì)胞T _ 2 目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和 .表達(dá)。 (2 2 )基因槍法 基因槍法：是單子葉植物中常用的一種基因轉(zhuǎn)化方法，但是成本較高。 (3 3 )花粉管通道法：我國(guó)獨(dú)創(chuàng)的一種方法 2 2 將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞 (1) 方法： _ 。 (2) 操作程序：目的基因表達(dá)載體 T取卵( (受精卵) )T顯微注射T注射了目的基因的受精卵移植 到 _ 性動(dòng)物的 _ 內(nèi)發(fā)育 T新性狀動(dòng)物。 3 3 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)

4、胞 (1 1 )原核生物特點(diǎn)： _ 、多為 _ 、 _ 相對(duì) 較少等。 (2)(2)_ 大腸桿菌最常用的轉(zhuǎn)化方法是： _ 處理細(xì)胞，成為 _ 細(xì) 胞T表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 T _ 細(xì)胞吸收 DNADNA 分子。 四、目的基因的檢測(cè)與鑒定 1 1 .檢測(cè)及方法 (1)_ 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNADNA上是否插入了 _ ，采用 DNADNA 分子雜交技術(shù)。 (2)_ 檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 ，采用分子雜交技術(shù)。 (3)_ 檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)， 采用 _ 雜交技術(shù)。 2 2 鑒定：除了分子檢測(cè)外，還需要進(jìn)行 _ 水平的鑒定，如抗蟲(chóng)、抗病鑒定等。 1 1 .基因組文庫(kù)、cDNAc

5、DNA 文庫(kù) 2.2. ( 1 1)復(fù)制特定 DNADNA 片段 (2(2) DNADNA 雙鏈復(fù)制 (3)(3) 單鏈 5050 C C 左右 結(jié)合 Taq酶 (4(4)指數(shù) 3 3 3. DNADNA 合成儀 1 1 啟動(dòng)子 終止子 2 2 .遺傳 表達(dá) 3 3. RNARNA 聚合 4 4 轉(zhuǎn)錄過(guò)程 5 5目的基因 三、維持穩(wěn)定和表達(dá) 1.1. ( 1 1)雙子葉 單子葉 T T DNA DNA 染色體 DNADNA 農(nóng)桿菌 將目的基因插入染色體的 DNADNA 上 2.2. ( 1 1)顯微注射法 (2 2)雌 輸卵管或子宮 3.3. ( 1 1)繁殖快 單細(xì)胞 遺傳物質(zhì) (2 2)用

6、鈣離子 感受態(tài) 在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài) 四、1 1.( 1 1) 目的基因 (2) mRNAmRNA (3) 抗原一抗體 2.2. 個(gè)體生物學(xué) 1.1. 幾種目的基因獲取方法的比較 方法 從基因文庫(kù)中獲取 人工合成 從基因組文 庫(kù)中獲取 從部分基因文庫(kù)，如 cDNAcDNA 文庫(kù)中獲取 化學(xué)合成法 反轉(zhuǎn)錄法 4 1 1 如圖為基因工程中目的基因的獲取示意圖，下列敘述不正確的是 A.A. 表示 PCRPCR 支術(shù)，用來(lái)擴(kuò)增目的基因 B.B. 可以根據(jù)目的基因的相關(guān)信息從基因文庫(kù)中獲取所需的目的基因 C.C. 若獲取的目的基因相同，則圖中基因組文庫(kù)小于 CDNACDNA文庫(kù) D.D. 若基因比

7、較小，核苷酸序列又已知，則可以直接通過(guò)人工合成的方法獲取 【參考答案】C C 【試題解析】表示 PCRPCR 技術(shù)，可大量擴(kuò)增目的基因， A A 正確。可以根據(jù)目的基因的相關(guān)信息，如核苷 酸序列、基因功能、基因在染色體上的位置等，從基因文庫(kù)中得到所需的目的基因， B B 正確。基因組文 庫(kù)包括一種生物所有的基因， cDNAcDNA 文庫(kù)只包含一種生物的部分基因，故基因組文庫(kù)大于 cDNAcDNA 文庫(kù)，C C 錯(cuò)誤。若基因比 較小，核苷酸序列又已知，則可以通過(guò) DNADNA 合成儀用化學(xué)方法直接人工合成， D D 正確。 2 2 .基因表達(dá)載體中啟動(dòng)子、終止子的來(lái)源 供體細(xì)臉中的 DNA I

8、限制醫(yī). 悴棗 DNA片股. I価入一 導(dǎo)扎. 基田組又庫(kù) f - 外何 DMA擴(kuò)增 產(chǎn)生特定性憂 I 分離 目的基因 目曬挺土?xí)AniKNA. 1辰蛉錄 單鋌 DNA 4合成. 九璉 DNA I 捕入一 裁犠 1導(dǎo)人 受體菌群. - 1井禺- 目的基園. 蛋白質(zhì)的氨 基酸序列, I推浪 mRNA的核昔 酸宇列 I推測(cè)* 結(jié)構(gòu)基因的核 昔酸序列H I化學(xué)音成. 目的基 SmRNA- .艮轉(zhuǎn);錄- I D.01r TDNAE.l 目的 基因 CDNA文障 燕*目的基S 5 (1)(1) 如果目的基因是從自然界中已有的物種中分離出來(lái)的，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，不需要在質(zhì)粒上 目的基因的前后端接上特定的

9、啟動(dòng)子、終止子，因?yàn)槟康幕蛑幸押袉?dòng)子、終止子。 (2 (2 )如果目的基因是通過(guò)人工方法合成的，或通過(guò) cDNAcDNA 文庫(kù)獲得的，則目的基因是不含啟動(dòng)子和終止 子的。若只將基因的編碼序列導(dǎo)入受體生物中，目的基因沒(méi)有啟動(dòng)子、終止子，是無(wú)法轉(zhuǎn)錄的， 因此，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要在與質(zhì)粒結(jié)合之前，在目的基因的前后端接上特定的啟動(dòng)子、 終止子。 2 2 .下列關(guān)于基因表達(dá)載體構(gòu)建的敘述中，不正確的是 A.A. 需要限制酶和 DNADNA 連接酶 B.B. 抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因 C.C. 在細(xì)胞外進(jìn)行 D.D. 啟動(dòng)子位于目的基因的首端，是啟動(dòng)翻譯的一段 DNADNA 【參考答案】

10、D D 【試題解析】構(gòu)建基因表達(dá)載體過(guò)程中需要用限制酶切割目的基因和載體，然后用 DNADNA 連接酶把目的基 因和載體連接起來(lái)，A A 正確；抗生素抗性基因可以用作標(biāo)記基因， B B 正確；基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程一 般在細(xì)胞外進(jìn)行，C C 正確；啟動(dòng)子位于目的基因的首端，是啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的一段 DNA DDNA D 錯(cuò)誤。 3 3 .將目的基因?qū)氩煌荏w細(xì)胞的過(guò)程 生物種類(lèi) 植物 動(dòng)物 微生物 常用方法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 顯微注射技術(shù) 感受態(tài)細(xì)胞法 受體細(xì)胞 體細(xì)胞或 受精卵 受精卵 原核細(xì)胞 轉(zhuǎn)化過(guò)程 將耳的基因插入到 Ti 質(zhì) 粒的 TDNA上 f 農(nóng)桿菌 導(dǎo)入植物細(xì)胞整合 到受卑細(xì)抱決色 f

11、本的 DNA上 f 表達(dá). 將自育目的基因的表達(dá) 黃仏提処戢卵(.畫(huà)箱 卵一顯微注肘受精卵 發(fā)育獲得具有新性狀 的動(dòng)物 的廣處理細(xì)胞餵曼態(tài) 紙胞一童組表達(dá)載體 DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞 混臺(tái)一感受態(tài)細(xì)膛吸收 DNA分子* 3 3 .將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞需采用不同方法，將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞常用 6 A.A. 花粉管通道法 B.B. 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 C.C. 感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法 D.D. 顯微注射法 【參考答案】 D D 【試題解析】花粉管通道法適用于將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞， A A 錯(cuò)誤；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因?qū)?植物細(xì)胞采用最多的方法， B B 錯(cuò)誤；感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化法適用于將目的基因?qū)胛⑸?/p>

12、物細(xì)胞， C C 錯(cuò)誤；顯 微注射法適用于將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞， D D 正確。 【易錯(cuò)警示】 與基因工程操作有關(guān)的幾個(gè)易錯(cuò)點(diǎn) （1 1） 目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的：基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控，所以目的基因應(yīng)插入到啟 動(dòng)子與終止子之間的部位。 （2 2） 基因工程操作過(guò)程中只有第三步（將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞）沒(méi)有堿基互補(bǔ)配對(duì)現(xiàn)象。 （3 3） 原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。 （4 4） 轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)是目的基因整合到受體細(xì)胞的基因組中。 （ 5 5）一般情況下，用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段，但有時(shí)可用兩種限制酶分別切割質(zhì) 粒和目的基因，

13、這樣可避免質(zhì)粒和質(zhì)粒之間、目的基因和目的基因之間的連接。 （6 6）標(biāo)記基因的作用：篩選、檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常見(jiàn)的標(biāo)記基因有抗生素抗性基因、發(fā) 光基因（表達(dá)產(chǎn)物為帶顏色的物質(zhì)）等。 （7 7）在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子（ DNADNA 片段）工起始密碼子（RNA RNA ;終止子（DNADNA 片段）工終止密碼子 （ RNARNA）。 1.1. 基因工程的操作步驟： 使目的基因與運(yùn)載體相結(jié)合 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 檢測(cè)目的基因的表達(dá)是否符合特定性狀要求 提取目的基因 正確的操作順序是 A.A. B B . 7 C.C. D D . 2.2. 有關(guān)基因工程的敘述正確的是6 6. 8

14、A.A. DNADNA 分子經(jīng)限制酶切割都產(chǎn)生黏性末端 B.B. 基因表達(dá)載體的形成在細(xì)胞內(nèi)元成 C.C. 載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因 D.D. 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料 某科學(xué)家從細(xì)菌中分離出耐高溫淀粉酶（ AmyAmy 基因 a a,通過(guò)基因工程的方法，將基因 a a 與載體結(jié)合后導(dǎo) 入馬鈴薯植株中，經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn) AmyAmy 在成熟塊莖細(xì)胞中存在。下列有關(guān)這一過(guò)程的敘述不正確的是 A.A. 獲取基因 a a 時(shí)限制酶的作用部位是圖中的 B.B. 連接基因 a a 與載體的 DNADNA 連接酶的作用部位是圖中的 C.C. 基因 a a 進(jìn)入馬鈴薯細(xì)胞后，可隨

15、馬鈴薯 DNADNA 分子的復(fù)制而復(fù)制， 傳給子代細(xì)胞 D.D. 通過(guò)該技術(shù)人類(lèi)可定向改造馬鈴薯的遺傳性狀 將乙肝抗原基因?qū)氲浇湍妇校ㄟ^(guò)發(fā)酵能大量生產(chǎn)乙肝疫苗。下列敘述正確的是 A.A. 目的基因在酵母菌中表達(dá)出抗體 B.B. 目的基因的表達(dá)需要線粒體提供能量 C.C. 構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需用限制性核酸內(nèi)切酶和 DNADNA 聚合酶 D.D. 受體菌內(nèi)目的基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯發(fā)生在同一場(chǎng)所 某研究所的研究人員將生長(zhǎng)激素基因通過(guò)質(zhì)粒介導(dǎo)進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，來(lái)表達(dá)產(chǎn)生生長(zhǎng)激素。己知質(zhì) 粒中存在兩個(gè)抗性基因： A A 是抗鏈霉素基因，B B 是抗氨芐青霉素基因，且目的基因要插入到基因 B B 中,

16、 而大腸桿菌不帶有任何抗性基因。下列敘述錯(cuò)誤的是 A.A. 大腸桿菌可能未導(dǎo)入質(zhì)粒 B.B. 導(dǎo)入大腸桿菌的可能是重組質(zhì)粒，也可能是質(zhì)粒 C.C. 可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基檢測(cè)大腸桿菌中是否導(dǎo)入了重組質(zhì)粒 D.D. 在含氨芐青霉素培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)，在含鏈霉素培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的可能是符合生產(chǎn)要求的大腸桿菌 如圖為形成 CDNACDNA過(guò)程和 PCRPCR 擴(kuò)增過(guò)程示意圖。據(jù)圖分析，下列說(shuō)法正確的是9 A.A. 催化過(guò)程的酶是 RNARNA 聚合酶 B.B. 過(guò)程發(fā)生的變化是引物與單鏈 DNADNA 吉合 C.C. 催化過(guò)程的酶都必須能耐高溫 D.D. 過(guò)程需要解旋酶 7 7 基因工程是在 DNAD

17、NA 分子水平進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的以下步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的是 人工合成目的基因 E. coli DNADNA 連接酶結(jié)合目的基因與載體 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測(cè)和表達(dá) 個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定 A. B B . C.C. D D . 8 8如圖表示用化學(xué)方法合成目的基因 I的過(guò)程。據(jù)圖分析，下列敘述正確的是 - DN A單鏈汕 - DN冼單議b a I - 丄丄衛(wèi)JLLJJ, L _ 2矽.0 DNA單詵( (1 J A.A. 過(guò)程需要 DNADNA 連接酶 B.B. 過(guò)程需要限制性核酸內(nèi)切酶 C.C. 目的基因 I的堿基序列是已知的 D.D. 若某質(zhì)粒能與目的基因

18、I重組，則該質(zhì)粒和目的基因 I的堿基序列相同 9 9如圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)可食用疫苗的部分過(guò)程，其中 Pst I、Smat、ECORI、Apai為四種限制 性核酸內(nèi)切酶。下列有關(guān)說(shuō)法中正確的是 J 1 7(K75 r - - 55-60 ： 9095 T 10 A.A. 圖示過(guò)程是基因工程的核心步驟，所需的限制性核酸內(nèi)切酶均來(lái)自原核生物 B.B. 圖示中構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需用到一種限制性核酸內(nèi)切酶 C.C. 一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的核糖核苷酸序列 D.D. 抗卡那霉素基因的存在有利于將含有抗原基因的細(xì)胞篩選出來(lái) 10 10 若要利用某目的基因（見(jiàn)圖甲）和 P1P1 噬菌體載

19、體（見(jiàn)圖乙）構(gòu)建重組 DNADNA（見(jiàn)圖丙），限制性核酸內(nèi) 切酶的酶切位點(diǎn)分別是 Bgl II II （A AGATCTGATCT、E COR I I （&AATTC &AATTC 和 Sau 3A I 3A I GATCGATC。下列分析合 理的是 黑不3牛恂講畑詢(xún):上的徘列M 豪氓 說(shuō) 乙 丙 A.A. 用E COR I I 切割目的基因和 P1P1 噬菌體載體 B.B. 用Bgl IIII 和E COR I I 切割目的基因和 P1P1 噬菌體載體 C.C. 用Bgl IIII 和Sau 3A 3A I I 切割目的基因和 P1P1 噬菌體載體 D.D. 用E COR I I 和Sau

20、3A 3A I I 切割目的基因和 P1P1 噬菌體載體 11.11. 科學(xué)家在某種農(nóng)桿菌中找到了抗枯萎病的基因，并以 TiTi 質(zhì)粒作為載體，采用轉(zhuǎn)基因方法培育出了抗枯 萎病的金花茶新品種。下列有關(guān)敘述正確的是 A.A. 質(zhì)粒是最常用的載體之一，質(zhì)粒的存在與否對(duì)宿主細(xì)胞的生存有決定性的作用 B.B. 應(yīng)將抗枯萎病基因?qū)胧芫眩駝t不能達(dá)到該基因在各組織細(xì)胞中都表達(dá)的目的 C.C. 抗枯萎病基因能在金花茶細(xì)胞中表達(dá)，是因?yàn)閮烧叩?DNADNA 結(jié)構(gòu)相同 D.D. 通過(guò)該方法獲得的抗枯萎病金花茶，將來(lái)產(chǎn)生的花粉中不一定含有該抗病基因 12.12. 如圖為某種質(zhì)粒的簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制性核

21、酸內(nèi)切酶 EcoFU、BanH HI I 的酶切位點(diǎn)，P P 為轉(zhuǎn)錄 的啟動(dòng)部位。已知目的基因的兩端有 ECORI、BanHI的酶切位點(diǎn)，受體細(xì)胞為無(wú)任何抗藥性的原核細(xì) 胞。下列有關(guān)敘述正確的是11 形成的產(chǎn)物有兩種 B. DNADNA 連接酶的作用是將酶切后得到的黏性末端連接起來(lái)形成一個(gè)重組質(zhì)粒，該過(guò)程形成兩個(gè)磷酸二 酯鍵 C. 為了防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自身環(huán)化，酶切時(shí)可選用的酶是 EcoR RI和BanHI D. 若受體細(xì)胞能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，則表明該目的基因已成功導(dǎo)入該細(xì)胞 13.13. 北極比目魚(yú)有抗凍基因，其編碼的抗凍蛋白具有 1111 個(gè)氨基酸的重復(fù)序列，該序列重復(fù)次

22、數(shù)越多，抗凍 能力越強(qiáng)。如圖是獲取轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的過(guò)程示意圖，有關(guān)敘述正確的是 A.A. 將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)依次相連成能表達(dá)的新基因，不能得到抗凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白 B.B. 過(guò)程獲取的目的基因，可用于基因工程和比目魚(yú)基因組測(cè)序 C.C. 過(guò)程需要的工具酶是 RNARNA 聚合酶 D.D. 采用 DNADNA 探針可以檢測(cè)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達(dá) 1414如圖是從酵母菌中獲取某植物需要的某種酶的基因的流程，結(jié)合所學(xué)知識(shí)及相關(guān)信息回答下列問(wèn)題: (1) _ 圖中 cDNAcDNA 文庫(kù) (選填“大于” “等于”或“小于”)基因組文庫(kù)。 A.A.將含有目的基因的 DNAD

23、NA 與質(zhì)粒分別用EcoR RI酶切，在 DNADNA 連接酶作用下，生成由兩個(gè) DNADNA 片段連接 州岳器 抗性確田 四環(huán)1E 耳泅 12 (2) _ 過(guò)程提取的 DNADNA 需要_ 的切割；B B 過(guò)程是 _ 過(guò)程。 (3) _ 獲取目的基因之后，需要進(jìn)行 _ ，其組成必須有 _ _ 及標(biāo)記基因等，此步驟是基因工程的核心。13 (4) _ 將該目的基因?qū)肽畴p子葉植物細(xì)胞，常采用的方法是 _ ，其能否在此植物體內(nèi) 穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是 _ ，可以用 _ 技術(shù)進(jìn)行檢 測(cè)。 15 15 為增加油菜種子的含油量，科研人員將轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因與酶 D D 基因相連，導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油 菜品種。

24、 Ho基因 (1(1)研究人采用 PCRPCR 技術(shù)獲取酶 D D 基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因，該技術(shù)是利用 _ 的原理，使 相應(yīng)基因呈指數(shù)增加。所含三種限制酶( Xba、Clal l、Sad )的切點(diǎn)如圖所示，則用 _ _ 和 _ 酶處理兩個(gè)基因后，可得到兩基因相連的融合基因。 (2)(2) 將上述融合基因插入上圖所示 _TiTi 質(zhì)粒的 中， 構(gòu)建基因表達(dá)載體并導(dǎo)入農(nóng)桿菌 中。為了獲得含融合基因的單菌落，應(yīng)進(jìn)行的操作是 _ ，然 后再利用液體培養(yǎng)基將該單菌落振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液。 (3)(3) 剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間， _ 此過(guò)程的目的是 ; 進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞

25、， 依據(jù) _原理，可將其培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。 (4)(4) _ 用 法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)。 1616.( 2016 2016 新課標(biāo) 1 1 卷)某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源 DNADNA 插入到Amp或Tet中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活 (Amp表示氨芐青霉素抗性基因， Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用 BamHI I 酶切后, 與用BamHI I 酶切獲得的目的基因混合，加入 DNADNA 連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸 桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基 因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了

26、目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。回答下列問(wèn)題: Ti質(zhì)粒 Cil Ctu | 14 (1 (1 )質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有 _ (答出兩點(diǎn)即可)套制原點(diǎn) 6 6【答案】 B B 15 而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。 2 2）如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目 的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是 _ ；并且 _ 和 _ 的細(xì) 胞也是不能區(qū)分的，其原因是 _ 。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因 的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有是 3 3）基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造

27、后可以作為載體，其 【解析】DNADNA 分子經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生末端，但有黏性末端和平末端， A A 錯(cuò)誤。基因表達(dá)載體的形成在細(xì) 胞外完成， B B 錯(cuò)誤。載體質(zhì)粒通常采用抗生素抗性基因作為篩選標(biāo)記基因， 中氨基酸的排列順序，再根據(jù)密碼子表能推測(cè)出基因中脫氧核苷酸的排列順序， D D 正確。 3 3【答案】 B B 之間的氫鍵，連接基因 a a 與載體的 DNADNA 連接酶的作用部位是圖中的處, 薯細(xì)胞后，可隨馬鈴薯 DNADNA 分子的復(fù)制而復(fù)制，傳給子代細(xì)胞， C C 正確；通過(guò)該技術(shù)人類(lèi)可定向改造馬 鈴薯的遺傳性狀，D D 正確。 4 4【答案】 B B 解析】將乙肝抗原基因?qū)氲浇湍?/p>

28、菌中，目的基因在酵母菌中表達(dá)出抗原， 需要能量，而生物體生命活動(dòng)需要的能量主要由線粒體提供， 核酸內(nèi)切酶和 DNADNA 連接酶，C C 錯(cuò)誤；酵母菌是真核生物，目的基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯不在同一場(chǎng)所， D D 錯(cuò)誤。 5 5【答案】 C C 【解析】大腸桿菌可能沒(méi)有導(dǎo)入質(zhì)粒， A A 正確；導(dǎo)入大腸桿菌的質(zhì)粒可能為重組質(zhì)粒，也可能為普通質(zhì) 粒，B B 正確； _ 的固體培養(yǎng)基。 DNADNA 復(fù)制所需的原料來(lái)自于 1 1 【答案】 C C 【解析】基因工程的基本操作步驟主要包括四步：（ 因表達(dá)載體的構(gòu)建，即使目的基因與運(yùn)載體結(jié)合；（ 基因的檢測(cè)與表達(dá)，即檢測(cè)目的基因的表達(dá)。故選 2 2 【答案】

29、D D 1 1 ）目的基因的獲取，即提取目的基因；（ 2 2）基 3 3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，即；（ 4 4）目的 C C。 C C 錯(cuò)誤。知道蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu) 【解析】圖中處是磷酸二酯鍵，是獲取目的基因 a a 時(shí)限制酶的作用部位， A A 正確；處是 DNADNA 堿基對(duì) B B 錯(cuò)誤；目的基因 a a 進(jìn)入馬鈴 A A 錯(cuò)誤；目的基因的表達(dá) B B 正確；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需用限制性 16 由于目的基因要插入到基因 B B 中，即抗氨芐青霉素基因破壞，即工程菌不能抗氨芐青霉素， 因此不能用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基檢測(cè)大腸桿菌中是否導(dǎo)入了重組質(zhì)粒， C C 錯(cuò)誤；據(jù)分析可知，在含氨 芐青霉素培

30、養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)，但在含鏈霉素培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)的可能是符合生產(chǎn)要求的大腸桿菌， D D 正確。 【解析】分析題圖可知，是由 RNARNA 形成單鏈 DNADNA 的過(guò)程，為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶， A A 錯(cuò)誤； 為復(fù)性過(guò)程，發(fā)生的變化是引物與互補(bǔ) DNADNA 鏈結(jié)合，B B 正確；是由單鏈 DNADNA 合成雙鏈 DNADNA 的過(guò)程，即 DNADNA 分子復(fù)制過(guò)程，是延伸過(guò)程，催化過(guò)程的酶必須能耐高溫， C C 錯(cuò)誤；是變性過(guò)程，通過(guò)加熱 使 DNADNA 變性，不需要解旋酶， D D 錯(cuò)誤。 7 7【答案】 C C 【解析】人工合成目的基因的兩種方法都要進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)；目的基因的黏性末

31、端與載體黏性末端要 進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)；目的基因的表達(dá)也要進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)；將已進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)且在 DNADNA 連接酶的 作用下重組的質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞中， 不再進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)； 目的基因的表達(dá)過(guò)程中進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)； 個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定是直接觀察性狀表現(xiàn)，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)。綜上所述，符合題意，故選 C C。 8 8【答案】 C C 【解析】過(guò)程發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，不需要 DNADNA 連接酶，A A 錯(cuò)誤；過(guò)程發(fā)生堿基互補(bǔ)配對(duì)，不需要限 制酶，B B 錯(cuò)誤；用化學(xué)方法人工合成目的基因時(shí)必須知道目的基因的堿基序列， C C 正確；某質(zhì)粒能與目 的基因重組，只需要有相同的黏性末端即可，不必所

32、有序列都相同， D D 錯(cuò)誤。 9 9【答案】 D D 【解析】圖示表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，這是基因工程的核心步驟，所需的限制性核酸內(nèi)切酶一般 來(lái)自原核生物，A A 錯(cuò)誤；構(gòu)建此表達(dá)載體時(shí)需要用到 EcoRl、Pst I兩種限制性核酸內(nèi)切酶， B B 錯(cuò)誤；限 制酶具有特異性，即一種限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列并在特定的位點(diǎn)切 害V, C C 錯(cuò)誤；抗卡那霉素基因作為標(biāo)記基因，主要作用是篩選含有目的基因的受體細(xì)胞， D D 正確。 1010【答案】 D D 【解析】用E coR I I 切割目的基因和 P1P1 噬菌體載體，產(chǎn)生相同的黏性末端，用 DNADNA 連接酶連

33、接時(shí)可能 會(huì)發(fā)生反向連接，A A 錯(cuò)誤；用Bgl IIII 和E coR I I 切割目的基因會(huì)產(chǎn)生兩種 DNADNA 片段，一種含有目的基 因,一種不含目的基因,且含有目的基因的片段與載體結(jié)合時(shí)容易發(fā)生反向連接, B B 錯(cuò)誤；用 Bgl IIII 和Sau3A 3A I I 切割目的基因和 P1P1 噬菌體載體，也能產(chǎn)生相同的黏性末端，可能會(huì)發(fā)生反向連接， C C 錯(cuò)誤； 用E coR I I 和Sau 3A 3A I I 切割目的基因和 P1P1 噬菌體載體，可產(chǎn)生不同的黏性末端，防止發(fā)生反向連接， 這樣目的基因插入載體后，RNARNA 聚合酶的移動(dòng)方向肯定與圖丙相同， D D 正確。

34、1111【答案】 D D 【解析】一般來(lái)說(shuō),質(zhì)粒對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害,即質(zhì)粒存在與否對(duì)宿主細(xì)胞生存沒(méi)有決定性的作用, A A 錯(cuò) 誤；由于植物細(xì)胞具有全能性,則轉(zhuǎn)基因植物的受體細(xì)胞可以是受精卵或體細(xì)胞, B B 錯(cuò)誤；抗枯萎病 基因之所以能在金花茶細(xì)胞中表達(dá),原因是兩者共用一套遺傳密碼,并且基因表達(dá)方式相同, C C 錯(cuò) 17 誤； 導(dǎo)入受體細(xì)胞的抗枯萎病基因是單個(gè)的,而花粉是減數(shù)分裂后的產(chǎn)物,因此有的花粉是不帶有抗 性基因的， D D 正確。 12 12 【答案】 C C 【解析】如果將含有目的基因的 DNADNA 與質(zhì)粒分別用EccR RI酶切，則酶切后二者的黏性末端相同，在 連接酶作用下，生成

35、由兩個(gè) DNADNA 片段連接形成的產(chǎn)物有三種，其中只有一種符合基因工程的需求； DNADNA 連接酶的作用是將酶切后的目的基因和質(zhì)粒的黏性末端連接起來(lái)形成重組質(zhì)粒，該過(guò)程形成 4 4 個(gè)磷酸 二酯鍵；為了防止目的基因反向連接和質(zhì)粒自身環(huán)化，酶切時(shí)可選用的酶是 EccR RI和BamHI，這樣切 割后得到的 DNADNA 片段兩側(cè)的黏性末端不同；由于受體細(xì)胞為無(wú)任何抗藥性的原核細(xì)胞，因此其能在含 青霉素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，原因可能是目的基因成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，也可能是只導(dǎo)入了不含目的基因的 載體。 1313【答案】 A A 【解析】將多個(gè)抗凍基因編碼區(qū)相連形成的能表達(dá)的新基因可能不再是抗凍基因，所以

36、可能得不到抗 凍性增強(qiáng)的抗凍蛋白， A A 正確；圖中是獲取目的基因的過(guò)程，獲取的目的基因，可用于基因工程，但 不能用于比目魚(yú)基因組測(cè)序， B B 錯(cuò)誤；過(guò)程需要的工具酶是 DNADNA 聚合酶，C C 錯(cuò)誤；利用 DNADNA 探針技術(shù) 檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入到受體細(xì)胞，利用抗原一抗體雜交技術(shù)檢測(cè)目的基因是否表達(dá)， D D 錯(cuò)誤。 1414【答案】( 1 1)小于 ( 2 2)限制酶 反轉(zhuǎn)錄 (3) 基因表達(dá)載體的構(gòu)建啟動(dòng)子、終止子、目的基因(復(fù)制原點(diǎn)可不答) (4) 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 目的基因是否整合到植物細(xì)胞的染色體 DNADNA 上 DNADNA 分子雜交 【解析】 ( 1 1)基因組文庫(kù)包

37、含某種生物所有的基因，部分基因文庫(kù)包含某種生物的部分基因，如 cDNAcDNA 文庫(kù)。(2 2)過(guò)程是獲取目的基因，需要限制酶切割。 B B 過(guò)程是由 mRNmRN 猷取 DNADNA 的過(guò)程，是反轉(zhuǎn)錄過(guò) 程。( 3 3)基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心，目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以 遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用。基因表達(dá)載體的組成包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因。 ( 4 4)受體細(xì)胞是雙子葉植物，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因轉(zhuǎn)入到受體細(xì)胞中，目的基因能否在此植 物體內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是目的基因是否整合到受體細(xì)胞的染色體 DNADNA 上，可以用 DNADNA 分子雜交技術(shù)進(jìn) 行檢測(cè)。 1515.【答案】(1 1) DNADNA 雙鏈復(fù)制 Clal DNA Clal DNA 連接 ( 2 2) T T- -DNA DNA 將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上